【关键词】 肾母细胞瘤; 血管内皮因子; ELISA法
0引言
肿瘤的生长、转移、及其转移部位的生长都有赖于肿瘤组织新生血管的生成［1］. 肿瘤血管的生成有多种血管生长因子参与. 如血管内皮生长因子（VEGF），血小板源性生长因子（PDGF），成纤维细胞生长因子（FGF），转化生长因子（TGF），表皮生长因子（EGF）. 其中，VEGF在肿瘤的血管生成中起着极其重要的作用，可直接或间接刺激宿主的免疫细胞或基质细胞，促进内皮细胞的增殖或迁移，最终导致血管的生长［2］. 我们对35例Wilms瘤患儿血清VEGF含量检测，以探讨VEGF表达在预测Wilms瘤转移中的作用.
1对象和方法
1．1对象
我院小儿外科2001/2003手术的Wilms瘤患儿35(男20，女15)例，体质量(16.2±8.6) kg，年龄（0.3～14）岁，平均（4.5±4.3）岁，根据其病理组织标本特点区分肿瘤的分化程度［3］见表1. Ⅰ期患者术后给予长春新碱，Ⅱ期患者术后给予长春新碱、更生霉素、并辅以放疗. Ⅲ期给予长春新碱、更生霉素、柔红霉素并辅以放疗. Ⅳ期给予长春新碱、更生霉素、柔红霉素、环磷酰胺治疗. 分别在术前、术后1 wk， 2 wk对VEGF蛋白的表达水平进行检测，在 4， 8， 16和32 wk随访Wilms瘤患儿. 选择健康儿童35（男22，女13）例［体质量（16.3±9.0） kg，年龄(0.2～15)岁，平均（4.4±4.2）岁］的血清做对照. 患儿与正常儿童组间年龄、体质量和性别等差异无显著性，两组具可比性.表1患儿肿瘤的分化程度及预后(略)
1．2试剂与方法VEGF检测试剂盒由泰克生物工程有限公司提供. 采用双抗体夹心ELISA法检测. 原理： 抗人VEGF mAb包被于酶标板上，标本和标准品中的VEGF会与mAb结合，未结合物将被洗去. 加人生物素标记的抗人VEGF ，它将与结合在mAb上的人VEGF 结合而形成免疫复合物，辣根过氧化物酶标记的亲和素与生物素结合. 加入显色剂，若反应孔中有VEGF ，将有蓝色出现，加终止液变黄. 测A450 nm值，VEGF 浓度与A450 nm之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中VEGF浓度. 标本收集后冻存于-20℃，避免反复冻融. 具体操作严格按说明书进行.
统计学处理: 采用SPSS统计软件对数据进行处理，患儿术前、术后1 wk 和2 wk组间比较采用重复测量方差分析，患儿术前与对照组间比较和术后32 wk转移组与未转移组间比较采用t检验. P&<0.05为差异显著，P&<0.01为差异非常显著.
Wilms’瘤患儿术前血清VEGF含量显著高于与对照组儿童（P&<0.01），术后1 wk和2 wk时血清VEGF含量降低，与术前对照差异具有显著性（P&<0.01， 表1）. 在4， 8， 16， 32 wk随访有 9例患儿肺转移，其中5例现已死亡. 转移患儿血清VEGF含量增高，与未转移患儿差异有显著性（P&<0.01， 表2）.表235例健康儿童及不同分期的患儿在术前、术后血清VEGF的含量（略）
3讨论
肾母细胞瘤起源于未分化的后肾胚胎，可形成肾的各种成分，是间质组织和上皮细胞组成的恶性混合瘤，主要见于1～5岁小儿. 占小儿泌尿系肿瘤的首位. 近年来随着外科手术、化疗、放疗等综合治疗的开展，肾母细胞的2 a和5 a生存率达到90.7%和68.0％. 其中，Ⅰ期5 a生存率为100％，Ⅱ期74.5％，Ⅲ期35.0％～81.0％，IV期26.0％～54.0％［4］. 在我们的临床观察中，也基本证实此点（表1）. 可见，晚期肿瘤伴有转移的患者其5 a生存率较差. 能够尽早诊断肿瘤转移，选则有效的综合治疗方案是延缓晚期Wilms瘤患儿生存的关键.
VEGF是一种碱性、可分泌肝素的结合蛋白，在血管内皮细胞中，具有诱导钙离子浓度升高，刺激磷酸肌醇代谢，促进血液凝集，血管通透性增大，内皮细胞迁移、管状结构形成，并最终导致血管生成［5］等作用. Mark等［6］ 在鼠Wilms瘤病理模型中发现有VEGF表达，且与肿瘤的病程明显相关，因而推断VEGF可监测Wilms瘤的发生、发展及预后. 本结果： VEGF在健康儿童低表达，在Wilms瘤患儿术前血清中高表达，在术后显著下降，而在转移时又明显升高，说明VEGF与肿瘤发生发展及转移明显相关. 有人认为局部低氧是肿瘤微环境内VEGF基因表达的主要诱因［7］. 在转录水平，缺氧可以引起转录因子缺氧诱导因子I（HIFI）的升高，而启动VEGF mRNA的转录，在转录后水平，缺氧主要通过维持VEGF mRNA的稳定性，使生产的VEGF增多. 而VEGF在肿瘤的血管生成中起着极其重要的作用. 通过这种恶性循环，最终加速了肿瘤的生成和发展.
以上分析说明，VEGF与肿瘤发生发展及转移明显相关，VEGF可作为监测Wilms’瘤预后的临床指标. 是否通过抑制VEGF蛋白的表达从而抑制新生血管的生成，也为治疗晚期肾母细胞瘤提供了新的前景.
【参考文献】
［1］ Egawa S， Tsutsumi M， Konishi Y， et al. The role of angiogenesis in tumor growth of syrian hamster pancreatic cancer cell line HDP NR ［J］ .Gastroenterology， 1995;108 (8): 1526-1533.
［2］ Norton JA. Tumor angiogenesis. The future is now ［J］. Ann Surg， 1995;222(6):693.
［3］ Marsden HB， Lawler W， Kumar S. A scoring system for Wilms tumour: Pathological study of the second medical research council (MRC) trial ［J］. Int J Cancer， 1984;33(3):365-368.
［4］ 徐敏，施诚仁，张文竹，等. 儿童实体肿瘤中血管内皮生长因子的表达［J］. 中华小儿外科杂志，1999;20（5）：280-282.
［5］ Heweet RW， Murry JC. Coexpression of FltI and KDR in freshly isolated and cultured human endothelial cells［J］. Biochem Biophy Res Commun，1996;221(3):697-702.
［6］ Mark LK， Dorothy HR， Kathleen MO， et al. Metastasis correlates with production of vascular endothelial growth factor in a murine model of human Wilms tumor ［J］. J Pediatr Surg， 1999;34(5):743-748.
［7］ 于启海综述，郭宗远审校. 血管内皮生长因子的表达与肾母细胞瘤［J］.中华小儿外科杂志，2003;24（1）：90-92.转贴于