作者：路志红 熊利泽 王强 郑玉 张西京
【关键词】 脑缺血
关键词: 刺五加;注射剂;脑缺血;剂量-效应关系，药物
摘 要:目的 探讨刺五加（AS）注射液对脑缺血性损伤的保护作用及量效关系. 方法 40只雄性SD大鼠，随机分为四组（各组n=10），即对照组和AS-2.5，AS-5，AS-7.5组，分别在缺血前腹腔注射生理盐水7.5mL和刺五加注射液2.5mL，5.0mL（均用生理盐水稀释至7.5mL），7.5mL.采用颈内动脉尼龙线线栓法致大脑中动脉栓塞（120min）模型，观察再灌注后24h时神经功能损害并取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积. 结果 再灌注24h时神经功能损害评分，对照组为（2.2±0.8），明显高于各保护组:AS-2.5组（1.3±0.8）、AS-5.0组（1.2±0.8）、AS-7.5组（1.2±0.6），P&<0.05.脑梗死容积对照组为（220±66）mm3 ，明显大于各保护组［AS-2.5组为（116±86）mm3 ，AS-5.0组为（121±79）mm3， AS-7.5组为（104±54）mm3 ］，P&<0.05.各保护组之间神经功能损害评分和脑梗死容积无明显差别. 结论 刺五加注射液对短暂性局灶性脑缺血损伤呈非剂量依赖性保护作用.
Keywords:acanthopanax senticosus;injection;cerebral is-chemia;dose-response relationship，drug
Abstract:AIM To investigate the protective effect of acan-thopanax senticosus（AS）injection，an intravenous drug made from traditional Chinese herb，on transient focal cere-bral ischemic injury in rats.METHODS Forty male SD rats were randomly pided into4groups:Control group（n=10）
received no pharmacologic intervention but normal saline7.5mL，Group AS-2.5（n=10），AS-5（n=10），AS-7.5（n=10）received intraperitoneally acanthopanax senticosus injec-tion2.5mL，5mL（diluted to7.5mL with normal saline）and7.5mL respectively just before middle cerebral artery oc-clusion（MCAO）with3-0nylon monofilament for120min.The neurological outcome was evaluated at24h after reperfu-sion.The infarct volume was then assessed by TTC staining.RESULTS The neurologic deficit score（NDS）of Group AS-2.5（1.3±0.8），Group AS-5（1.2±0.8）and Group AS-7.5（1.2±0.6）at24h after reperfusion was lower than that of the Control group（2.2±0.8），P&<0.05.The infarct volume of the Control group（220±66）mm3 was significantly larger than those of the other three groups ［AS-2.5:（116±86）mm3 ，AS-5.0:（121±79）mm3 ，AS-7.5:（104±54）mm3 ］at24h after reperfusion.There was no difference a-mong AS-treated groups for NDS and infarct volume.CON┐CLUSION Acanthopanax senticosus injection significantly reduces neurologic injury induced by transient MCAO with-out dose-response effect.
0 引言
刺五加（acanthopanax senticosus，AS）注射液主要活性成分为刺五加皂甙（acanthopanax sentico-side，ASS），临床初步验证对缺血性脑血管病有一定的疗效［1］ .实验研究也证实ASS对犬、猫和大鼠心肌缺血再灌注损伤均有保护作用［2-4］ .但迄今无刺五加注射液对与人类中风较为类似的大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）致大鼠脑缺血性损伤影响的研究.因此，我们观察了AS注射液对大鼠MCAO致局灶性脑缺血的保护作用.
1 材料和方法
1.1 材料 40只雄性SD大鼠300～350g（第四军医大学实验动物中心），随机分为4组:对照组（control n=10）、AS-2.5组（n=10）、AS-5.0组（n=10）和AS-7.5组（n=10），分别于阻闭大脑中动脉前ip生理盐水7.5mL，AS注射液2.5mL，5.0mL（均用生理盐水稀释至7.5mL），7.5mL.AS注射液（黑龙江乌苏里江制药有限公司，批号:300416号）.
1.2 方法
1.2.1 局灶性脑缺血模型 术前禁食12h，不禁水.动物用40mL L-1 异氟醚诱导麻醉，20mL L-1 异氟醚吸入维持麻醉深度，保留自主呼吸.术中体温由肛温探头连接多功能监测仪（Spacelab，USA）监测，并用烤灯维持在37.0℃～37.5℃.大脑中动脉阻闭（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型采用右侧颈内动脉尼龙线线栓法，根据Tatlisumak等［5］ 的方法，并参照我们以前的报道［6-8］ ，即动物麻醉后取颈正中切口，暴露右侧颈总动脉、颈外动脉及颈内动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉下方剪一切口，将一预先用乙醇灯烧成圆头的尼龙线（3-0，ETHICON，Japan）置入颈内动脉17.5mm，直到有轻微阻力感为止.阻闭120min后抽出尼龙线，恢复再灌注.
1.2.2 动物恢复及神经行为学评估 麻醉苏醒后，将动物放回鼠笼，自由饮食.脑缺血再灌注后24h，由一不了解分组情况的观察者评估记录神经行为学评分，按Longa等［9］ 的6级评分法:0级，无功能障碍;1级，不能伸展左侧前肢;2级，向左侧旋转;3级，向左侧倾倒;4级，无自主活动伴意识抑制;5级，死亡.
1.2.3 脑梗死灶测量 24h神经行为学评分完成后，动物用0.2g L-1 戊巴比妥钠深麻醉后处死，迅速取出鼠脑，置于冰盐水中10min，取冠状面均匀切成2mm厚脑片，迅速放入0.2g L-1 TTC溶液（37℃）中染色30min，然后用40g L-1 甲醛缓冲液固定.24h后用数码相机（KODAK，DC240USA）拍照，输入计算机，用图像处理软件（ADOBE，PHOTOSHOP5.0）计算梗死面积（粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区），各脑片梗死面积之和乘以厚度（2mm）为总的梗死容积.
统计学处理:数值用x ±s表示.梗死容积用单因素方差分析方法（ANOVA）统计.神经行为学评分用Kruskal-Wallis方法检验.P&<0.05表示统计学差异明显.
2 结果
2.1 神经行为学改变 术后动物均存活.24h时神经功能损害评分对照组（2.2±0.8）明显高于AS-2.5组（1.3±0.8，P&<0.05）、AS-5.0组（1.2±0.8，P&<0.05）、AS-7.5组（1.2±0.6，P&<0.05），各处理组间神经功能损害评分无差异（Tab1）.
表1 缺血（120min）再灌注后24h时各组鼠神经功能损害评分 略
2.2 脑梗死容积 再灌注24h时脑梗死容积，对照组为（220±66）mm3 ，AS-2.5组为（116±86）mm3 ，AS-5.0组为（121±79）mm3 ，AS-7.5组为（104±54）mm3 ，各处理组梗死容积均明显小于对照组（P&<0.05），而各处理组间无显著差异（Fig1）.
图1 略
3 讨论
我们首次应用大鼠MCAO模型，研究了AS注射液对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，结果表明腹腔注射AS注射液2.5，5.0，7.5mL可明显减少大脑梗死容积，显著改善大鼠的神经功能缺陷症状.
关于中药治疗脑缺血方面的研究已有很多［10］ .AS为AS科植物，《神农本草经》列为上品，近年来受到国内外学者的关注.AS注射液系AS的茎叶用常规方法制成的灭菌水溶液，其主要活性成分为ASS［11］ .AS可以促进蛋白质、核酸及ATP合成，提高细胞抵御损伤的能力，在临床上被用于脑出血、脑缺血、心肌缺血、糖尿病等疾病的治疗［12，13］ ，亦可以提高机体对疲劳及寒冷的耐受力.动物实验表明AS对犬实验性心肌梗死及猫脑梗死也有防治作用［2，3］ ，Tian等［4］ 证实AS可改善大鼠离体心脏缺血再灌后的心律失常.
近年来，随着对缺血性脑损伤病理生理研究的不断深入，已从分子水平上揭示了自由基在缺血细胞损伤中的重要作用［14，15］ .中药减少自由基的报道也有很多［16］ .实验研究证实AS能明显抑制机体内自由基产生，显著增加机体SOD活性［1，17］ ，从而对脑缺血再灌注损伤产生明显的保护作用.同时AS可改善血小板凝聚功能，降低血液粘度，增加脑血流量，改善脑组织血供，从而增加脑部供氧，减轻缺血再灌注损伤.药理学研究表明ASS的单体SC1 ，SC3 ，Sb 均具有钙通道阻滞作用［18，19］ .
毒理学研究证实AS几乎无毒性.长期给药，无明显毒性反应.小鼠急性毒性试验，皮下注射ASS的LD50 为4.75g kg-1 .刺五加醇提取液按18g kg-1 （人用量×60倍）、30g kg-1 （人用量×100倍）给兔灌胃，1次 d
-1 ，连续15d，灌药前后血清谷丙转氨酶、麝香草酚浊度与碘反应无显著差异，心、肝、肾、脾等实质性脏器无明显变化.可见其应用剂量安全范围宽.且其在我国北方广泛栽培，药源充足，临床可以广泛推广.
总之，本研究证明AS注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显保护作用，且无明显剂量效应关系.
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