关于大量提取质粒的简便方法

【关键词】 质粒
　　关键词: 质粒;DNA;菌落
　　0 引言
　　质粒提取是分子生物学实验室一项最基本的工作.我们介绍一种非常简便的大量提取质粒方法，此法提取的质粒可直接用于酶切鉴定、转化、探针标记等.菌种为转化了重组pUC19质粒的DH5αE.coli.重组pUC19质粒为在HincII位点插入不同的PCR产物连接而成.
　　
　　1 方法
　　挑一个单菌落接种于5mL LB/Amp（含氨苄青霉素0.1g L-1 ）培养液中，37℃振荡过夜（A=0.6），转1mL菌液于100mL LB/Amp培养液中，37℃振荡过夜（A=0.6），将菌液倒入两个50mL离心管，10000g离心2min，弃去上清，沉淀中加入4mL STET（100g L-1 蔗糖，50mmol L-1 Tris CI pH8.0，50mmol L-1 EDTA pH8.0，20g L-1 Triton X-100），充分混悬细菌后加入8mL0.2mol L-1 NaOH，轻柔混匀，静置3min，加入6mL3mol L-1 醋酸钠（pH4.8～5.2），颠倒混匀68℃水浴10min，12000g离心5min，转移上清至新的50mL离心管，加0.6体积的异丙醇，混匀室温放置10min，12000g离心15min，弃上清，用700mL L-1 乙醇洗涤沉淀，真空干燥，加入1mL TE重溶沉淀，以500μL分装入两个1.5mL离心管，加1μL RNase A（20g L-1 ）混匀后68℃水浴10min，12000g离心3min，转移上清至新的1.5mL离心管，加入300μL异丙醇混匀，室温静置5min，12000g离心10min，倒弃上清，用700mL L-1 乙醇洗涤沉淀两遍，真空抽干，重溶于适量的TE或水中，用BamHI与HindIII酶切鉴定（图1（略））. 　
　　2 讨论
　　目前的大量质粒提取方法都相对烦琐，一般需要4h左右.本方法步骤简便，使大量提取质粒的时间小于2h，产量高，无RNA与基因组DNA污染.本方法特点是省去了酚与氯仿抽提过程，通过68℃水浴与0.6V异丙醇的选择性沉淀作用达到去除大部分蛋白质目的，不用担心痕量酚对后续酶作用的影响［1］ .
　　参考文献:
　　
　　［1］Li YQ，Zhang XY，Fan DM.A rapid one-tube method of mini-preparation of plasmid DNA ［J］.J Cell Mol Immunol，1999;15（1）:63.