关于脂联素与非酒精性脂肪性肝病肝纤维化及胰岛素抵抗的关系

【摘要】 研究脂联素水平与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肝纤维化指标及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的关系。方法 采用ELISA法检测NAFLD患者和正常对照组的脂联素水平及肝纤维化指标Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层黏蛋白(LN)水平，采用稳态模式胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评估胰岛素抵抗。结果 NAFLD组脂联素水平显著低于对照组，HOMA-IR及肝纤维化指标显著高于对照组（P＜0.05）。IR与PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著正相关（P＜0.05），脂联素水平与腰臀围比(WHR)、体重指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR、PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著负相关（P＜0.01或＜0.05)。结论 NAFLD患者血清脂联素水平降低，脂联素的表达在NAFLD患者肝纤维化与胰岛素抵抗进程中可能起重要作用。
【关键词】 非酒精性脂肪性肝病 胰岛素抵抗 肝纤维化
　　Abstract：Objective To investigate the relationship between the level of serum adiponectin and the indexes of liver fibrosis and insulin resistance (IR) in nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD)．Methods ELISA was used to measure the serum levels of PCⅢ， PCⅣ， HA， LN and adiponectin， of which a comparative study was made between those in NAFLD patients and normal controls． IR was calculated by using homeostasis model assessment．Results The level of adiponectin was decreased （P＜0.05）， while the indexes of IR and liver fibrosis were significantly increased in NAFLD patients （P＜0.05）， compared with the controls． Positive correlation was found between IR index and serum levels of PCⅢ， PCⅣ， HA and LN （P＜0.05）， while negative correlation was evident between serum adiponectin and the values of WHR， BMI， FBG， TG， FINS， HOMA-IR， PCⅢ， PCⅣ， HA and LN （P＜0.01 or P＜0.05).Conclusion The level of adiponectin is decreased in NAFLD patients， implying that the expression of adiponectin may have important significance in the development of liver fibrosis and insulin resistance.
　　Key words: nonalcoholic fatty liver disease; adiponectin; insulin resistance; liver fibrosis
　　非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease， NAFLD)是西方国家的常见疾病，在我国发病率呈逐渐增多的趋势，早期发现和治疗NAFLD已越来越受到重视。NAFLD是指病变主要在肝小叶，以肝细胞脂肪变性和脂肪沉积为病理特征，但患者无过量饮酒史的临床综合征，包括从单纯脂肪肝到脂肪性肝炎(NASH)、肝纤维化最后到肝硬化。成年人NAFLD的发病率约17％ 33％。而脂联素是近几年新发现的由脂肪细胞分泌的肽类激素，在脂肪组织中最为丰富，血中的浓度也是脂肪分泌蛋白中最高的，约占血浆蛋白的0.01%。本研究经B超结合临床诊断NAFLD，采用ELISA法检测体检和门诊人群中NAFLD患者和正常对照组的脂联素水平及PCⅢ、HA、PCⅣ、LN水平，采用稳态模式胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）评价胰岛素抵抗，探讨脂联素水平与NAFLD患者肝纤维化指标及胰岛素抵抗指数的关系，为NAFLD肝纤维化的治疗提供新的理论依据。
　　1 资料和方法
　　1.1 一般资料和分组 从我院2006年2月—2006年12月在我院参加体检及门诊患者中选取研究对象。NAFLD组46例，男28例，女18例，年龄25 55岁，平均年龄48.1岁。对照组46例，男26例，女20例，来源于健康体检者，年龄23 56岁，平均年龄47.6岁。
　　1.2 试剂 脂联素 ELISA试剂盒购自上海船夫生物科技有限公司， PCⅢ、HA、CⅣ、LN的ELISA试剂盒和胰岛素125I放射免疫试剂盒购自北京科美东雅生物技术有限公司。
　　1.3 方 法
　　1.3.1 人体参数的测量 由同一人使用同一体重计，同一标尺，测量受试者的身高、体重、腰围及臀围，并计算体重指数（BMI）和腰臀围比（WHR）。腰围、臀围的测量分别在肋骨下缘和髂前上嵴的中间水平及股骨粗隆水平面上测量。
　　1.3.2 相关实验室指标 抽空腹血全自动生化仪及放射免疫技术测定总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)，采用稳态模式评估胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）:HOMA-IR=(FBG×FINS)／22。ELISA法测定脂联素、PCⅢ、HA、CⅣ、LN。
　　1.3.3 NAFLD的诊断 采用美国GE 400彩色超声诊断仪进行诊断。NAFLD的诊断按中华医学会肝病学会标准［1］， B超显示：①肝区近场回声弥漫增强，肝肾脾回声差异，肝回声＞肾脾回声；远场逐渐衰减；②肝内静脉结构模糊不清； ③肝脏轻度或中度肿大，边缘圆钝；④肝内血流信号减少或不易显示。⑤肝右叶包膜及横隔回声显示不清。排除以下情况:①病毒性肝炎；②自身免疫性肝炎；③各种肝硬化；④胆道梗阻；⑤长期饮酒。每日摄入酒精量，女性≥ 40 g，男性≥ 80 g，连续5年以上；⑥严重感染和糖尿病并发症；⑦遗传性疾病，如肝豆状核变性，α-抗胰蛋白酶缺乏，血色病等；⑧服用导致脂肪肝形成的药物等。
　　1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件包进行统计学分析，组间比较采用配对t检验，脂联素与BMI、WHR、FBG、FINS、TG、TC、HOMA-IR、PCⅢ、CⅣ、HA和LN的关系采用Spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
　　2 结 果
　　2.1 2组一般资料比较 NAFLD组与对照组之间年龄差异无统计学意义，NAFLD组的BMI、WHR、FBG、FINS、HOMA-IR均显著高于对照组(P＜0.05或＜0.01)。见表1。 表1 NAFLD组与对照组一般指标比较（
　　2.2 2组血脂、肝纤维化指标及脂联素水平比较 NAFLD组的TG、TC 、CⅢ、HA、PCⅣ、LN显著高于对照组(P＜0.05或＜0.01)，脂联素水平显著低于对照组(P＜0.05)。见表2。表2 NAFLD组与对照组血脂、肝纤维化指标及脂联素水平比较
　　2.3 血清脂联素和各临床指标间的相关性分析 Spearman相关分析显示，血清脂联素与TC无显著相关(P＞0.05)，与WHR、BMI、FBG、TG、FINS、HOMA-IR、PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著负相关 (见表3)。HOMA-IR与肝纤维化指标PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著正相关(r=0.463， r=0.389， r=0.419， r=0.317， P＜0.05)。　　表3 与脂联素相关的因素
　　3 讨 论
　　近年来的研究发现脂肪组织不单纯是传统观念上作为被动储能和组织充填物的组织，而且能够通过多种内分泌机制分泌细胞因子和蛋白质因子，参与机体多种生理功能。1995年， Scherer等［2］报道了从鼠的脂肪细胞分离出一段cDNA序列，发现该序列编码一个与补体因子C1q有很近同源性的蛋白质，仅由脂肪细胞产生并分泌入血， 随后陆续在人体内发现同类物，将其命名为脂联素。脂联素是肽类激素，在脂肪组织中最为丰富，血中的浓度也是脂肪分泌蛋白中最高的，约占血浆蛋白的0.01%。但脂联素的分泌与其他脂肪细胞因子不同，随着脂肪容量增大，其分泌反而减少。本研究结果显示，血清脂联素水平不仅与肥胖（BMI， WHR）呈负相关，而且还与TG、FBS和胰岛素水平呈显著负相关，提示脂联素受腹型肥胖、血脂、血糖的影响，并与胰岛素敏感性的变化相一致，但与胆固醇水平无明确相关性，可能与代谢途径不同有关。有报道发现减肥后血浆脂联素水平逐渐回升，其原因可能为脂肪细胞分泌脂联素存在自身反馈抑制调节。我们进一步研究了NAFLD患者脂联素水平与胰岛素抵抗的关系，发现脂联素水平与胰岛素抵抗呈显著负相关。 脂联素抑制胰岛素抵抗的机制可能在于脂联素能够抑制内皮细胞TNF-α信号，而在肥胖患者体内TNF-α含量增加，脂肪细胞分泌脂联素减少，脂联素失去对TNF-α信号的抑制作用从而诱发胰岛素抵抗。脂肪组织细胞大小与胰岛素抵抗重要相关，体积小的脂肪细胞比体积大的脂肪细胞更具有胰岛素敏感性且能分泌更多的脂联素，而肥胖者脂肪细胞体积增大相应分泌脂联素减少引起胰岛素抵抗［3］。

NAFLD发生肝纤维化、肝硬化的具体机制现尚未完全阐明，NAFLD肝纤维化与脂联素及胰岛素抵抗的关系目前国内未见明确报道。我们的研究显示，NAFLD组HOMA-IR显著高于对照组，HOMA-IR与肝纤维化指标PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著正相关，提示胰岛素抵抗在NAFLD肝纤维化进程中起重要作用。机制可能为胰岛素抵抗时，脂肪细胞对胰岛素的反应性受损，外周脂肪动员增加，血液游离脂肪酸增多，肝脏游离脂肪酸氧化或利用减少，游离脂肪酸转化为TG增多，结果导致肝细胞脂肪沉积。而“多重打击”学说认为，“初次打击”主要是胰岛素抵抗，导致肝细胞脂质沉积，而脂肪变性的肝细胞活力不足，并为脂质过氧化提供反应基质;“二次打击”主要为活性氧导致脂质过氧化损伤及其相关事件，引起脂肪性肝炎;脂肪性肝炎持续存在，引起细胞外基质的生成过多，形成脂肪性肝纤维化和(或)肝硬化。我们同时发现脂联素水平与肝纤维化指标PCⅢ、PCⅣ、HA和LN呈显著负相关，提示脂联素的表达在NAFLD患者肝纤维化进程中可能起重要作用。Kmada等［4］采用脂联素敲除的小鼠观察了脂联素对四氯化碳诱导的肝纤维化的作用，与野生型鼠相比，脂联素敲除小鼠有广泛的肝纤维化。在培养的肝星形细胞(HSC)中，脂联素抑制血小板源生长因子诱导的HSC的增殖和迁移。HSC能够表达脂联素受体，而脂联素治疗能抑制星状细胞增生、迁移和表达转化生长因子β。范建高等［5］和徐正婕等［6］研究发现，油酸、亚油酸及其刺激的枯否细胞培养上清液可促进人肝细胞和大鼠肝星状细胞的增殖及合成细胞外基质。脂联素可减少循环中游离脂肪酸和肝脏、肌肉中的TG，通过cAMP、蛋白激酶A（PKA）与核因子-κB信号通路调控内皮细胞的炎症反应，同时抑制巨噬细胞转变为泡沫细胞，从而减轻炎症反应以及组织损伤。
　　综上所述，脂联素与胰岛素抵抗在NAFLD肝纤维化进程中可能起重要作用，脂联素水平的降低可加重胰岛素抵抗，胰岛素抵抗可致血脂代谢紊乱，加重肝脏脂肪沉积，并进一步诱发对肝脏的“多重打击”，引起细胞外基质的生成过多，形成脂肪性肝纤维化甚至肝硬化。脂联素本身可抑制肝细胞脂肪酸合成酶的活性，减少脂质产生，并可减少TNF等炎症介质的作用，减低脂肪的转运，从而减少脂肪聚集。脂联素及其衍生物作用于机体将有助于减轻肝组织损伤及肝脂肪变性，为本质上遏制NAFLD的发生、发展，为NAFLD的治疗提供全新的手段。
【

参考文献

】
［1］ 中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组．非酒精性脂肪性肝病诊断标准［J］．中华肝脏病杂志，2003，11(2)：71．

［2］ Scherer PE， Williams S， Fogliano M， et al. A novel serum protein similar to C1q， produced exclusively in adipocytes ［J］. J Biol Chem，1995，270(45):26746-26749.

［3］ Yang WS， Jeng CY， Wu TJ， et al. Synthetic peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonist， rosiglitazone， increases plasma levels of adiponectin in type 2 diabetic patients ［J］. Diabetes Care，2002，25(2):376-380.

［4］ Kamada Y， Tamura S， Kiso S， et al． Enhanced carbon tetrachloride-induced liver fibrosis in mice lacking adiponectin ［J］. Gastroenterology，2003，125(6)：1796-1807．

［5］ 范建高，钟 岚，王国良，等. 大鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中游离脂肪酸的作用［J］.世界华人消化杂志，2001，9(6):721-722.

［6］ 徐正婕， 范建高， 王国良. 游离脂肪酸在脂肪性肝炎发病中的作用. 中华肝脏病杂志，2000， 8(2):127-128.