作者：赵 燕，杨兴斌，海春旭，冯安吉，李晓晔
【关键词】 自由基
关键词: 维生素E;维生素A;梭曼;自由基
摘 要:目的 研究梭曼（soman）对大鼠急性中毒的自由基损伤作用及V
E /VA 的抗氧化保护作用. 方法 雄性大鼠40只，按体质量随机分为阴性组（正常对照组）、阳性组（损伤对照组），VE 组（加VE 保护组）和VA 组（加VA 保护组）.观察每组大鼠血清、大脑、肝脏中VE 、总抗氧化力（T-AOC）和一氧化氮合成酶（NOS）的变化. 结果 梭曼中毒后，T-AOC水平、VE 含量下降，NOS活性提高.中毒前后大鼠肝脏中VE 质量分数从（0.83±0.02）mg g-1 下降至（0.45±0.06）mg g-1 ;T-AOC从（122.7±14.0）mol s-1 kg-1 下降至（70.4±5.4）mol s-1 kg-1 ;NOS从（19.6±2.4）mol s-1 kg-1 上升至（39.3±5.5）mol s-1 kg-1 ，有显著差异（P&<0.05）.而VE /VA 较有效地抑制其变化. 结论 梭曼中毒有明显的过氧化损伤作用，VE /VA 对梭曼中毒有一定的抗氧化保护作用.
Keywords:vitamin E;vitamin A;soman;free radical
Abstract:AIM To study the effects of free radical injury in-duced by soman in rats and antioxidation of VE /VA .METHODS 40male rats were randomly pided into4groups according to weights，i.e.，negative group，positive group，VE group and VA group.The serum，cerebrums and liver VE，NOS and T-AOC（total antioxidative capacity）were determined.RESULTS The VE contents，T-AOC lev-el decreased and NOS activities increased after soman intoxi-cation.In liver，VE contents decreased from（0.83±0.02）mg g-1 to（0.45±0.06）mg g-1 and T-AOC level decreased from（122.7±14.0）mol s-1 kg-1 to（70.4±5.4）mol s-1 kg-1 （P&<0.05），and NOS activities increased from（19.6±2.4）mol s-1 kg-1 to（39.3±5.5）mol s-1 kg-1 （P&<0.05）.And the VE /VA inhibited the change effectively.CONCLU┐SION There is mechanism of free radical injury by soman and protective effect of VE /VA on toxic rats.
VE 和VA 是脂溶性抗氧化剂［1，2］ ，具有重要的生物学功能.梭曼是神经性毒剂的典型代表，其作用的主要靶分子是AchE.梭曼中毒酶老化快，救治困难.梭曼的自由基损伤及VE ，VA 抗氧化保护作用的研究报道尚不多见.我们主要研究了梭曼对大鼠急性中毒的自由基损伤作用及VE ，VA 的抗氧化保护作用.旨在探讨梭曼中毒损伤与脂质过氧化作用的关系及其机制.
1 材料和方法
1.1 材料
梭曼由军事医学科学研究院提供;考马斯亮蓝为Sigma公司产品;VA 和VE 即α-生育酚（DL-α-tocopherol），西德E Merck公司产品;联苯菲罗啉（4，7-diphenyl-1，10-phenanthroline），瑞士Flu-ka AG公司产品.SD雄性大鼠40只，由本校动物中心提供.
1.2 方法
动物按体质量随机分为阴性组（正常对照组）、阳性组（损伤对照组）、VE 组（加VE 保护组）和VA 组（加VA 保护组）.每组10只，实验期10d.动物分组后单笼饲养，采用每日定时ig给药，而阴、阳对照组以同样方法去离子水ig.大鼠饲养10d，阳性组、VE 组和VA 组以0.90LD50 sc梭曼中毒，2h后断头取血，迅速取出肝、大脑等内脏，用生理盐水洗涤表面残血，用滤纸试干，制成100g L-1 组织匀浆液备用.VE 测定采用分光光度法［3］ ;总抗氧化力（T-AOC）、一氧化氮合成酶（NOS）用南京建成生物研究所制试剂盒，严格按照说明书进行操作;蛋白测定采用考马斯亮蓝法，VE 含量以mg g-1 表示，总抗氧化力和一氧化氮合成酶的活力以mol s-1 kg-1 表示.统计学处理:本实验所有数据均以x ±s表示，用t检验法进行处理.
2 结果
2.1 梭曼中毒对大鼠脂质过氧化损伤作用
在给大鼠0.9LD50 剂量梭曼后2h，大鼠出现较为明显的神经性毒剂中毒的症状.中毒后大鼠血清、肝组织和脑组织内VE 含量明显下降，总抗氧化水平也显著下降，而一氧化氮合成酶（NOS）活性却明显提高（Tab1～3）.梭曼中毒后自由基损伤指标有较大的变化，提示其损伤有脂质过氧化损伤的机制.
2.2 梭曼中毒大鼠VE 含量的变化
VE ，VA 组动物在给药保护后，与阳性对照组相比，VA 组大鼠血清、肝和脑中VE 含量均明显升高，说明给动物饲喂抗氧化剂VA 能有效地提高机体VE 的含量;而VE 组大鼠血清、肝中VE 含量高于阴性正常对照组，屏障作用较强的脑组织VE 的含量也基本恢复到正常对照组的水平，说明给动物饲喂抗氧化剂VE 能有效地提高机体VE 的含量，这表明VE 在体内能够贮存，且服用VE 能有效提高其浓度（Tab1）.表1 大鼠的血清、大脑和肝脏中VE 含量（略）
2.3 VE ，VA 对梭曼中毒大鼠T┐AOC的影响
与阳性对照组相比，VE ，VA 保护后，T-AOC水平明显提高，即提高了抗氧化的整体水平，说明VE ，VA 对梭曼氧化损伤有较明显的抑制作用（Tab2）.表2 VE ，VA 对梭曼中毒大鼠的血清、大脑和肝脏中总抗氧化力的影响（略）
2.4 VE ，VA 对大鼠机体NOS活性的影响 VE ，VA 对NOS活性有较明显的影响，VE 组、V A 组与阳性对照组相比，VE ，VA 有效地降低了NOS的活性（Tab3）.说明梭曼损伤有NO自由基损伤机制，VE ，VA 均有抑制其损伤的作用. 表3 VE ，VA 对梭曼中毒大鼠的血清、大脑和肝脏中一氧化氮合成酶活性的影响（略）
3 讨论
VE 具有防止脂质过氧化，改善脂质代谢紊乱，并与延缓人体衰老及预防动脉硬化等有密切关系［4，5］ .我们发现给动物VE 后，动物血清和其他组织VE 含量明显地提高，同时VE 在体内能够贮存，服用VE 能有效提高其抗氧化效能.目前认为，VE 主要定位于细胞膜上，阻止不饱和脂肪酸被氧化形成氢过氧化物，从而保护膜免受氧化损伤.此外，VA 与VE 共存时，VA 的稳定性提高，本实验VE 组补VA 后，也能有效地提高机体VE 的含量，表明VA 与VE 共存时，VA 也有助于VE 稳定性的提高，从而提高抗氧化能力.总抗氧化力（T-AOC）代表体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平，是反映机体抗氧化力的重要指标.机体各抗氧化物之间有着协同、依存和保护作用，所以T-AOC的测定尤为重要.目前，关于T-AOC的报道很少.本结果表明，VE ，VA 均能有效地改善各抗氧化物之间的协同关系，提高机体的总体抗氧化能力，其作用机制可能相当复杂. 梭曼，主要作用于AchE靶分子，使AchE失去水解Ach的能力，引起Ach在突触大量积蓄，导致神经系统功能紊乱.
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