【关键词】 乳腺肿瘤
关键词: 乳腺肿瘤;nm23;c-erbB-2;基因表达;淋巴转移;原位杂交
摘 要:目的 研究nm23-H1，c-erbB-2基因表达与乳腺癌淋巴结转移的关系. 方法 应用原位杂交技术检测正常乳腺组织30例，乳腺癌原发灶48例及转移淋巴结组织30例中nm23-H1mRNA和c-erbB-2mRNA. 结果 nm23-H1mR-NA失表达在有无淋巴结转移的原发肿瘤之间，组织学Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ分级之间，以及淋巴结转移灶与原发肿瘤之间的差异具有显著性（46.7%vs16.7%;20.0%，30.4%vs53.3%，63.3%vs35.4%，P&<0.05）.c-erbB-2mRNA阳性表达在有无淋巴结转移的原发肿瘤之间，ER阳性与阴性的乳腺癌之间，以及组织学Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ分级之间的差异具有显著性（70.0%vs33.3%;44.8%vs73.7%;30.0%，56.5%vs73.3%，P&<0.05）.c-erbB-2mRNA在淋巴结转移灶与原发肿瘤组织之间的差异具有显著性（86.7%vs56.2%，P&<0.01）. 结论 肿瘤抑制基因nm23-H1和c-erbB-2癌基因在预测乳腺癌淋巴转移有着重要价值.
Keywords:breast neoplasms;nm23;c-erbB-2;gene expres-sion;lymphatic metastasis;in situ hybridization
Abstract:AIM To investigate the relationship between nm23-H1mRNA and c-erbB-2mRNA in breast cancer and lymph node metastasis.METHODS Expressions of nm23-H1mRNA and c-erbB-2mRNA were investigated by using in situ in30non-cancerous normal breast tissues，48primary breast cancer tissues and30metastatic lymph nodes.RE┐SULTS Negative expressions of nm23-H1mRNA mRNA in primary breast cancer tissues having metastases or no-metas-tases，in gradeⅠ，Ⅱ，Ⅲand in metastatic lymph nodes and primary breast cancer were significantly different（46.7%vs16.7%;20.0%，30.4%vs53.3%;63.3%vs35.4%，re-spectively，P&<0.05）.The positive expression of c-erbB-2mRNA in primary breast cancer tissues having metastases or no-metastases，in the estrogen receptor ER+and ER-，as well as in gradeⅠ，Ⅱ，Ⅲwere significantly different（70.0%vs33.3%;44.8%vs73.7%;30.0%，56.5%vs73.3%，respectively，P&<0.05）.The expressions of c-erbB-2mRNA in metastatic lymph nodes and primary breast cancer were significantly different too（86.7%vs56.2%，respec-tively，P&<0.001）.CONCLUSION nm23-H1and c-erbB-2have important value in assessing metastases of lymph nodes in breast cancer.
0 引言
研究表明肿瘤转移是癌基因与抑癌基因共同参与的多元体系，其中nm23和c-erbB-2基因与多种肿瘤转移密切相关［1-4］ .作者自2000-08至今用原位杂交技术检测乳腺癌及其转移淋巴结灶nm23-H1和c-erbB-2基因表达情况，报道如下.
1 材料和方法
1.1 材料 乳腺癌组织及其转移淋巴结标本48例.其中有腋淋巴结转移30例，无腋淋巴结转移18例;ER阳性29例，ER阴性19例;浸润性导管癌38例，浸润性小叶癌5例，其他类型5例;组织学Ⅰ级10例，Ⅱ级23例，Ⅲ级15例.另取来源于良性肿瘤的正常乳腺组织作为对照30例.
1.2 方法 乳腺癌组织及其淋巴结标本离体后即刻固定于40g・L-1 多聚甲醛-0.1mol・L-1 PBS（含1g・L-1 DEPC）中.石蜡标本连续切片4μm厚，用于HE染色和原位杂交.nm23-H1mRNA和c-erbB-2mRNA原位杂交试剂盒购于武汉博士德生物工程公司，探针为地高辛标记的寡核苷酸探针.nm23-H1探针序列:（1）5’-TCTGG TTTGA TCGCA AT-GAA GGTAC GCTCA CAGTT-3’;（2）5’-TCTCT GCACT CTCCA CAGAA TCACT GCCAT GTA-TA-3’.c-erbB-2探针序列:（1）5’-GAGCA CGTAG CCCTG CACCT CCTGG ATATC CTGCA-3’;（2）5’-ATCTT CTGCT GCCGT CGCTT GATGA GGATC CCAAA-3’.主要步骤:石蜡切片常规脱蜡至水，30mL・L-1 过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，胃蛋白酶消化以暴露mRNA片段，预杂交后滴加地高辛标记探针原位杂交液恒温39℃过夜，洗涤后滴加封闭液，生物素化鼠抗地高辛，SABC，生物素化过氧化物酶，DAN显色，细胞核复染，常规脱水、透明、封片.以上各步骤间用缓冲液洗涤.每批实验均设阳性对照和不加探针的阴性对照.以棕黄色颗粒为阳性信号，定位于细胞质内.每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，然后计算平均阳性率.无阳性细胞为失表达，阳性细胞&<30%为+，阳性细胞30%～70%为，阳性细胞&>70%为.
统计学处理:χ2 检验，四格表确切概率法，Ridit分析.
2 结果
2.1 nm23┐H1mRNA原位杂交 正常乳腺上皮细胞nm23-H1mRNA表达均清楚显示 阳性染色.乳腺癌原发肿瘤和淋巴结转移灶中nm23-H1mRNA失表达率分别为35.4%和63.3%（Tab1，Fig1，2），与正常乳腺组织比较差异非常显著（P&<0.001）.nm23-H1mRNA失表达在有无淋巴结转移的乳腺癌之间（分别为46.7%，16.7%），以及在淋巴结转移灶与乳腺癌原发肿瘤之间（分别为63.3%，35.4%）的差异显著（P&<0.05）.nm23-H1mRNA在乳腺癌ER阳性与阴性之间无差异性（P&>0.05）.nm23-H1mRNA表达强度在乳腺癌Ⅰ～Ⅲ级之间的差异显著（P&<0.05，Tab2）.
2.2 c┐erbB┐2mRNA原位杂交 正常对照乳腺上皮细胞30例c-erbB-2mRNA均呈阴性表达.乳腺癌原发肿瘤48例和淋巴结转移灶30例中c-erbB-2mRNA阳性表达率分别为56.2%和86.7%（Tab1，Fig3，4），与正常乳腺组织之间的差异具有非常显著性（P&<0.001）.c-erbB-2mRNA阳性表达在有无淋巴结转移的乳腺癌原发肿瘤之间（分别为70.0%，33.3%），以及在乳腺癌ER阳性与ER阴性之间（分 别为44.8%，73.7%）的差异具有显著性（P&<0.05）.c-erbB-2mRNA在淋巴结转移灶与原发肿瘤之间（分别为86.7%，56.2%）的差异具有显著性（P&<0.01）.c-erbB-2mRNA表达强度在乳腺癌Ⅰ～Ⅲ级之间差异具有显著性（P&<0.05，Tab2）.
表1 乳癌组织nm23-H1mRNA和c-erbB-2mRNA表达 略 表2 乳腺癌组织学分级与nm23-H1mRNA，c-erbB-2mR-NA表达强度 略
3 讨论
目前有关nm23基因与乳腺癌的研究较少.Midulla等［5］ 发现nm23-H1阳性表达与乳腺癌组织学分级有关.本研究表明乳腺癌原发肿瘤组织和淋巴结转移灶中nm23-H1mRNA失表达率明显增加，提示nm23-H1mRNA基因失表达可致乳腺细胞恶性转化.nm23-H1mRNA失表达在有无淋巴结转移，及组织学不同分级的乳腺癌原发肿瘤之间的差异有显著性（P&<0.05），表明nm23-H1mRNA可预测乳腺癌是否有淋巴结转移和肿瘤的恶性程度.淋巴结转移灶nm23-H1mRNA失表达比乳腺癌原发肿瘤组织中的失表达更明显（P&<0.05），提示检测淋巴结转移灶nm23-H1mRNA更易反映肿瘤转移程度.
图1 略
本研究表明正常对照乳腺组织c-erbB-2mRNA表达均呈阴性表达.而乳腺癌原发肿瘤和淋巴结转移灶中c-erbB-2mRNA阳性表达与正常乳腺组织之间的差异非常显著（P&<0.001）;在有无淋巴结转移的乳腺癌原发肿瘤，乳腺癌Ⅰ～Ⅲ级之间，以及在乳腺癌ER阳性与阴性之间的阳性表达明显不同（P&<0.05），提示c-erbB-2mRNA基因在乳腺癌发展中起着重要作用，与多数研究结果相一致［6］ .目前对淋巴结转移灶中c-erbB-2基因在判断乳腺癌预后重要价值的研究较少.我们还发现c-erbB-2mRNA在淋巴结转移灶与原发肿瘤之间的差异显著（P&<0.05），表明淋巴结转移灶c-erbB-2mRNA失表达比乳腺癌原发肿瘤中的失表达更明显，检测转移淋巴结灶nm23-H1mRNA有更大的价值.
综上说述，c-erbB-2mRNA高水平有抑制癌细胞转移作用，而低水平表达使癌细胞容易发生转移.c-erbB-2癌基因阳性表达对乳腺癌分化程度及预测淋巴结转移也有着重要价值.
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