【关键词】 螺杆菌
关键词: 幽门;螺杆菌;细胞毒素相关蛋白A;胶体金;免疫渗滤;抗体
1 材料和方法
1.1 材料 血清标本由第四军医大学西京医院消化门诊及西安市中心医院消化内科提供.实验用氯金酸（成都化学试剂厂），葡萄球菌A蛋白（SPA，上海申索公司），细胞毒素相关蛋白A（CagA，第四军医大学全军基因诊断技术研究所制备），酶联免疫吸附试验检测抗CagA-IgG试剂盒（上海晶莹公司）.
1.2 方法 去离子水溶解氯金酸，煮沸后加入10g・L-1 柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸7min，待冷却后电镜观察胶体金颗粒直径和形状.取颗粒直径为15nm的胶体金溶液，用0.1mol・L-1 K2 CO3 调至pH6.2，搅拌下加入1g・L-1 SPA，继续搅拌;加入50g・L-1 BSA，继续搅拌5min.4℃3000r・min-1 离心5min，弃沉淀，上清液以12000r・min-1 离心15min，沉淀即为制备的胶体金.用悬浮液悬浮，4℃保存.在硝酸纤维素膜上固相CagA抗原，用50g・L-1 BSA封闭2h，用0.01mol・L-1 PBS洗涤，干燥后依次装入自制的渗滤装置，干燥剂封闭，4℃保存.抗Hp-CagA IgG的检测用0.01mol・L-1 PBS将硝酸纤维素膜活化，0.015～0.03mL血清滴加在硝酸纤维素膜上，完全渗入后，用0.01mol・L-1 PBS洗涤，再将已标记好的胶体金0.02mL滴加在硝酸纤维素膜上，待完全渗入，再次洗涤.以试剂盒硝酸纤维素膜上出现红色致密斑块且边缘清晰者为阳性，若无红色斑块出现则为阴性.结果确定时间为3～5min. 2 结果
用预先处理好的覆盖有Formvar膜的镍网浸入胶体金溶液中，取出放置空气干燥，然后在透射电镜下观察，可见胶体金颗粒大小均匀一致，颗粒直径为15nm.本法与ELISA试剂盒对比检测西京医院门诊及市中心医院326例患者血清中的抗Hp-CagA IgG，结果满意.以ELISA检测Hp-CagA抗体试剂盒作为参照标准，DIGFA法的特异性95.8%，敏感度97.3%，总符合率96.6%.DIGFA试剂盒于4℃下放置6mo，每月检测抗Hp-CagA IgG阳性及阴性血清各50份，该试剂盒的各种性能指标均稳定.将DIGFA试剂盒于37℃恒温箱内置6d，做热稳定性试验，与放置4℃的试剂盒对照，结果无显著差异.
3 讨论
目前公认的细菌培养、呼气试验（UBT）、组织染色等创伤性检测方法虽具有高敏感与特异性，可作为Hp感染诊断标准，但上述方法痛苦大、所需仪器昂贵、操作步骤烦琐费时、需要专业人员.其中呼气试验对患者和医务人员以及周围环境的污染尚未解决，故无创伤性检测Hp感染是诊断Hp感染的发展方向.近年CagA阳性Hp感染的诊断方法已有很大进展，特别是血清学检测方法，因其为非侵入性检测手段并且经济、简便、快速而倍受重视［1，2］ .ELISA法有较高特异性和敏感性被临床认可，但需专业人员和仪器，操作时间长.我们研制的方法，经临床检测具有敏感性高，特异性强，稳定性及重复性好，操作快速、简便等优点.该试剂盒结构简单，易于判断结果，检测时间仅需3～5min，无需任何设备.鉴于该方法的诸多优点，因而具有广泛的应用价值，值得推广.
参考文献
［1］Mclaughlin P.Treatment of follicular and other indolent lym-phomas ［J］.Cuur Opib Oncol，1999;11:333-338.
［2］庄小强，林三仁.幽门螺杆菌与胃癌的研究进展［J］.世界华人消化杂志，2000;5（2）:2206-2207.