1材料和方法
1.1材料Balb/c近交系小鼠，购自中科院动物所实验动物繁育中心，雄性，8～10 wk，18～20 g，清洁级. 小檗胺(北京东升制药厂)；ConA(Sigma公司)；PHA(广州医药工业研究所)；RPMI1640培养基（Hyclone公司）；3HTdR（中国原子能科学研究院）；IL2标准品（Sigma公司）；FITC标记的CD69 mAb（Pharmingen公司）；FACScan型流式细胞分析仪（BD公司）.
1.2方法将动物分为对照组，实验组Ⅰ和实验组Ⅱ. 实验组动物每天分别ip小檗胺25 或50 mg/kg共计7 d；对照组动物给予等量生理盐水. Balb/c小鼠脱颈处死，取脾T淋巴细胞加100 mL/L小牛血清RPMI l640培养液悬浮细胞（1×109细胞/L），并测细胞存活率. 96孔平底培养板，每孔加入100 μL（105个细胞）分离的 BALB/c小鼠脾细胞悬液，加入ConA溶液（5 mg/L），加入PHA（10 mg/L），对照组加等量培养基，培养72 h. 在终止培养前18 h，每孔加入37 kBq 3HTdR，收集细胞，液体闪烁仪测定cpm值. IL2诱生水平的检测采用3HTdR掺人法. 于24孔培养板中，加入分离的脾细胞悬液l mL，丝裂原刺激组和实验组分别加入ConA溶液，终浓度为10 mg/L. 置37℃，50 mL/L CO2条件下培养24 h. 吸出培养上清，2000 r/min离心20 min，收集上清，-20℃待测. 于96孔板中每孔加不同稀释度的上清（IL2待检测品）100 μL，设培养液对照和不同浓度IL2标准品对照，每组3个复孔. 每孔加100 μL（1×104/孔）检测细胞(CTLL2). 置37℃，50 mL/L CO2培养箱中培养24 h. 每孔加入18.5 kBq 3HTdR，继续培养4～6 h. 收集细胞，检测细胞的3HTdR掺入值，以3复孔的cpm均值表示. 按概率单位分析法计算IL2单位：样品IL2活性(kU/L)＝(达50%最大增殖3HTdR掺人值的样品稀释度/达50%最大增殖3HTdR掺人值的标准品稀释度)×标准品的IL2活性单位(kU/L). 丝裂原刺激组和实验组分别加入ConA溶液，终浓度为10 mg/L；对照组加入等量PBS. 37℃ 50 mL/L CO2条件下培养. 8 h后分别取样. 反应前将上述细胞悬液用PBS洗l次(1500 r/min， 5 min)，取细胞悬液100 μL. 加20 μL CD69FITC mAb溶液，室温避光反应20 min，2000 r/min离心5 min，PBS洗1次，弃上清液，以除去未结合的荧光抗体. 2结果
小檗胺可显著地抑制ConA诱导的淋巴细胞增殖反应（P&<0．01），且抑制丝裂原刺激的淋巴细胞的细胞因子IL2的分泌，抑制作用与其剂量有关（P&<0.01）. 小檗胺还抑制丝裂原ConA诱导的淋巴细胞CD69的表达（平均荧光强度）：静息状态为206.86，ConA刺激时为616.98，单纯小檗胺无ConA刺激时为190.72，小檗胺作用后ConA刺激为278.91.
3讨论
CD69是T细胞活化时最早表达的分子之一［1-2］，我们观察了小檗胺对T细胞CD69表达和IL2诱导水平的影响，结果表明：ConA刺激后8 h T细胞表面CD69的表达水平显著增高，而先应用小檗胺再给予ConA刺激，则T细胞表面CD69的表达水平未见升高；并且发现小檗胺能显著抑制T细胞IL2的分泌；小檗胺还显著抑制ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖. 这表明小檗胺有广泛的免疫抑制作用. 小檗胺不同于环孢素A的免疫抑制机制使其有可能与环孢素A联合应用于器官移植.
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参考文献
】［1］ Ramgolam V， Ang SG， Lai YH， et al. Traditional Chinese medicines as immunosuppressive agents (Abstract)［J］. Ann Acad Med Singapore， 2000，29:11-16.
［2］ Schowengerdt KO， Fricker FJ， Bahjat KS， et al. Increased expression of the lymphocyte warly activation marker CD69 in peripheral blood correlates with histologic evidence of cardiac allograft rejection ［J］. Transplantation， 2000，69:2102-2107.