【关键词】 受体
关键词 :受体，维生素D;基因;聚合酶链反应;骨质疏松 中图号:R394.3 文献标识码:A
摘 要:目的 为研究我国哈萨克族与汉族维生素D受体基因多态性分布与骨质疏松的关系. 方法 采用聚合酶链反应（PCR）限制性片段长度多态性技术，对哈萨克族（年龄50±2岁）的健康妇女93例，和汉族（年龄59±3岁）健康妇女179例进行VDR基因检测. 结果 在中国哈萨克族93例中，bb型44例（47%），Bb型45例（48%），BB型4例（4%）;在汉族179例中，bb型162例（90%），Bb型17例（10%），未见BB型. 结论 中国哈萨克族VDR基因多态性分布与汉族相比存在非常显著性差异（P&<0.005）.
Keywords:receptor，vitamin D;genes;polymerase chain reac-tion;osteoporosis
Abstract:AIM To explore the difference between Kazakh and the Han in the distribution of vitamin D receptor（VDR）gene polymorphism.METHODS VDR genotypes in179health postmenopausal women of the Han nationality（age:59±3years），and in93those of the Kazakh（age:50±2years），and also in17cases of osteoporosis patients were ana-lyzes by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism.RESULTS Frequencies of bb，Bb and BB genotype are90%，10%and0%in the the Han，and47%，48%and4%in the Kazakh respectively.A significant differ-ence is found in the frequency distribution of VDR genotype between the Han and the Kazakh（P&<0.005）.CONCLU-SION Han and Kazakh differ in the frequency distribution of VDR genotype.
0 引言
维生素D受体（vitamin D receptor VDR）基因多态性，由位于12q 13 的等电位基因控制.1994年，Morrison等［1］ 研究报告，VDR基因在内切酶BsmⅠ，ApaⅠ，TagⅠ作用下，呈限制性内切酶片段长度多态性.并且与骨密度（bone mineral density，BMD）密切相关.而BMD水平的变化对骨质疏松起着重要的作用.这一领域的研究引起了国内外学者的广泛关注.但是，有研究表明，VDR基因型频率分布具有种族差异性.我们采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术，分析汉族和哈萨克族健康绝经后妇女的VDR基因型，旨在探讨不同种族之间基因型频率分布，为其与BMD和骨质疏松相关的研究提供依据.
1 材料和方法
1.1 材料
汉族对照组为绝经3mo以上妇女179例，平均年龄（59±3）岁.哈萨克族组均为绝经3mo以上的健康妇女93例，平均年龄（50±2）岁.
1.2 方法
取全血2mL，按经典方法提取基因组DNA［2］ .引物按参考［3］ 文献设计.序列为:P1，5′-GAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3′P2，5′-TGGCGGCAGCGGATGTACGTCTGC-3′，按常规程序扩增.取PCR扩增产物10μL加BSmⅠ3U酶切，然后以琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外线检测仪下观察结果.
统计学处理:用SAS软件包，用基因计数法计算基因频率，基因型频率比较用似然比χ2 检验. 2 结果
以基因组DNA为模板，经PCR扩增，VDR基因产物为1850bp.以PCR-RFLP法确定VDR基因，用限制性内切酶BsmⅠ酶切PCR产物，其基因型分布见Fig1.
汉族对照组VDR基因型频率分布共检测179例，按Hardy-weinberq平衡定律计算，VDR基因型频率分布为bb型162例（90%），Bb型17例（10%），未见BB型.哈萨克族VDR基因型频率分布检测93例，bb型44例（47%），Bb型45例（48%），BB型4例（4%）.哈萨克族与汉族之间VDR基因型频率分布比较，差异有非常显著性意义（P&<0.005，Tab1）.表1 各类人群VDR基因型频率分布（略）
3 讨论
国外研究资料显示［1，2］ 健康人群中，美国、澳大利亚、法国人群VDR基因型频率分布，以Bb型最多，约占50%;其次是bb型，约占30%;BB型约占20%.Morrison等［1］ 研究认为，VDR基因BB型BMD偏低，与骨质疏松密切相关，60岁以上健康妇女75%的人低于骨折阈值，容易并发骨折.
我国北京地区汉族VDR基因多态性的分布频率，以bb型最多，占90%.而中国乌鲁木齐地区哈萨克族VDR基因多态性的分布以bb型、Bb型最多，分别占47%和48%.汉族bb型与韩国接近［7］ ，哈萨克族Bb型与澳大利亚、法国接近，为48%，汉族未检出BB型基因.哈萨克族BB型基因为4%，介于日本和韩国之间［5，7］ .
哈萨克族VDR基因型与汉族等的差异，可能与种族、生活环境、生活方式、遗传等多种因素有关.这种种族之间的VDR基因型差异，对我们研究骨质疏松的发病机制、遗传因素和防治有重要意义.
参考文献
［1］Morrison NA Qi JC，Tokita A，Kelly PJ，Crofts L，Nguyen
TV，Sambrook PN，Eismqn JA.Prediction of bone density from vitamin D receptor alleles［J］.Nature，1994;367（6460）:284-287.
［2］Sambrook H.Molecular cloning;a laboratory manual［M］.3rd ed.New York:Cold Spring Harbor Lab，1989:931-958.
［3］Hustmyer FG，Deluca HF，Peacock M.ApaI，BsmI，EcoRV and TaqI polymorphisms at the human vitamin D receptor gene lo-cus in Caucasians，blacks and Asians ［J］.Hum Mol Genet，1993;2（4）:487.
［4］Tao GS，Zhang HH，Chen RY，Neng XW，Liu JW，Gao YH.Vitamin D receptor gene polymorphisms in China［J］.Yazhou Yiyao（Asian Med），1999;10:5-6.
［5］Yamagata Z，Miyamura T，Iijima S，Asaka A，Sasaki M，Kato J，Koizumi K.Vitamin D receptor gene polymorphism and bone mineral density in healthy Japanese women［J］.Lancet，1994;344（8928）:1027.
［6］Garnero P，Borel O，Sornay Rendu E，Selmas PD.Vitamin D receptor gene polymorphisms do not predict bone turnover and bone mass in healthy premenopausal women［J］.J Bone Miner Res，1995;10（9）:1283-1288.
［7］Lim SK，Park YS，Park JM，Song YD，Lee EJ，Kim KR，Lee HC，Huh KB.Lack of association between vitamin D receptor genotypes and osteoporosis in Koreans［J］.J Clin Endocrinol Metab，1995;80（12）:3677-3681.