大荆山银花和山东金银花的含量比较

【摘要】 　　［目的］通过高效液相色谱法测定大荆山银花和山东金银花绿原酸和木樨草苷的含量情况，进行药用价值的比较。［方法］绿原酸通过岛津液相色谱仪（SPD10AVP）用2005年药典规定方法对大荆产山银花及山东金银花进行含量测定；木樨草苷通过。Agilent（安捷伦）1200 用2005年药典规定方法对两样品进行含量测定。［结果］大荆山银花 绿原酸2.390%，木樨草苷1.030%山东金银花 绿原酸 3.228%，木樨草苷1.030%。［结论］大荆产山银花及山金银花均符合药典规定。

【关键词】 银花；绿原酸；木樨草苷；高效液相色谱法

　　浙江乐清，金银花习用当地产的大荆山银花。浙江乐清大荆山区有许多农民栽种山银花，供当地医院及药店使用。其来源与性状较山东金银花有较大区别。山东金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收，干燥。当地山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.Mazz的干燥花蕾或带初开的花［1］。二者价格也相差较大，当地大荆产山银花比山东金银花价格低廉。现在以大荆当地山银花及山东金银花为样品，对二者的绿原酸及木樨草苷的含量进行比较。

　　1 仪器与材料
　　
　　（1）仪器：绿原酸：岛津液相色谱仪（SPD10AVP）；木犀草苷：Agilent（安捷伦）1200。（2）标准品：绿原酸标准品（批号：110753-200413）、木樨草苷标准品（批号：111720-200604）均由中国药品生物制品检定所提供。（3）供试品：样品1：山东金银花（生产批号：20090512），为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb的干燥花蕾，由胡庆余堂提供。样品2：大荆山银花（生产批号：20090602）为忍冬科植物灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz的干燥初开的花，由乐清中医院提供。样品1及样品2粉碎，过四号筛，备用。

　　2 方法与结果［2］

　　2.1 色谱条件与适应性试验

　　绿原酸：用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈—0.4%磷酸溶液（13∶87）为流动相；检测波长为327nm。理论塔板数按绿原酸计算，应不得低于1000。木樨草苷：用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A；以0.5%冰醋酸溶液为B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为350nm。理论塔板数按木犀草苷峰计算，应不低于2000。表1 样品流动相测定（略）

　　2.2 对照品溶液及供试品溶液的置备

　　2.2.1 对照品溶液的置备

　　绿原酸：精密称取绿原酸适量，置棕色容量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含340μg的溶液，即得（10℃以下保存）。木樨草苷：精密称取木犀草苷对照品适量，置棕色量瓶中，加70%乙醇制成每1ml含4.32mg的溶液，即得。

　　2.2.2 供试品溶液的置备

　　绿原酸供试品溶液的置备：取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250w，频率35kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，精密量取续滤液5ml置25ml棕色瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
　　
　　木樨草苷供试品溶液的制备：取本品细粉（过四号筛）约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声（功率250w，频率35kHz）处理60min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.3 线性关系考察

　　分别精密吸取绿原酸对照品液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml，置于10ml 容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，按2.1色谱条件，精密进样10μl，以绿原酸含量为横坐标，峰面积值为纵坐标，进行线性回归，求得回归方程：Y=1430600X－16014，R2=0.9998。结果表明绿原酸在0～1.36μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

　　分别精密吸取木犀草苷对照品液0.125ml、0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml，置于10ml 容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，按2.1色谱条件，精密进样10μl，以木犀草苷含量为横坐标，峰面积值为纵坐标，进行线性回归，求得回归方程：Y=2563.1X+174.57，R2=0.9995。结果表明木犀草苷在0～8.64μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.4 精密度试验

　　取样品1粉末，按2.2.2制备供试品液，按2.1色谱条件，分别精密进样10μl，连续进样5次，分别测定供试品液中绿原酸与木犀草苷的含量，结果绿原酸RSD为1.83%；木犀草苷RSD为1.52%，表明本法精密度良好。

　　2.5 重现性试验

　　取样品1粉末约0.5g，按2.2.2制备供试品液5份，按2.1色谱条件测定绿原酸的含量，结果RSD为2.34%。表明本法测定绿原酸重现性良好。

　　取样品1粉末约3g，按2.2.2制备供试品液5份，按2.1色谱条件测定木犀草苷的含量，结果RSD为1.97%。表明本法测定绿原酸重现性良好。
7稳定性试验 取样品1粉末，分别按2.2.2制备绿原酸与木犀草苷供试品液（在室温25℃下保存），按2.1色谱条件，在0、1、4、8、12、24h分别测定绿原酸与木犀草苷峰面积，结果绿原酸RSD为1.66%；木犀草苷RSD为1.34%。实验结果表明，供试品溶液在24h内稳定。

　　2.6 加样回收试验

　　称取已知绿原酸含量的金银花粉末0.25g，平行5份，分别精密加入适量的绿原酸对照品。按2.2.2项下制备方法制备供试品液，按2.1色谱条件测定绿原酸的含量，计算回收率，结果平均回收率（%）为98.54%，RSD%为1.78%。称取已知木犀草苷含量的金银花粉末1.5g，平行5份，分别精密加入适量的木犀草苷对照品。按2.2.2项下制备方法制备供试品液，按2.1色谱条件测定木犀草苷的含量，计算回收率，结果平均回收率（%）为101.34%，RSD%为1.69%。

　　2.7 样品中绿原酸与木犀草苷的含量测定

　　取样品粉末（过三号筛），约0.5g，精密称定，按2.2.2项下制备供试品液。精密进样10μl，按2.1色谱条件测定，山东金银花、大荆山银花绿原酸含量结果见表2。表2 样品的含量测定（略）

　　取样品粉末（过三号筛），约3g，精密称定，按2.2.2项下制备供试品液。精密进样10μl，按2.1色谱条件测定，山东金银花、大荆山银花木犀草苷含量结果见表3。表3 样品的含量测定（略）

　　实验结果表明，大荆山银花含绿原酸2.390%，木樨草苷1.030%；山东金银花含绿原酸3.228%，木樨草苷1.030%。虽然，大荆山银花绿原酸的含量稍低于山东金银花，但符合药典规定，且价格低廉，资源丰富，采集方便，采摘期较长，在流感爆发时期，对于缓解药材紧张，有一定的意义。

参考文献