幼泻宁颗粒质量标准研究

【摘要】 　　［目的］建立幼泻宁颗粒的质量标准。［方法］采用薄层色谱法对方中白术和车前草进行定性鉴别；另采用高效液相色谱法对白术的含量进行研究。［结果］建立了专属性较强的白术和车前草的薄层色谱鉴别方法。［结论］该标准简便、准确，可有效地控制幼泻宁颗粒的质量。

【关键词】 幼泻宁颗粒；薄层色谱；白术；车前草

　　Abstract： ［Objective］ To establish a quality standard of Youxiening Granules.［Methods］ Use TLC method to identify the quality of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Herba Plantaginis.Use HPLC method to investigate the content measurement of Rhizoma atractylodis macrocephalae.［Results］ To establish TLC methods with good specificity of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Herba Plantaginis.［Conclusion］ The quality standard is simple，accurate and can be used for the quality control of Youxiening Granules.

　　Key words：Youxiening Granules; TLC; Atractylodes ovata; plantago seed
　　
　　幼泻宁颗粒由白术、炮姜和车前草三味药材组成，具有健脾利湿，温中止泻。用于小儿脾失健运消化不良引起的腹泻［1］。现行标准只有理化鉴别，难以有效地综合评价其内在质量。作者对处方中的三味药材均进行了薄层色谱研究，并对其中主药白术的含量测定方法进行研究，最终制定了白术和车前草的薄层色谱鉴别方法，白术的含测方法因其含量太低未收入标准。

　　1 仪器与试药

　　HP1100系列高效液相色谱仪，TU1901型紫外可见分光光度计。对照药材均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为白术120925200407、干姜120942200505、车前草121543200501、平车前草121387200502；白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对照品由沈阳某大学提供（纯度均大于98%） 。幼泻宁颗粒由正大青春宝药业有限公司（批号为0805001，0805003，0805021）和湖南三九制药有限公司（批号为20070701，20071101，20080301）提供。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 白术定性鉴别

　　2.1.1 供试品溶液的制备

　　取本品12g，研细，加水40ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺白术的阴性对照样品12g，同法制成阴性对照溶液。

　　2.1.2 对照药材溶液的制备

　　取白术对照药材1g，加水40ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。

　　2.1.3 薄层层析板

　　硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂生产）。

　　2.1.4 薄层色谱法

　　照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，展开8cm，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热，置紫外光灯（365nm）下检视。结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显2个亮蓝色和蓝紫色的荧光主斑点，阴性样品无此斑点，见图1。

　　2.2 车前草定性鉴别

　　2.2.1 供试品溶液的制备

　　取白术的供试品溶液，作为供试品溶液。另取缺车前草的阴性对照样品12g，同法制成阴性对照溶液。

　　2.2.2 对照药材溶液的制备

　　分别取车前草和平车前草对照药材各2g，加水40ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液加乙醚振摇提取2次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml溶解，作为对照药材溶液。

　　2.2.3 薄层层析板

　　聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产，薄层层析用）。

　　2.2.4 薄层色谱法

　　照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以50%乙酸为展开剂，展开8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显2个亮蓝色的荧光主斑点，阴性样品无此斑点，见图2。

　　2.3 白术的含量测定

　　2.3.1 对照品溶液的制备和纯度检查

　　精密称取白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对照品适量，加甲醇制成每1ml含白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各约1mg的溶液，各进样10μl，在本实验条件下，按面积归一化法计算纯度均大于98%。另精密吸取上述各对照品溶液2μl，置同一10ml的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品混合溶液。

　　2.3.2 供试品溶液的制备

　　取本品，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.3.3 色谱条件与系统适用性

　　以Agilent Kromasil C18（4.6×250mm 5μm）为色谱柱；乙腈水（65∶35） 为流动相；流速1ml/min；检测波长为220nm；进样量对照品溶液10μl、供试品溶液20μl；柱温25℃。在此条件下，供试品色谱图中未检出白术内酯Ⅱ，白术内酯Ⅰ和Ⅲ的含量分别约为1μg/g和10μg/g，含量太低（见下图3）。

　　3 讨论

　　3.1 白术的鉴别

　　比较了不同的展开剂环己烷乙酸乙酯（7∶3）和环己烷甲苯乙酸乙酯（14∶3∶3），结果前者斑点分离较好；又比较不同的显色剂：10%硫酸乙醇和5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇，结果后者显出的斑点更多且清晰。

　　3.2 车前草的鉴别

　　车前品种繁多，不同种间化学成分存在差异。主要化学成分有环烯醚萜苷类、黄酮类、酚酸类等等［2］。供试品制备时分别用三氯甲烷、水饱和的正丁醇和乙醚振摇提取，结果三氯甲烷提取液几无明显斑点；水饱和的正丁醇提取液所显示的斑点较多，但阴性样品有干扰，故选择用乙醚提取液作为供试品溶液。中检所提供的车前草对照药材有两个不同的来源，分别为车前和平车前。实验中也比较了这两种对照药材，斑点接近，认为这两种车前草均可作为本薄层鉴别的对照药材。实验中还比较了不同的展开系统：先比较了硅胶G板（以乙酸乙酯∶甲醇∶水（8∶1∶1）展开）和聚酰胺薄膜（以36%乙酸展开），结果硅胶G板展开后供试品色谱中底色较深，故选择聚酰胺薄膜。又分别比较了36%乙酸、10%乙酸和50%乙酸三种不同的展开剂，结果显示50%冰乙酸展开后斑点的Rf值最合适。

　　3.3 炮姜的鉴别

　　实验还对炮姜的薄层色谱方法进行研究。以干姜对照药材为对照，结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上所显斑点不明显，且两个厂家的样品差异较大，且炮姜为干姜的炮制品，炮制后成分会有所改变，以干姜作为对照药材不是非常合适，故未把该鉴别方法列入标准。

　　3.4 含量测定

　　据报道，白术中主含挥发油，而白术中有抗炎作用的为白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［3］，故研究了白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量测定方法，因含量较低，未列入正文标准。实验中还考察了白术药材、白术片和麸白术三个不同规格白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量，发现白术药材和饮片中白术内酯Ⅱ的含量最高，但含量大多小于0.02%，作为质控指标意义不大。

参考文献

　　［1］中华人民共和国卫生部药典委员会编.卫生部药品标准中药成方制剂［S］第5册.1993:49.

　　［2］蔡少青，王璇.常用中药材品种整理和质量研究（第4，5，6册）［M］.北京：北京医科大学出版社，2001：278.

　　［3］中华人民共和国卫生部药政管理局和中华人民共和国药品生物制品检定所编.现代实用本草［M］.北京：人民卫生出版社，1996：246.