作者：赵磊，文爱东，张三奇，同丽萍，吴寅
【关键词】 头孢克肟
【Abstract】 AIM: To compare the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability of domestic and imported Cefixime capsules in healthy volunteers and to study the quality of the medicine. METHODS: A single oral dose of 200mg domestic and imported Cefixime capsules was given to 12 healthy volunteers in a randomized twoperiod crossover study. The concentrations of Cefixime in serum were determined by HPLC method. The main pharmacokinetics parameters (AUC， ρmax and Tmax) were analyzed by two simultaneous onesided t test. RESULTS: The concentration time curves of domestic and imported Cefixime capsules conformed to the onecompartment open model with firstorder absorption. The AUC (0~24 h)， ρmax and Tmax of domestic and imported Cefixime capsules were （25.88±3.75 ）and （ 24.67±4.30）mg・h-1・L-1，（2.97±0.54）and（2.83±0.55）mg・L-1， and （3.39±0.50）and（3.33±0.48）h respectively. The relative bioavailability of domestic Cefixime capsules was 104.9%. CONCLUSION: Both domestic and imported Cefixime capsules are of the same bioequivalence in healthy volunteers.
【Keywords】 cefixime; pharmacokinetics; bioequivalence; HPLC
【摘要】 目的： 比较国产和进口头孢克肟胶囊在健康人体内的药代动力学及相对生物等效性，确保临床用药质量. 方法： 采用标准二阶段交叉设计自身对照试验法，12名男性健康志愿受试者分别口服单剂量两种头孢克肟胶囊，用RPHPLC法测定血清中头孢克肟的浓度，以双向单侧检验统计法比较2种头孢克肟胶囊之间的差异. 结果： 国产和进口头孢克肟胶囊在健康志愿者体内的药时曲线均符合血管外给药一室开放模型，其主要的药代动力学参数Tmax分别为（3.39±0.50）和（3.33±0.48）h，ρmax、AUC (0~24 h)分别为：（2.97±0.54）和（2.83±0.55） mg・L-1；（25.88±3.75）和（24.67±4.30）（mg・h-1・L-1），药动学参数间均无统计学差异（P&>0.05），国产胶囊对进口胶囊的相对生物利用度为104.9%. 结论： 两种头孢克肟胶囊在健康志愿者体内具有生物等效性.
【关键词】 头孢克肟；药代动力学；生物等效性；高效液相色谱法
0引言
头孢克肟（cefixime， CFX）为第三代口服头孢菌素，具有广谱、高效、血药浓度高而持久等特点，半衰期大于头孢克洛和头孢羟氨苄. 对β内酰胺酶稳定，其抗菌力与注射用头孢类抗生素相似. 因其临床疗效高、用药量小、药物不良反应低，而被广泛应用于临床. 为保证药品质量及临床疗效，把好我院临床合理用药关［1-6］，使临床用药安全、有效、经济，我们采用二阶段交叉、随机、自身对照的方法，比较了国产和进口头孢克肟胶囊在健康受试者体内的药代动力学过程，并对两个制剂的相对生物等效性做出评价，旨在为临床用药质量分析及合理用药提供依据.
1材料和方法
1.1材料仪器：LC10AVP高效液相色谱系统（Shimadzu， Japan），含两台LC10Atvp型泵；7725型进样阀（配100 μL定量环）；SPD10Avp紫外可见光检测器；CTO10Asvp柱箱；Classvp 5.032色谱工作站. Discovery C18不锈钢分析色谱柱（250.0 mm×4.6 mm，5 μm），SepPak C18固相萃取小柱（Waters）. 试药：受试品（国产）头孢克肟胶囊由广州白云山制药总厂生产（批号01100112，100 mg/粒），参比品（进口）头孢克肟胶囊由日本藤泽药品工业株式会社生产（批号6815K，100 mg/粒）. 头孢克肟标准品由日本藤泽药品工业株式会社提供（含量99.7%）. 乙腈、甲醇为色谱级，其他化学试剂均为分析纯.
1.2方法
1.2.1色谱条件Discovery C18不锈钢分析色谱柱；流动相为：50 mmol・L-1磷酸盐缓冲液（pH=2.5）：乙腈=85∶15，流速1.0 mL・min-1，检测波长为286 nm.
1.2.2血清样品测定方法取样品血清1.0 mL 于尖底试管中，加入磷酸缓冲液（50 mmol・L-1， pH=2.5） 1.0 mL，漩涡混合1 min，充分混匀后注入固相萃取小柱（SepPak C18 ，预先以2 mL的甲醇活化，并以2 mL 50 mmol・L-1， pH=2.5的磷酸缓冲液冲洗），先用2 mL 50 mmol・L-1， pH=2.5磷酸缓冲液洗去水溶性杂质，再用3 mL甲醇洗脱药物，将甲醇洗脱液置50℃水浴中，以氮气吹干，残渣以0.5 mL流动相定容，进样100 μL进行HPLC分析. Classvp 5.032色谱工作站自动计算并打印头孢克肟的色谱峰面积，将峰面积代入标准曲线方程，求出头孢克肟的血清浓度.
1.2.3标准曲线的制备取空白混合人血清1.0 mL共7份，分置于试管中，分别加入适量头孢克肟标准液，使血清中头孢克肟浓度依次分别为0.1， 0.2， 0.4， 0.8， 1.6， 3.2和4.0 mg・L-1，按上述血清样品测定方法操作，以头孢克肟血清浓度ρ（mg・L-1）对头孢克肟的色谱峰面积A作线性回归，得标准曲线方程为：ρ=9.4519×10-6 A0.0121 （r=0.999， n=6）.
1.2.4回收率取空白血浆3份，加入适量的头孢克肟标准液，分别配制成低、中、高3个浓度的头孢克肟样品（0.12， 0.80和2.80 mg・L-1），按本方法分别各测定含量6次，以实测值与理论值之比计算回收率，结果分别为：（96.39±2.28）%， （97.52±1.79）%和（95.70±2.17）%.
1.2.5精密度取空白血浆3份，加入适量头孢克肟标准液，配制成低、中、高3个浓度的头孢克肟样品（0.12， 0.80和2.80 mg・L-1），在1 d内按本方法重复测定6次，求得日内RSD分别为：2.97， 1.98和2.14%. 在6 d内每日配制低、中、高3个浓度的头孢克肟（0.12， 0.80和2.80 mg・L-1）样品各1份，并于配制当日以本方法测定结果，求得日间RSD分别为：3.66， 2.55和2.26%.
1.2.6受试者及实验方案12名男性健康受试者，均为汉族，年龄(25.2±3.0)岁，体质量(62.9±5.4) kg，身长(170±3) cm；血尿常规、肝肾功能及心电图检查等指标均正常，受试者实验前2 wk及实验期间未用过其他任何药物，无药物过敏史，实验期间禁烟、酒及含药物、乙醇的饮料等，并签订知情同意书. 实验采用标准二阶段交叉设计自身对照法，将12名受试者随机分为两组，每组6人，分别单剂量口服两种制剂200 mg，经1 wk清洗期后，实验两组再交叉服用. 每次服药前晚禁食12 h，于实验当日晨空腹用250 mL温开水吞服药物，服药后4 h进统一标准午餐. 受试者分别于服药前及服药后0.5， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 8， 12， 16和24 h分别静脉采血5 mL，置无菌干燥试管中，离心分离出血清后密封置-20℃冰箱中保存至测定.
1.2.7数据分析处理12名健康受试者的血药浓度时间原始数据用中国药理学会编制的实用药代动力学计算程序3P87处理，求算药代动力学参数. 以梯形法求算AUC，Tmax和ρmax均采用实测值，用孙瑞元等编制的NDST21W统计学软件，将两种制剂中头孢克肟的AUC（0~24 h）、AUC（0inf）、 ρmax和Tmax进行配对双单侧t检验（AUC和ρmax先经对数转换），进行生物等效性评价.
2结果
2.1色谱行为在本色谱条件下，头孢克肟的保留时间为 6.115 min，头孢克肟与血清中内源性杂质可达基线完全分离，确保分析的专一性（Fig 1）.
图1头孢克肟色谱图（略）
Fig 1Chromatograms of Cefixime. （略）
A:Cefixime standard；B: blank serum；C: Sample after oral dose of 200 mg Cefixime Capsules， tR CFX=6.115 min
2.2血药浓度测定用HPLC法测定12名受试者口服两种头孢克肟胶囊后不同时间血清中的头孢克肟浓度，口服受试品（国产）与口服参比品（进口）头孢克肟胶囊中头孢克肟的达峰时间基本一致（以实测值相比）， 头孢克肟浓度时间变化趋势基本一致，但两种制剂的血药浓度值及个体间血药浓度值存在一定的差异（Fig 2）.
●: domestic; ▲: imported.
图2健康志愿者口服200 mg头孢克肟胶囊后血清中头孢克肟的药时曲线（略）
Fig 2Cefixime concentration in serum after a single oral dose of 200 mg cefixime capsules（略）
2.3药动学研究结果表明：两种制剂在健康志愿者体内的处置均符合口服一级吸收一室开放模型（Tab 1）.
表112名健康志愿者口服200 mg头孢克肟胶囊后药代动力学参数（略）
Tab 1Cefixime pharmacokinetics parameters after a single oral dose of 200mg cefixime capsules（略）
2.4生物等效性分析将两种头孢克肟胶囊梯形法计算的AUC（0~24 h）、AUC（0inf）及实测的ρmax， Tmax进行配对双单侧t检验（AUC和ρmax先经对数转换），两种头孢克肟胶囊的以上各参数间均有显著意义（P&>0.05）. 以进口头孢克肟胶囊为参比制剂，以国产头孢克肟胶囊为受试制剂，求得国产头孢克肟胶囊相对生物利用度为104.9% . 结果表明，两种制剂具有生物等效性.
头孢克肟体内血清浓度测定的HPLC方法国内外均有报道［7］，由于头孢克肟极性较强，在有机溶剂中溶解度小等特性，决定了去除头孢克肟血清样品中蛋白时难以用有机溶剂萃取的方法来完成. 本实验
参考文献
的方法，经比较有机溶剂（甲醇、乙腈等）沉淀蛋白和固相小柱萃取的方法，结果显示后者不但去除蛋白效果好，并且可更好的富集、纯化血清中的头孢克肟，提高HPLC的检测能力，更适合于测定浓度较低的头孢克肟血清样品，因此本实验我们采用SPE固相小柱萃取的方法提取血清中头孢克肟. 其方法简单，回收率高，特异性好，灵敏度高，且测定时血清杂质干扰少，具有较高的分离度.12名健康受试者交叉口服200 mg头孢克肟胶囊的主要药动学参数显示，两种制剂在正常人体内的处置均符合血管外给药一室开放模型，与国内外的文献报道基本一致［8-11］. 但两种头孢克肟胶囊的经时血药浓度和药动学参数在不同受试者间仍存在一定的差异，提示临床用药应采取个体化给药，确保患者用药安全有效. 比较两种头孢克肟胶囊中Tmax， ρmax和AUC，国产头孢克肟胶囊均较进口头孢克肟胶囊中略高，分别为：（3.39±0.50）和（3.33±0.48） h；（2.97±0.54）和（2.83±0.55） mg・L-1；（25.88±3.75）和（24.67±4.30） mg・h-1・L-1，但各参数之间均无统计学差异（P&>0.05）. 国产头孢克肟胶囊相对于进口头孢克肟胶囊的生物利用度为104.9%，表明两种制剂在人体内具有生物等效性，可作为进口药的替代品. 本研究中12名受试者在实验期间均未发生任何药物不良反应.
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