哮喘儿童血清白细胞介素25、 嗜酸细胞趋化因子的动态变化和意义

　　　　作者：徐青， 张永梅， 段国威， 李 芳， 安肃英， 刘淑华

【摘要】 目的: 通过监测哮喘儿童血清白细胞介素（IL）25、 嗜酸细胞趋化因子（Eotaxin）表达水平， 探讨其水平变化及其在哮喘发病中的作用。方法: 收集哮喘急性发作期、 缓解期儿童及健康儿童的静脉血标本， 用双抗体夹心ELISA法测定血清IL25、 Eotaxin的水平。结果: 哮喘儿童急性发作期组血清IL25水平(56.75±11.68) ng/L显著高于缓解期组(47.09±10.96) ng/L及健康对照组(45.77±10.43) ng/L， 差异有统计学意义（P&<0.05）， 缓解期组与健康对照组比较差异无统计学意义; 哮喘急性发作期组儿童血清Eotaxin水平(120.95±23.97) ng/L显著高于缓解期组(105.47±22.01) ng/L及健康对照组(105.01±18.47) ng/L ， 差异有统计学意义（P&<0.05）， 缓解期组与健康对照组比较差异无统计学意义。哮喘儿童血清IL25水平与Eotaxin之间存在明显正相关关系(r=0.642， P&<0.01)。结论: 哮喘儿童血清IL25及Eotaxin 水平能反应哮喘气道炎症活动情况及疾病严重程度， 两者存在正相关关系。

【关键词】 哮喘; 儿童; 白细胞介素25; 嗜酸细胞趋化因子

　　支气管哮喘是由多种细胞与因子参与的慢性气道炎症性疾病， 其发病机制极为复杂。目前认为: 细胞因子网络的失衡是其发病的基础， 而Th3细胞因子、 Eotaxin共同诱导的嗜酸性粒细胞的募集与浸润， 进而引起的气道炎症则可能是发病的关键。为此， 我们检测了不同时期哮喘儿童血清IL25、 Eotaxin的水平， 以探讨其在支气管哮喘中的变化及临床意义。

　　1 对象和方法

　　1.1 研究对象 60例哮喘儿童均来自2006-09/2007-10我院儿科哮喘专业门诊， 均符合2003年中华医学会儿科分会呼吸学组修订的儿童支气管哮喘防治常规（试行）［1］诊断标准。据其病史及临床表现分为两组: 哮喘急性发作期组30例（男20例， 女10例）， 年龄4～13岁， 平均7.5岁; 哮喘缓解期组30例（男19例， 女11例）， 年龄4～15岁， 平均8.8岁; 对照组为我院同期健康体检儿童27例（男18例， 女9例）， 年龄4～14岁， 平均7.6岁， 均无变态反应性疾病史， 近期（1个月内）无全身感染性疾病、 未使用抗生素及糖皮质激素等。各组间儿童年龄及性别构成上均无统计学意义， 具有可比性。

　　1.2 方法 分别留取健康体检儿童、 哮喘急性发作期及缓解期儿童静脉血4 mL， 室温静置2 h， 以2 000 r/min离心10 min留取血清， 以-70℃冰箱保存留待一次性检测用。应用美国R&&D公司进口分装的人IL25 ELISA定量检测试剂盒及人Eotaxin ELISA定量检测试剂盒测定IL25、 Eotaxin水平， 主要仪器为芬兰Thermo公司生产的酶标仪（型号: DENLEY DRAGON Wellscan MK3， 分析软件为Ascent software for Multiskan）和洗板机（型号: Wellwash 4 MK2）; 数字显示隔水式电热恒温培养箱（型号: PYXDHS）为上海跃进医疗器械厂生产。具体实验操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行。

　　1.3 统计学分析 检测结果均以x±s表示， 实验数据经SPSS13.0统计软件包处理。各组间不同水平的比较采用方差分析、 t检验， 以P&<0.05为有统计学意义; 两指标间相关性采用直线相关Pearson分析， 检验为双侧， 以P&<0.01为有统计学意义。

2 结果

　　2.1 哮喘急性发作组、 缓解组儿童与正常对照组儿童血清IL25、 Eotaxin水平 三组间IL25水平的差异有统计学意义（F=8.602， P&<0.01）， 哮喘急性发作期组较缓解期组、 正常对照组明显升高， 差异有统计学意义（P&<0.05）， 而后两组间比较差异无统计学意义; 三组间Eotaxin水平的差异有统计学意义（F=5.144， P&<0.01）， 哮喘急性发作期组较缓解期组、 正常对照组明显升高， 差异有统计学意义（P&<0.05）， 而后两组间比较差异无统计学意义（表1）。表1 哮喘急性发作期组、 缓解期组儿童与正常对照组儿童血清IL25、 Eotaxin含量

　　2.2 哮喘儿童血清IL25与Eotaxin水平之间的相关性 哮喘儿童血清IL25与Eotaxin水平明显升高， 经直线相关Pearson分析发现两者之间呈显著正相关关系(r=0.642， P&<0.01， 图1)。

　　3 讨论

　　儿童哮喘是一种以气道高反应性和气道慢性炎症为特征的变态反应性疾病， 研究表明在哮喘患儿中存在辅助性T细胞(Th细胞)功能失衡， 主要表现为Th1亚群功能低下， Th3亚群功能亢进。IL25是Th3细胞产生的细胞因子， IL25受体（IL25R）选择性表达于Th3细胞［2］， 且IL25可促进Th3细胞的分化， 故IL25可能与哮喘等Th3型免疫反应性疾病有关。本研究显示， 哮喘急性发作期组儿童血清IL25含量明显升高， 缓解期组降低， 且有研究发现IL25在哮喘患者的支气管黏膜下表达上调［3］， 提示IL25含量升高与哮喘发作有关。

　　图1 哮喘儿童血清IL25与Eotaxin水平间的相关性

　　动物试验证实: 无论是经气道给予外源性的IL25还是转基因在肺内内源性表达IL25， 均可引起Th3细胞因子如: IL4、 IL5、 IL13等以及Eotaxin的增多， 嗜酸性粒细胞的增多浸润， 气道高反应性等表现; 而给予抗IL25抗体可显著降低致敏阶段的气道高反应性和IL5、 IL13的产生， 杯状细胞增生， 嗜酸性粒细胞的浸润和血清免疫球蛋白（Ig）E的分泌， 即使在有Th3型炎症存在的激发阶段也可降低其气道高反应性［4］。提示IL25是调节肺部Th3型变态反应性炎症的关键因子， IL25可通过对Th3细胞因子的调节而在哮喘的发病中起重要作用。

　　Eotaxin是趋化因子CC家族成员之一， 具有选择性趋化嗜酸性粒细胞的功能， 能惟一选择性地与嗜酸性粒细胞表面表达的CC家族趋化因子受体3 (CCR3) 结合， 从而趋化嗜酸性粒细胞向炎症部位聚集， 引起嗜酸性粒细胞炎症。大量研究表明， 支气管哮喘时气道黏膜Eotaxin 表达显著增强， 其表达强度与支气管壁嗜酸性粒细胞数及与哮喘严重度呈显著正相关［5， 6］。而给予抗Eotaxin抗体可使致敏小鼠的支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞减少， 或给予CCR3的拮抗剂后减少嗜酸性粒细胞在过敏的气道中的募集［7］。本研究结果表明， 在哮喘急性发期Eotaxin水平升高， 缓解期降低并接近正常水平。因而Eotaxin 升高是反映哮喘急性发作、 病情严重程度及气道炎症变化较为客观的指标。

　　本研究结果显示哮喘患者血清IL25和Eotaxin 呈正相关， 提示两者具有量效关系。有研究表明， IL25不仅可以促进Eotaxin的表达， IL25还可延缓嗜酸性粒细胞的凋亡并呈剂量依赖性， 同时还可诱导嗜酸性粒细胞释放趋化因子如单核细胞趋化1（MCP1）、 单核细胞炎性蛋白1α（MIP1α） 、 IL8、 IL6等［8， 9］。近来又有研究报道: 活化的Th3细胞可持续表达低水平的IL5， IL5可提高嗜酸性粒细胞的活性与寿命; 而活化的嗜酸性粒细胞可分泌IL25， IL25可促进经TSLPDC活化的Th3细胞产生细胞因子， 尤其是IL5的产生， 如此形成一个正反馈［2］。提示IL25与Eotaxin同样具有趋化和调节嗜酸性粒细胞功能的作用， 两者相互作用， 协同调节嗜酸性粒细胞在组织中的趋化、 活化及细胞毒性颗粒的释放， 促进气道变态反应性炎症的发生， 参与哮喘的发病。

　　目前对哮喘治疗的研究方向已转向细胞因子领域， IL25、 Eotaxin 水平能反应哮喘气道炎症活动情况及疾病严重程度， 两者具有正相关性， 对嗜酸粒细胞的功能有协同调节的作用。通过抑制其产生， 调节细胞因子网络平衡， 控制以嗜酸性粒细胞增多及浸润为主的慢性气道炎症， 将成为治疗哮喘研究新的方向。

参考文献

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［6］ 李 静， 李玉琴. 哮喘大鼠模型肺组织中嗜酸粒细胞趋化因子及肺组织和骨髓组织中嗜酸粒细胞趋化因子受体的表达［J］. 郑州大学学报(医学版)， 2007， 42(1): 157-159.

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