作者：陈晓莉，文爱东，赵磊，王萌，吴寅，李宏力
【关键词】 富马酸酮替芬
【Abstract】 AIM: To investigate the pharmacokinetics and bioequivalence of ketotifen fumarate in healthy volunteers. METHODS: A single oral dose of the tested and control ketotifen fumarate was given respectively to 12 healthy volunteers in a randomized twoperiod crossover study. The serum concentration of the two drugs was determined at different time points within 36 hours following the administration by liquid chromatographicmass spectrometric. The main pharmacokinetics parameters were calculated and the bioequivalence was evaluated by two oneside t test and 90% confidence intervals. RESULTS: The main pharmacokinetics parameters were tmax: （2.7±1.2） and （3.1±1.4）h， cmax: （407±147）and（389±168）ng/L， t1/2:（5.5±1.6）and（5.7±2.6）h， and AUC:（2900±1043）and（2763±977）ng/(h・L). The relative bioavailability of the tested drug was (112±39)%. CONCLUSION: Compared with the control， tested ketotifen fumarate has the advantages of faster absorption and higher bioavailability. The results of statistical analysis indicate that the two drugs are bioequivalent in healthy volunteers (P&<0.05).
【Keywords】 ketotifen fumarate; chromatography， liquid; spectrum analysis， mass; Pharmacokinetics; biological availalility
【摘要】 目的： 研究富马酸酮替芬分散片在健康人体的药代动力学特征及其生物等效性评价. 方法： 12名健康志愿受试者，采用标准二阶段交叉设计试验方法，分别单剂量po富马酸酮替芬分散片（受试品）和富马酸酮替芬片（参比品）2 mg，以液相色谱质谱质谱联用法测定服药后36 h内不同时刻的血药浓度，计算主要药动学参数，并采用双单侧t检验和90%置信区间进行生物等效性评价. 结果： 受试者分别po受试品和参比品后，两者主要药动学参数tmax， cmax， t1/2和AUC（0-36h）分别为：（2.7±1.2）和（3.1±1.4） h；（407±147）和（389±168） ng/L；(5.5±1.6)和(5.7±2.6) h；(2900±1043)和 (2763±977) ng/(h・L)，受试品的相对生物利用度为(112±39)%. 结论： 富马酸酮替芬分散片和普通片剂相比，具有吸收快、生物利用度较高的优点；统计学结果表明，两种制剂具有生物等效性（P&<0.05）.
【关键词】 富马酸酮替芬；色谱法，液相；光谱分析，质理；药代动力学；生物利用度
0引言
富马酸酮替芬（Kitotifen fumarate， KF）为第2代抗变态反应药，临床上主要用于治疗支气管哮喘、过敏性鼻炎和湿疹等变态反应疾病. 因酮替芬的水溶性较差，口服吸收慢，且生物利用度低，为此，我们试制出富马酸酮替芬分散片制剂，它集片剂和液体制剂的优点，服用方便、药物溶出快、体内吸收迅速、生物利用度高，可更好地提高疗效. 为评价富马酸酮替芬分散片在人体内的生物效应，我们采用二阶段自身交叉对照的试验方法，初步研究了富马酸酮替芬分散片在健康志愿者体内的药代学特征及生物等效性，为临床合理用药［1-3］提供参考依据.
1材料和方法
1.1材料
① 仪器： API4000型液相色谱质谱质谱联用，配有离子喷雾离子化源以及LCQ 1.2数据处理系统（美国Applied Biosystems公司），HP1100输液泵和HP100自动进样器（美国Agilent公司），色谱柱ZorbaxXBDC18柱，5 μm粒径，150×4.6mm I.D（美国Agilent公司）. ② 药品和试剂： 受试制品为富马酸酮替芬分散片（批号为20010903， 1 mg/片）；参比制剂为富马酸酮替芬片（浙江可立思安制药有限公司研制，批号为20010701， 1 mg/片）；富马酸酮替芬对照品（中国药品生物制品检定所，含量&>99.0%）；内标为盐酸苯海拉明（中国药品生物制品检定所，含量&>99.4%）；甲醇和乙腈（色谱纯，美国Fisher Scientific Ltd）；其余试剂均为分析纯. ③ 色谱条件： 流动相为乙腈水甲酸（80∶20∶0.5 v/v/v），流速为 0.4 mL/min，柱温为室温. ④ 质谱条件： 检测方式为正离子检测；离子源为离子喷雾离子化源，离子喷射电压为500 V；温度为500℃；源内气体1（GS1，N2），流速为50 a.u；气体2（GS2，N2），压力为10 Pa；扫描方式采用多重反应监测（MRM）方式，DP电压微70 V ；碰撞气（N2），压力为5 Pa；定量分析时的碎片离子M/z 310→97(酮替芬)和M/z 256→167(内标物)；碰撞诱导解离（CID）电压为33 eV(酮替芬)和25 eV(内标物).
1.2方法
1.2.1给药方案选择健康男性志愿者12名，年龄为（24.1±3.0）岁，身高(172.7±3.3) cm，体质量在标准体质量的±10%之内，无既往病史，精神状态良好. 不吸烟，不喝酒，试验前14 d内未用过任何药物. 本试验采用双周期交叉试验设计，两次试验之间间隔1 wk. 受试者于每次试验前日晚20：00开始禁食，于试验当日晨8：00空腹用240 mL温开水按规定的剂量及方法给药，服药后2 h和5 h进统一标准午餐. 服药后受试者在室内休息，采血期间禁烟酒及含咖啡因的饮料.
1.2.2样品采集于po各药前（0 h）和服药后0.5， 1， 2， 3， 4， 5， 6， 8， 12， 24和36 h采集静脉血5 mL，并立即移入经肝素处理的离心试管中，离心10 min（3000 r/min），将血浆置于无菌干燥塑料管中，于-20℃保存，在14 d内完成酮替芬的血药浓度测定.
1.2.3样品测定取血浆0.5 mL，加甲醇水（50∶50， v/v）混合溶液、内标溶液（100 μg/L盐酸苯海拉明甲醇溶液）和Na2CO3溶液（1 mol/L）各100 μL，混匀；加提取试剂乙醚正己烷（1.5∶1， v/v）3.0 mL，涡流1 min，往复振荡10 min，离心5 min（3000 r/min），取上层有机相于40℃空气流下吹干，残留物于200 μL流动相中溶解，取20 μL进行LC/MS/MS分析.
1.2.4标准曲线的制备取空白血浆0.5 mL，加酮替芬标准系列溶液100 μL，配制成相当于浓度为10， 25， 80， 250， 800， 2000和4000 ng/L的血浆样品，每种浓度做2份样品，按“1.2.3”项下操作，记录各色谱峰的峰面积. 以待测物与内标物的峰面积比值（y）对酮替芬的浓度（c）进行回归，在10~4000 ng/L范围内线性良好，得到标准曲线的回归方程为： y=1.321×10-4c+7.466×10-3 (r=0.9985).
1.2.5方法的精密度取空白血浆加入适量酮替芬标准溶液，分别配制成10， 250， 3600 ng/L的低、中、高3个浓度样品，在1 d内重复测定3次，求得日内精密度分别为8.19%， 4.29%和5.09%. 将同法配制的3个浓度样品在3 d内陆续测定3次，求得本法的日间精密度分别为5.23%， 4.07%和6.91%.
统计学处理： 以梯形法计算AUC（0-36 h）， AUC(0-∞)， tmax， cmax采用实测值，以消除相血药浓度对数与对应点时间进行回归，计算药物消除半衰期. 将两制剂的AUC， cmax经对数转换后进行双单侧t检验并计算90%置信区间以评价生物等效性.
2结果
2.1方法的专属性在本试验所采用的色谱质谱条件下，酮替芬和内标的保留时间均为2.8 min， 酮替芬和内标的峰形良好，无杂质干扰，基线平稳，可确保分析的专一性（Fig 1）.
2.2药代动力学以梯形法计算AUC（0-36 h）， AUC(0-∞)， tmax， cmax采用实测值，以消除相血药浓度对数与对应点时间进行回归，计算药物消除半衰期. 受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数分别为： tmax （2.7±1.2）和（3.1±1.4） h；cmax （407±147）和（389±168） ng/L；t1/2ke (5.5±1.6)和(5.7±2.6) h；AUC（0-36 h）(2900±1043)和 (2763±977) ng/（h・L）；AUC(0-∞)（3153±1094）和（3006±995）ng/（h・L）.
2.3生物等效性的评价将主要药代动力学参数AUC（0-36 h）， AUC(0-∞)， cmax经对数转换后进行双单侧t检验（α=0.05）并计算受试品与参比品各参数比值的90%置信区间，结果均拒绝不等效假设（P&<0.05， Tab 1）. 富马酸酮替芬分散片对富马酸酮替芬片的相对生物利用度为(112±39)%，两种制剂在人体内具有生物等效性.表1po两种酮替芬制剂后主要药动学参数双单侧t检验结果和90%置信区间（略）
3讨论
目前国内外关于测定血浆中酮替芬含量的方法有紫外分光光度法和反相高效液相［4，5］色谱法. 因富马酸酮替芬制剂中酮替芬的含量较低，po 2 mg富马酸酮替芬后血浆中酮替芬的浓度仅为ng/L级，而上述测定方法检测极微量物质的灵敏度较低，其具有良好线性关系的检测范围分别为2~10 mg/L和0.08~0.88 mg/L，本研究我们采用的液相色谱质谱联用法检测的线性范围可达到10~4000 ng/L，其高度的检测灵敏性可确保测定血浆中的极微量酮替芬浓度的准确性和可靠性. 在流动相的选择上，选用乙腈水甲酸，甲酸为有机酸，可增加酮替芬的溶解，弥补了文献［5］中采用盐酸的不足，同时减少了对色谱柱的损耗.
本研究以梯形法计算AUC（0-36 h）， tmax， cmax采用实测值，通过对主要药动学参数进行方差分析、双单侧t检验，结果表明，12名受试者服用受试制剂和参比制剂后，两组之间各药动学参数无显著性差异，说明两种制剂在12名受试者体内的处置情况较为相似. 富马酸酮替芬分散片AUC（0-36 h）， cmax略高，tmax略低，其相对于富马酸酮替芬片的相对生物利用度为（112±39）%，表明两种制剂在人体内具有生物等效性.
参考文献
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