作者：张永清 黄高升 王哲 闫庆国 郭英
【关键词】 淋巴瘤
关键词: BCL-6;原癌基因淋巴结;增生;淋巴瘤;免疫组织化学
摘 要:目的 探讨BCL-6在正常淋巴组织和一组淋巴瘤中的表达与生发中心形成及不同类型淋巴瘤发生的关系. 方法 形态学及免疫组织化学方法对17例反应性增生淋巴组织（RLH）及74例不同类型淋巴瘤进行检测并分类，免疫组化法检测各组织石蜡标本中BCL-6表达情况. 结果 17例RLH生发中心细胞、10例滤泡性淋巴瘤（FL）及4例弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中等强度表达BCL-6;3例FL及21例DL-BCL BCL-6表达为强阳性（72%），高于其他各组（P&<0.01）.17例RLH生发中心外细胞，4例DLBCL，14例小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）、4例套细胞淋巴瘤（MCL）及14例经典型霍奇金淋巴瘤（HD）BCL-6阴性. 结论 BCL-6表达与生发中心形成密切相关.少数FL和大部分DLBCL中BCL-6过表达，可能与这些淋巴瘤发病机制有关.检测BCL-6有助于FL与SLL，MCL间及RLH与HD间的鉴别诊断.
Keywords:BCL-6;proto-oncogenes lymph nodes;hyperplsi-a;lymphoma;immunohistochemistry
Abstract:AIM To study the effects of bcl-6expression on the formation of lymphoid germinal center and the pathogene-sis of different types of lymphomas.METHODS Histomor-phology and immunophenotype of17cases of lymph node re-active hyperplsia（RLH）and74cases of lymphoma were de-tected and classified.BCL-6was detected in both paraffin sections of RLH and lymphoma with immunohistochemistry.RESULTS BCL-6was expressed moderately in cells within the germinal center of the17cases of RLH，in10cases of follicular lymphoma（FL）and in4cases of diffuse large B cell lymphoma（DLBCL）.Three cases of FL and21cases of DL-BCL were found to express BCL-6intensively，with statistic significance in positive intensity between DLBCL and above mentioned groups（P&<0.01），while BCL-6was negative in cells outside the germinal center of the17cases of RLH，in14cases of small lymphocytic lymphoma（SLL），in4cases of mantle cell lymphoma（MCL）and in14cases of classic Hodgkin’s lymphoma（HD）.CONCLUSION There is a close relationship between BCL-6expression and the forma-tion of germinal center.The overexpression of BCL-6in some cases of FLs and DLBCLs may play a key role in their pathogenesis.It may be helpful to detect BCL-6in distin-guishing FL from SLL and MCL and in distinguishing RLH from HD.
0 引言
BCL-6是位于3q27原癌基因bcl-6编码，具有锌指结构的核内转录抑制因子［1］ .BCL-6与部分白血病细胞凋亡［2］ 及B淋巴细胞分化关系密切［3］ ，bcl-6基因缺失，小鼠不能形成生发中心［4］ ，其基因5’端调控区的突变或易位而导致的BCL-6表达异常，推测是某些淋巴瘤发生的基础［5］ .为进一步阐明BCL-6表达与生发中心形成及淋巴瘤发生的关系，我们对17例反应性增生淋巴组织及74例不同类型的淋巴瘤组织中BCL-6表达情况进行了检测.
1 材料和方法
1.1 材料 1980/1999西京医院病理科反应性增生淋巴结（RLH）活检标本17例及不同类型淋巴瘤活检标本74例，标本用10g L-1 中性多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，3μm厚连续切片.所有标本经组织形态学及CD20，CD45RO和CD30（CD20，CD30单克隆抗体均购自丹麦Dako公司，工作浓度1 100;CD45ROmAb购自Sigma公司，工作浓度1 800）相关免疫学标记检测（用Dako EnVision+两步法）后，按1997年WHO淋巴瘤分类草案［6］ 进行分类，RLH17例，FL13例，DLBCL29例，SLL14例，MCL（Men-tle细胞淋巴瘤）4例，HD（霍奇金淋巴瘤）14例.BCL-6mAb购自英国Novocastra公司，Evision+及DAB试剂购自Dako公司.
1.1 方法 石蜡切片用EDTA修复液配合高压修复［7，8］ ，免疫组化采用Dako Evision+两步法（按说明操作），扁桃体炎标本作阳性对照，TBS代替一抗作阴性对照.采用半定量方法评价结果:阴性（-）不着色，阳性为棕黄色胞核，散在棕黄色颗粒为中等强度阳性（+），棕黄色团块为强阳性（）.
统计学方法:采用χ2 检验.
2 结果
2.1 BCL┐6表达 除RLH为CD20及CD45RO双阳性标记外，所有淋巴瘤标本为CD20（+），CD45RO（-）表型，CD30是HD较特异标记（Fig1）.17例RLH及13例FL均表达BCL-6，RLH表达部位为生发中心内细胞，生发中心外细胞不表达BCL-6（Fig2）.FL均表达BCL-6，绝大部分DLBCL表达BCL-6（阳性率为86%）.SLL，MCL及HD均未见BCL-6表达（Tab1）.
表1 RLH及淋巴瘤组织免疫标记及BCL-6表达 略
2.2 BCL┐6表达强度 RLH组BCL-6表达为中等阳性强度（Fig2）.FL组大部分BCL-6亦为中等阳性强度（Fig3），少数（3/13）为强阳性表达（Fig4）.29例DLBCL中，72%为强阳性表达（Fig5），BCL-6表 达阳性强度显著高于以上两组（P&<0.01，Tab2）.
表2 BCL-6在RLH，FL及DLBCL中表达阳性强度情况 略
3 讨论
经免疫学标记检测进一步证实，FL，DLBCL，SLL，MCL及HD主要为B淋巴细胞起源，CD30为霍奇金淋巴瘤的特征性标记之一，本研究中14例HD CD30均为阳性，提示分类可靠.Allman等［3］ 研究发现，BCL-6在多种细胞增殖时表达水平下降，而在细胞分化时表达水平上调.在增殖非常活跃的生发中心B淋巴细胞中，BCL-6mRNA水平与生发中心外静止状态的B细胞水平相当，但BCL-6蛋白水平却可高出外周B细胞30余倍.提示BCL-6蛋白在翻译及翻译后水平受到严格调控.Dent等［4］ 证实BCL-6基因缺陷鼠其淋巴组织不能形成生发中心.本研究用组化方法证实，BCL-6主要表达于正常淋巴组织生发中心，表达水平为中等阳性强度，生发中心以外淋巴细胞不表达BCL-6，与Flenghi等［9］ 的报道一致，进一步证实BCL-6持续表达与生发中心形成密切相关.生发中心这一特殊环境可能提供给B细胞某种刺激信号，使得BCL-6处于持续表达状态，BCL-6表达又是生发中心形成不可缺少的条件.13例滤泡性淋巴瘤均表达BCL-6，大部分表达水平与正常淋巴组织生发中心相似，仅少部分呈强阳性表达.而29例DLBLC有86%患者表达BCL-6，其中绝大部分为强阳性表达.目前多认为DLBCL中BCL-6过表达是因其调控区基因突变或易位所致，而BCL-6过表达又可能导致DLBCL的发生［4］ .
图1 － 图5 略
参考文献:
［1］Chang CC，Ye BH，Chaganti RS，Dalla-Favera R.BCL-6，a PoZ/zinc-finger，is a sequence-specific transcriptional repressor ［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1996;93:6947-6952.
［2］Zhang YG，Huang GS，Guo Y，Wang Z，Tong SY.Apoptosis related gene bcl-6expression increased in K562cell induced by matrine ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（3）:Cover2.
［3］Allman D，Jain A，Dent A，Maile RR，Selvaggi T，Kehry MR，Staudt LM.BCL-6expression during B-cell activation ［J］.Blood，1996;87:5257-5268.
［4］Dent AL，Shaffer AL，Yu X，AllmanD，Standt LM.Control of inflammation，cytokine expression，and germinal center forma-tion by BCL-6［J］.Science，1997;276:589-592.
［5］Lossos IS，Levy R.Mutation analysis of the5’noncoding regu-latory region of the BCL-6gene in non-Hodgkin lymphoma:Ev-idence for recurrent mutations and intraclonal heterogeneity ［J］.Blood，2000;95:1400-1405.
［6］Harris NL，Jaffe ES，Diebold J，Flandrin G，Muller-Hermelink HK，Vardiman J，Lister TA，Bloomfield CD.The World Health Organization classification of neoplastic diseases of the haematopoietic and lymphoid tissues:Report of the Clinical Ad-visory Committee Meeting，Airlie House，Virginia，November1997［J］.Histopathology，2000;36:69-87.
［7］Zhang YQ，Huang GS，Zhao YL，Wang Z，Yan QG，Guo Y.Inactivity mechanism and retrieval of the antigenic activity of BCL-6in paraffin sections ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（5）:1352-1354.
［8］Norton AJ，Jordan S，Yeomans P.Brief，high-temperature heat denaturation（pressure cooking）:A simple and effective method of antigen retrieval for routinely processed tissues ［J］.J Pathol，1994;173:371-379.
［9］Flenghi L，Bigerna B，Fizzotti M，Venturi S，Pasqualucci L，Pileri S，Falini B.Monoclonal antibodies PG-B6a and PG-B6p recognize，respectively，a highly conserved and a formol-resis-tant epitope on the human BCL-6protein amino-terminal region ［J］.Am J Pathol，1996;148:1543-1555.
［10］Merup M，spasokoukotskaja T，Einhorn S，Smith CI，Gahrton G，Juliusson G.BCL-2rearrangemints with breakpoints in both vcr and mbr in non-Hodgkin’s lymphomas and chronic lympho-cytic leukaemia ［J］.Br J Haematol，1996;92（3）:647-652.
［11］Capello D，Vitolo U，Pasqualucci L，Quattrone S，Migliaretti G，Fassone L，Ariatti C，Gaidano G.Distribution and pattern of BCL-6mutation throughout the spectrum of B-cell neoplasia ［J］.Blood，2000;95:651-659.
［12］Raible MD，His ED，Alkan S.BCL-6protein expression by fol-licle center lymphomas.A marker for differentiating follicle center lymphomas from other low-grade lymphoproliferative disorders ［J］.Am J Clin Pathol，1999;112（1）:101-107.转贴于