甲状腺乳头状癌Survivin、p53表达与临床病理特征

【摘要】 目的 探讨新的凋亡抑制基因survivin和抑癌基因p53在甲状腺乳头状癌组织中的表达与甲状腺乳头状癌发生发展、临床病理特征之间的关系。方法 应用免疫组织化学( SP法)，检测survivin、p53 在102例甲状腺乳头状癌组织及10例结节性甲状腺肿组织中的表达。结果 102例甲状腺乳头状癌组织中survivin、突变型p53（mt-p53）基因的阳性表达率分别为66.7%和81.4％。与良性病变组survivin、p53的阳性表达率30％、O％相比较二者差异有显著的统计学意义(P<0.05)。甲状腺乳头状癌组织中突变型p53及survivin阳性表达率在不同性别、不同年龄、肿瘤大小，WHO大体分类及组织学分级间差异无显著性(P>0.05)。伴有淋巴结转移的甲状腺乳头癌组织中survivin的阳性表达率为79.5％，不伴有淋巴结转移者，survivin的阳性率为57.1%，二者差别有显著性(P<0.05)。突变型p53在甲状腺乳头状癌组织中表达的阳性率与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 Survivin与mt-p53 在甲状腺乳头状癌组织中表达上调。Survivin表达与淋巴结转移有关， 突变型p53表达与淋巴结转移无关。
【关键词】甲状腺乳头状癌 survivin p53基因 免疫组织化学
　　遗传学研究表明甲状腺癌是多基因相关肿瘤，基因水平的变化可能在甲状腺癌的发生和发展过程中起到一个关键的作用[1]，survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的成员，survivin可对抗G2／M期诱导的凋亡，在癌组织中过度表达克服凋亡检测点，通过有丝分裂促进转化细胞的异常增殖[2]。P53为抑癌基因， survivin及mt-p53在大部分肿瘤组织中过表达与肿瘤细胞死亡缺陷关联密切。本实验旨在采用免疫组织化学方法检测survivin、p53基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达，探讨其与甲状腺乳头状癌临床病特征的关系。
　　1 资料与方法
　　1.1标本选择
　　选取广东医学院附属医院和宁夏医学院附属第二医院2001年1月一2003年12月临床和病理资料完整的102例甲状腺乳头状癌根治术组织标本，患者术前均未经过任何抗肿瘤治疗。其中男性24例，女性78例，最大年龄73岁，最小年龄12岁，中位年龄42岁。根据癌的浸润范围，组织结构和细胞形态等特点，按WHO分类标准分类，其中微小癌15例，滤泡乳头型21例，高细胞型14例，嗜酸细胞型5例，弥漫硬化型2l例，包裹型26例。有淋巴结转移39例，无淋巴结转移63例。另选取结节性甲状腺肿标本10例作为对照组，其中男4例，女6例，中位年龄44岁。
　　1.2免疫组织化学染色
　　小鼠抗人p53(D01)和人survivin(FL-142)单抗及S-P试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化采用S-P方法，操作步骤如下：①石蜡切片脱蜡至水；②3％h302室温孵育5～10min；③ 微波抗原修复；④正常山羊血清封闭，室温15min，滴加p53和surivin-抗原工作液，冰箱内40C过夜；⑤PBS冲洗，滴加第二代生物素，标记二抗工作液，室温20min；⑥PBS冲洗，滴加第二代辣根酶标记链霉 卵白索工作液，室温20min；⑦PBS冲洗，DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，封片。已知的乳腺癌切片为阳性对照，PBS代替一抗作为空白对照。
　　1.3结果判定
　　采用双盲法，观察切片至少5个以上具有代表性高倍视野，不少于1 000个细胞，对免疫结果进行评估。结节性甲状腺肿和甲状腺乳头状癌中p53和survivin的表达情况，survi诚n阳性表达定位于细胞质，p53阳性表达则定位于细胞核和细胞质，均呈棕黄色。根据常规，p53和survivin阳性细胞在同类细胞中所占比例分4个等级。阳性细胞<10％为“一”，10％一25％“+”，26％～50％为“++”，>51％为“+++”。
　　1.4统计学处理
　　根据实验资料的性质，对所得资料进行χ2检验，P<0.05认为差别有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 Survivin、mt-p53在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况
　　Survivin阳性表达定位于细胞质，p53阳性表达定位于细胞核和细胞质，均呈棕黄色。102例甲状腺状癌组织中，mt-p53阳性表达83例，阳性率为81.4％，而对照组10例全结节性甲状腺肿组织中无mt-p53表达，差别有显著性(x2=31．4，P<0．01)。102例甲状腺乳头状癌组织中survivin阳性表达为68例，阳性率为66.7％，而10例对照组中survivin阳性表达3例，阳性率为30％，差别有显著性(χ2=5.3，P<0.05)。mt-p53及survivin的基因在甲状腺乳头癌组织中表达明显上调。 　　 2.2 mt-p53和survivin表达与甲状腺乳头癌临床病理指标的关系
　　mt-p53，survivin基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达与年龄、性别无关，与肿瘤大小、大体分类， 组织学分级(分化程度)无关(P>0.05)，mt-p53基因表达与淋巴转移无关，而survivin表达与淋巴结转移显著正相关。
　　3 讨论　　
　　Mt-p53及survivin参与了细胞周期调控及细胞凋亡等过程，与肿瘤细胞死亡调控有关，本实验使用免疫组织化学方法检测102例甲状腺乳头状癌组织中survivin、mt-p53的表达情况，结果表明甲状腺乳头状癌组织中survivin的阳性表达率为66.7％(68／102)，与结节性甲状肿的阳性表达率30％(3／10)比较有显著性差异(P<0.05)；mt-p53在甲状腺乳头状癌组织中的阳性表达率为81.4％(83／102)，而l0例结节性甲状腺肿组织中无阳性表达，二者有显著性差异(P<0.05)；mt-p53阳性者survivin表达阳性率明显高于mt-p53阴性者，二者有显著性差异(P<0.05)；甲状腺乳头状癌组织中突变型p53及survivin阳性表达率在不同性别、不同年龄、肿瘤大小，WHO大体分类 及组织学分级间差异无显著性(P>0.05)。伴有淋巴结转移的甲状腺乳头癌组织中survivin的阳性表达率为79.5％，不伴有淋巴结转移者，survivin的阳性率为57.1％，二者差别有显著性(P<0.05)。突变型p53在甲状腺乳头状癌组织中表达的阳性率与淋巴结转移无关(P>0.05)。mt-p53及survivin在甲状腺乳头状癌组织过表达，突变型p53(mt-p53)上调survivin在甲状腺乳头状癌中的表达[3]，二者在甲状腺乳头状癌的发生发展中起协同作用。wt-p53在人类肿瘤组织的突变率为50％，因为survivin 缺乏引起的细胞死亡不依赖于p53和Bcl2，那么以survivin 通路上的survivin 分子或其他相关分子为靶点的抗癌治疗就成为可能，靶向作用使survivin 失活可以诱发p53功能缺乏并由此产生凋亡抵抗的肿瘤细胞发生有丝分裂突变而死亡[4]。甲状腺乳头状癌对化疗药物不敏感，以survivin 为靶点的新药开发也许会对甲状腺癌的治疗产生影响。
参 考 文 献
[1]Wright PA.Lemoine NR，Giretxki PE，et al.Mutatinon of the p53 gene in differentiated human thyroid carinoma cell line，but not throid tumors [J].Oneogene，1991，6(9)：1693—1697.
[2]Ambrosini G，Adia C，Altieri DC .A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymhoma［J].Nat，1997，3(8)917-921.
[3]Hoffman WH，Biade S，Zilfou JT，et al.Teanscriptional reperession of the anti-apoptotic survivin gene by wild type p53 ［J］.J Biol Chem，2002，277(5):3247-3257
[4]Zhou M，Gu L，Li F，et al.DNA damage induces a novel p53-survivin signaling pathway regulating cell cycle and apoptosisin acute lymohoblastic leukemia cells[J].J Phamacol Exp Ther，2002，303(1):124-131.