【关键词】 高效液相色谱
关键词: 高效液相色谱;脑脊液;吲哚类
0 引言
5-羟色胺（5-HT）是重要的中枢神经递质，与其前体色胺酸（TRP）、5-羟色胺酸（5-HTP）和代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）统称为吲哚类物质，是研究中枢5-HT代谢的重要指标［1，2］ .为了了解中枢5-HT的代谢状况，我们采用高效液相色谱法［3，4］ 测定妇女脑脊液中四种吲哚类物质获得满意效果.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 日本日立公司的高效液相色谱仪包括638-53型主机;650-10LC荧光检测器;色谱柱:YWG-C18 H37 ，150mm×4mm;颗粒直径5μm;预柱:YWG-C18 H37 ，50mm×4mm.
1.1.2 标准品及试剂 标准品:色胺酸（BDH，批号5507760，AG）、5-羟色胺酸（FLUKA，批号56590，AG）、5-羟色胺（Switzerland，批号，AG）、5-羟吲哚己酸（5-HIAA，批号Fluka，AG）.试剂:磷酸二氢钾（西安化学试剂厂）、甲醇（西安化学试剂厂AG）.
1.2 方法
1.2.1 储备液、标准液的配制 精确称取不同量的4种标准品，用甲醇（V）∶水（V）=80∶20稀释成不同浓度的混合储备液（TRP710mg・L-1 ，5-HTP310mg・L-1 ，5-HT380mg・L-1 ，5-HIAA230mg・L-1 ），测定样品前稀释1000倍成为工作液.
1.2.2 工作条件 流动相A液:甲醇800mL・L-1 ;流动相B液:Kh3 PO4 （0.02mol・L-1 ，pH4.75）:甲醇955mL・L-1 .线形梯度:流动相从0增加到35%，分析时间30min.柱温30℃，荧光波长290/330nm，狭缝10，灵敏度1.
1.2.3 样品预处理 取妇女腰池脑脊液30μL以5000r・min-1 ，4℃离心5min，上清液置于带盖聚已稀塑料管内，储于-20℃冰箱在2wk内测定或立即测定.取20μL标准品混合工作液或20μL脑脊液样品进样分析.
2 结果
2.1 标准曲线 各标准品的线性范围、相关系数、直线回归方程、标准品峰高的变异系数和相对误差见表1，取标准品峰高均值按相关关系计算可得相应品峰浓度.
表1 各标准品的线性范围、相关系数和直线回归方程（略） 2.2 回收率和灵敏度 回收率平均为（98.3±4.1）%.最低检测线10pg.
2.3 色谱分离图及样品检测结果 标准品和脑脊液样品色谱分离见图1，对2组不同年龄妇女脑脊液检测结果见表2.
图1 略
表2 妇女脑脊液中吲哚类物质浓度 （略）
3 讨论
我们采用高效液相色谱反相梯度结合洗脱结合自然荧光检测法，一次进样20μL同时分析人脑脊液中TRP，5-HTP，5-HT，5-HIAA等4种物质.分析时间仅30min，分离效果好.线性范围较广0～15μg，线性关系的相关系数平均为0.9920.本法精度高，各标准品峰高的平均变异系数2.85±0.94.被测物质在脑脊液中的回收率平均为（98.3±4.1）%，表明准确性较高.最底检测限为10ng.实验发现更年期妇女脑脊液中色氨酸水平显著低于育龄组，是否与卵巢功能衰退有关须进一步研究.实验表明，本法样本预处理及操作过程简便，经济实用，可直接应用于临床检验.
参考文献
［1］Sjogren M，Minthon L，Passant U et al.Decreased monoamine metabolites in frontotemporal dementia and Alzheimer’s disease ［J］.Neurobiol Aging，1998;19（5）:379-384.
［2］Martinez M，Arnalich F，Vazquez JJ etal.Altered cerebrospinal fluid amino acid pattern in the anorexia of aging:Relationship with biogenic amine metabolism ［J］.Life Sci，1993;53（21）:1643-1650.
［3］Traiffort E，Hubert P，Tayeb N etal.Rapid determination of5-hydroxytryptamine in whole blood by liquid chromatography with fluorescence detection ［J］.J Chromatogram，1991;571:231-234.
［4］陈亚琼，叶雪清.高效液相色谱法测定妇女血浆吲哚类神经递质［J］.第四军医大学学报，1995;16（4）:309-310.