作者：孙秀珍，刘昀，李雅莉，周玎
【关键词】 哮喘
【Abstract】 AIM: To study the variety of airborne allergic insects and its irritability in asthmatic patients in Xi’an area and to provide experimental gist for etiological study and prevention of asthma. METHODS: Three hundred asthmatic patients and 100 normal controls underwent skin prick test (SPT) with 13 kinds of superior airborne insect vaccine， and sera sIgE of those with positive SPT results were tested by BSAELISA. RESULTS: The positivity rate of SPT with the 13 kinds of insect vaccine in asthmatic patients was 60%， significantly higher than that in normal controls (P&<0.01). The positivity rate of SPT with Stayridae， Heliothis armigera， Psilgramma menephorn and other 7 kinds of insects were more than 30% in asthmatic patients， indicating that these 10 kinds of insects were the main allergic insects in asthmatic patients. The positivity rate of sIgE in asthmatic patients was more than 85%， significantly higher than that in normal control’s (6%， P&<0.01). CONCLUSION: Stayridae， Heliothis armigera， Psilgramma menephorn and other 7 kinds of insects may be the main allergic insects in asthmatic patients in Xi’an area and maybe be the main allergens to the onset of asthma in the end summer and the early autumn.
【Keywords】 asthma; airborne insect; allergen
【摘要】 目的：研究西安地区哮喘患者气传致敏昆虫变应原种类，为哮喘病因学研究及防治提供实验依据. 方法：制备13种气传优势昆虫变应原疫苗，应用这些昆虫变应原疫苗给哮喘患者300例和正常对照者100例分别做皮肤挑刺试验（SPT），及应用BSAELISA法测定昆虫SPT阳性患者的sIgE. 结果：哮喘患者300例气传昆虫变应原疫苗SPT总阳性率为60%，显著高于正常对照(P&<0.01)；哮喘组患者对粉蝶、棉铃虫、霜天蛾等10种气传昆虫变应原疫苗的SPT阳性率在30%以上；SPT阳性的哮喘患者气传昆虫变应原sIgE阳性率达85%以上，对照组仅为6%，两组之间有显著性差异(P&<0.01). 结论：粉蝶、棉铃虫、霜天蛾等10种气传昆虫是西安地区哮喘的主要气传致敏昆虫，可能是夏末秋初哮喘发作的致敏原.
【关键词】 哮喘;气传昆虫;致敏原
0引言
气传昆虫大多属病媒昆虫，可引起疾病流行及致敏，与支气管哮喘的关系受到关注，甚至认为气传昆虫在哮喘病因学中的地位并不次于花粉、真菌、屋尘及粉尘螨等［1］. 我们研究西安地区哮喘气传昆虫变应原的种类，为哮喘病因学研究及防治提供新资料.
1材料和方法
1.1材料
在西安市南郊（西安交通大学医学院）、北郊（谭家乡）及市中心（西安市中医研究院）分别设捕虫点，利用光源诱捕器捕捉趋光性强的昆虫、应用捕虫网捕捉空中飞行及草丛中的昆虫等方法搜集本课题组以往调查发现的13种气传优势昆虫［1］. 分类后自然灭活，小昆虫取整体，鳞翅目昆虫取翅膀，超声粉碎机粉碎、乙醚脱脂、于低温下可卡液震荡提取72 h， 低压粗滤、将滤液置透析袋内于提取液中持续透析至清亮、无菌滤过除菌、蛋白质含量测定、动物毒理学实验、细菌学鉴定，最后将经检验证实无菌、无毒的单价变应原疫苗置4℃冰箱贮存备用.
1.2方法
支气管哮喘缓解期患者300例，诊断根据全国第3届哮喘会议制定的标准［2］；健康成年人100例，均无过敏性疾病史及家族史. 于被检查者前臂内侧，以13种昆虫变应原疫苗分别做皮肤挑刺实验（skin prick test，SPT），间距2.5 cm， SPT浓度均为5 g/L，以1 g/L盐酸组织胺为阳性对照，生理盐水为阴性对照，于15 min后观察风团大小. 风团直径等于最大直径加垂直直径除以2，大于组织胺风团2倍为4+；等于组织胺风团为3+；等于组织胺风团1/2为2+；大于生理盐水风团，小于组织胺风团1/2为+；等于生理盐水风团为阴性. 3+以上视为阳性结果. SPT阳性率&>30%的昆虫初步定为致敏昆虫. SPT阳性率&>30%的气传昆虫变应原疫苗血清特异性IgE（sIgE）测定气传昆虫变应原疫苗SPT阳性的哮喘患者及正常对照者采用链霉亲和素酶联吸附试验（BSAELISA）法. 昆虫变应原疫苗各100 μL分别包被ELISA板（KongRon），室温过夜; 20 g/L牛血清白蛋白封板，37℃，2 h; 洗板3 min 3次后加1∶10稀释血清标本各100 μL，设空白、阳性及阴性对照，37℃，1 h; 加1∶2500稀释生物素化羊抗人IgE（Lot Profile）100 μL， 37℃，2 h; 加1∶3000稀释链霉亲和素辣根过氧化物酶结合物， 37℃，1 h; 加20 mol/L h3SO4 50 μL终止反应后置490 nm波长下测各孔A值，求3个平行孔A均值. 血清样本A均值≥阴性对照2倍为阳性.
2结果
2.1气传昆虫SPT结果哮喘患者昆虫SPT总阳性率为60%，正常对照组为6%，两组之间有显著性差异(P&<0.01， Tab 1). 哮喘患者的13种昆虫变应原疫苗SPT阳性反应率在16%~48%，其中粉蝶（48%）居首，其次为棉蛉虫及霜天蛾（42%），提示10种气传昆虫&>30%为哮喘的主要致敏昆虫，可能是哮喘发作的主要气传致敏原.表1哮喘患者致敏昆虫SPT结果（略）
2.2血清sIgE测定正常对照组100例患者sIgE测定仅6例霜天蛾sIgE呈阳性反应（6%），其余均呈为阴性反应. 10种气传优势致敏昆虫变应原疫苗SPT阳性的哮喘患者中，其血清sIgE的阳性率均在85%以上(Tab 2)，进一步证明这10种昆虫是哮喘患者的主要气传致敏昆虫，具有较强的致敏性.表2哮喘患者气传昆虫变应原疫苗SPT阳性者血清sIgE（略）
3讨论
我们发现哮喘患者的昆虫疫苗SPT总阳性率（60%）明显高于正常对照组（6%），P＜0.01. 提示本组昆虫变应原疫苗的敏感性及特异性较强，假阳性率较低，具有一定的可靠性. 13种气传优势昆虫变应原疫苗中，10种SPT阳性率&>30%以上，视为哮喘致敏昆虫. 其中粉蝶变应原疫苗SPT阳性率（48%）最高，其次为棉铃虫（42%）和霜天蛾（42%）. 哮喘患者昆虫变应原疫苗SPT阳性者中，85%以上的人昆虫血清sIgE测定呈阳性反应，而正常对照组阳性率仅6% (P&<0.01). 我们发现哮喘气传致敏性昆虫为粉蝶、棉蛉虫、霜天蛾、隐翅甲、甘薯天蛾、蚜、蚜茧蜂、榆剑纹天蛾、苜蓿尺蛾和榆缘天蛾等，与Kino等［3］日本京都地区有所不同. 提示各个国家及地区的致敏昆虫种类可能不同，深入调查研究特定地区的哮喘变应原种类，研制其疫苗并应用于哮喘的诊断和治疗中，可使昆虫过敏性哮喘得到有效的免疫学治疗. 有较大的临床意义.
Cupta等［4］应用13种当地主要昆虫变应原疫苗给56例哮喘患者做ID及血清sIgE测定，发现50%以上蛾ID呈阳性反应，80%以上ID阳性者蛾sIgE抗体水平升高. 与本结果一致. 我们首例在昆虫种的水平制备单价变应原疫苗，研究鳞翅目类昆虫的致敏性，为该类过敏性哮喘的个体化SIT奠定了基础.
蚜、蚜茧蜂、隐翅甲等与哮喘的关系国内外尚无报道，这些昆虫多系小型或微小昆虫类，其搜集、分类、鉴定、变应原疫苗的制备等难度甚大. 本课题首例制备这些微小昆虫变应原疫苗，研究了其在哮喘病因方面的地位，发现其SPT阳性率均30%以上，为这些昆虫过敏性哮喘的防治提供了依据. Moffitt［5］研究认为昆虫叮咬是造成过敏的重要原因，SIT可预防再次致敏. 微小昆虫的致敏机制尚待进一步研究.
参考文献
［1］ 程曲径. 哮喘儿童试临床分析［J］. 实用临床医学，2001;4：39-40.
Cheng QJ. Clinical analysis of child asthma ［J］. Pract Clin Med， 2001;4：39-40.
［2］ 中华医学会呼吸病学分会哮喘组. 支气管哮喘防治指南［J］. 中华结核和呼吸杂志，2003;26：132-138.
Asthma group of CMA respairtory branch. Guide for prevention && treatment of bronchial asthma ［J］. Chin J Tuber Respir Dis， 2003;26:132-138.
［3］ Kino T， Chihara J， Fukuda K， et al. Allergy to insects in Japan［J］. J Allergy Clin Immunol， 1987; 79(6):657.
［4］ Cupta S， Jain S， Chaudhry S， et al. Role of insects as inhalant allergens in bronchial asthma with special reference to the clinical characteristics of patients［J］. Clin Exp Allergy， 1990; 20(5):519.
［5］ Moffitt JE. Allergic reactions to insect sting and bits［J］. South Med J， 2003; 96(11):1073-1079.