肿瘤相关糖蛋白72抗原在原发性乳腺癌组织中的表达及其临床意义

　　　　作者：王守满， 毛杰， 李波， 唐利立

【摘要】 目的: 探讨抗肿瘤相关糖蛋白（TAG72）抗原的表达与原发性乳腺癌病理特征及预后的关系。方法: 随机选取原发性乳腺癌患者118例， 应用SABC免疫组化方法检测TAG72抗原的表达。并对其中的92例原发性乳腺癌患者中作术后为期5年的随访， 分析TAG72抗原与原发性乳腺癌患者预后的相关性。结果: TAG72抗原在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率为78.81% (93/118)， 并与原发性乳腺癌组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系。在直径较大(P&<0.05)、 TNM分期较高(P&<0.05)、 淋巴结转移(P&<0.01)及组织学分级低(P&<0.01)的肿瘤组织中， TAG72抗原高表达。此外， TAG72抗原阳性表达的原发性乳腺癌患者的生存率明显低于阴性表达的患者 (P&<0.01)。结论: TAG72抗原的表达可能与原发性乳腺癌的发生、 浸润、 转移有关; TAG72抗原可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用， 检测其在原发性乳腺癌组织中的阳性表达率， 并结合临床病理学分级， 可提高对患者预后判断的准确性。

【关键词】 肿瘤相关糖蛋白抗原; 原发性乳腺癌; 临床病理学

　　原发性乳腺癌是危害女性健康的常见恶性肿瘤之一， 其浸润和转移的程度是影响预后的主要因素［1］。因此， 寻找原发性乳腺癌侵袭转移的相关因子， 对于指导治疗、 提高术后生存率均有十分重要的意义。肿瘤相关糖蛋白72（TAG72）抗原是一种高分子量糖蛋白复合物， 属Lewis 血型抗原物质范畴［2］。已有研究应用免疫组织化学技术证明， TAG72 在绝大多数正常成人组织中不表达， 仅在睾丸Leydig 细胞、 结肠Goblet 细胞及胃部Parietel 细胞中有微弱的表达， 而在胃、 结直肠、 胰腺及肺等腺癌组织中呈强势的表达［3］。但其与原发性乳腺癌的关系， 国内外研究尚少。我们运用免疫组织化学染色技术观察TAG72抗原在正常乳腺组织和原发性乳腺癌组织中的表达， 探讨其与原发性乳腺癌临床病理学特征及预后的相关性。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料 2000-07/2002-07经病理确诊为原发性乳腺癌患者118例， 年龄49.3±3.8 (26～72)岁， 排除原位癌。患者术前均未行化放疗。其中TNMⅠ期45例， TNM Ⅱ期40例， TNMⅢ期33例。病理类型: 浸润性导管癌49例， 单纯癌43例， 导管内癌15例， 黏液腺癌11例。对于有完整临床及随访资料的92例患者进行为期五年的随访研究。对照组标本20例， 为非肿瘤组织中的正常乳腺组织。鼠源性抗人TAG72 mAb（工作浓度1∶100）和免疫组织化学染色采用SABC法试剂盒均购自上海生工生物技术有限公司。生物素化二抗、 辣根酶标记链酶卵白素复合物均购自福州迈新生物技术开发公司。

　　1.2 方法 采用免疫组织化学染色SABC法。标本依次进行以下处理: 多聚甲醛固定， 石蜡包埋， 4　　 μm连续切片， 于70℃烤片15 min后， 依次进行脱蜡、 水化、 梯度乙醇脱水， 30 mL/L h3O2灭活内源酶， PBS 漂洗5 min×3次。正常山羊血清室温孵育15 min。滴加20～30 μL PBS 稀释的一抗4℃过夜。PBS 漂洗5 min ×3 次。生物素化二抗、 辣根酶标记链酶卵白素复合物依次在37℃下， 孵育45 min， PBS 漂洗5 min×3次。DAB显色5～10 min， 自来水充分洗涤， 苏木素复染5 min， 稀盐酸淡化30 s， 冲洗5 min。脱水、 透明、 封片， 镜检。设TAG72抗原表达阳性的结肠癌组织为阳性对照， 用PBS替代第一抗体作阴性对照。TAG72抗原表达阳性为癌细胞的细胞质出现棕黄色颗粒， 不出现者为阴性。在400×光镜下观察10个视野， 每个视野计数100个细胞， 阳性细胞率小于10%为阴性， 阳性细胞率大于等于10%为阳性［4］（此处的标准设定依据: 参照

参考文献

中的TAG72蛋白在其他种类肿瘤中阳性表达判定的标准; 经预实验结果进行进一步确定）。

　　统计学分析: 所有数据用SPSS13.0处理， 计数资料采用χ2检验。生存分析用KaplanMeier法。P&<0.05为差异具有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 TAG72抗原表达及其与原发性乳腺癌临床病理参数的关系 免疫组织化学染色结果显示， 原发性乳腺癌组织中， TAG72抗原的阳性表达主要定位于癌细胞的细胞质， 呈弥漫分布的棕黄色颗粒， 强弱不等。TAG72抗原的阳性表达率为78.81% (93/118)， 而在正常乳腺组织中不表达。TAG72抗原在原发性乳腺癌组织中的表达情况与患者临床病理参数之间的关系见表1。经统计学分析可知， TAG72抗原的表达与患者性别、 年龄及肿瘤发生部位均无相关性(P&>0.05); 而与原发性乳腺癌组织的癌肿大小、 组织学分级、 TNM分期、 有无淋巴结转移有关。癌肿直径≥5 cm、 组织学分级III级及存在淋巴级转移的乳腺癌组织中， TAG72抗原的阳性表达率高于瘤体直径&<5 cm(P&<0.05)、 组织学分级I～II级(P&<0.01)及未发生淋巴级转移（P&<0.01）者; TNM I～II期的原发性乳腺癌组织中TAG72抗原的阳性表达率明显低于TNM III期的原发性乳腺癌组织 (P&<0.05)。

　　2.2 TAG72抗原表达与原发性乳腺癌患者预后的关系 本研究对92例原发性乳腺癌患者进行为期5年的术后随访。TAG72抗原表达情况与患者术后生存率的关系分析如表2， 图1所示。对于不同癌肿大小及TNM分期的患者， TAG72抗原的表达情况与其生存率无关（P&>0.05）; 而根据组织学分级和淋巴结转移情况分组的原发性乳腺癌患者中， 有TAG72抗原阳性表达的患者， 其生存率则明显低于阴性表达者。从生存分析结果看， 当TAG72抗原阴性表达时， 原发性乳腺癌患者的生存率高于TAG72抗原阳性表达的患者。表1 TAG72抗原表达与原发性乳腺癌临床病理参数的关系表2 TAG72抗原表达与原发性乳腺癌患者术后生存率的关系

　　3 讨论

　　癌细胞的侵袭、 转移是恶性肿瘤的基本病理学特征， 也是绝大多数肿瘤患者主要的死亡原因之一［5］。研究指出乳腺癌的侵袭转移是多基因及其蛋白表达产物协调作用的结果［6］， 但是目前仍然不清楚乳腺癌发生发展和浸润转移的具体分子机制。因而， 研究乳腺癌的相关基因不仅有利于理解其发病机制， 还可能发现在诊断和评价预后中具有临床意义的分子标记物。

　　TAG72的Mr为72 000， 是多发现于消化道恶性肿瘤的肿瘤相关抗原， 其高表达常伴恶性预后［7］。有报道发现， 肿瘤包块较大且分化较差、 有癌转移及肿瘤增殖活跃的消化道肿瘤患者常常TAG72 抗原的表达为阳性［8］。因而， TAG72 可作为消化道肿瘤免疫疗法的合适靶位。为揭示TAG72 抗原表达与原发性乳腺癌诊断、 预后的关系， 我们用免疫组织化学染色方法检测TAG72抗原在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达， 证实TAG72抗原主要表达于乳腺癌细胞的细胞质中。在乳腺癌组织中， TAG72抗原的表达与癌肿直径的大小、 组织学分级、 TNM分期及有无淋巴结转移有关。癌肿直径越大、 组织学分级及TNM分期越高、 发生淋巴结转移， 其表达越高。我们的研究还表明， TAG72抗原表达阴性者5年生存率显著高于TAG72抗原表达阳性者。可以看出， TAG72抗原高表达严重影响患者术后生存时间。

　　综上所述， TAG72 抗原高表达于原发性乳腺癌组织， 其表达与肿瘤的恶性程度及预后有密切关系， 可作为判断预后的重要指标之一， 具有重要的参考价值。在临床应用中， 可将TAG72 抗原的检测列为常规病理检查， 结合乳腺癌患者的临床病理因素， 进行综合评判， 以选择更加有效的治疗方案。

参考文献

［1］ Qu Z， Van Ginkel S， Roy AM， et al. Vascular endothelial growth factor reduces tamoxifen efficacy and promotes metastatic colonization and desmoplasia in breast tumors［J］. Cancer Res， 2008， 68(15): 6232-6240.

［2］ Chauhan SC， Vinayek N， Maher DM， et al. Combined staining of TAG72， MUC1， and CA125 improves labeling sensitivity in ovarian cancer: Antigens for multitargeted antibodyguided therapy［J］. J Histochem Cytochem， 2007， 55(8): 867-875.

［3］ Ponnusamy MP， Venkatraman G， Singh AP， et al. Expression of TAG72 in ovarian cancer and its correlation with tumor stage and patient prognosis［J］. Cancer Lett， 2007， 251(2): 247-257.

［4］ 徐宏勇， 徐 立， 高建宏， 等. 肿瘤相关糖蛋白72 抗原在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义［J］. 山东医药， 2007， 47(3): 16-18.

［5］ Landemaine T， Jackson A， Bellahcène A， et al. A sixgene signature predicting breast cancer lung metastasis［J］. Cancer Res， 2008， 68(15): 6092-6099.

［6］ Epping MT， Hart AA， Glas AM， et al. PRAME expression and clinical outcome of breast cancer［J］. Br J Cancer， 2008， 99(3): 398-403.

［7］ Chhieng DC， RodriguezBurford C， Talley LI， et al. Expression of CEA， Tag72， and LewisY antigen in primary and metastatic lesions of ovarian carcinoma［J］. Hum Pathol， 2003， 34(10): 1016-1021.

［7］ Galietta A， Pizzi C， Pettinato G， et al. Differential TAG72 epitope expression in breast cancer and lymph node metastases: A marker of a more aggressive phenotype［J］. Oncol Rep， 2002， 9(1): 135-140