丹红注射液对大鼠心肌缺血损伤的保护作用

【摘要】 目的 探讨丹红注射液对大鼠心肌缺血损伤的保护作用。方法 采用结扎冠状动脉制备大鼠心肌缺血损伤模型，将动物随机分为假手术组、模型组、丹参注射液阳性对照组(10 g/kg)、丹红注射液各剂量组(10、20、30 g/kg)。除假手术组和模型组给予同体积生理盐水外，各组动物在术后12，23 h分别尾静脉注射给药1 次。术后24 h，测定心肌梗死范围，检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD) 、丙二醛(MDA)水平及心肌组织MDA、SOD含量，并记录心电图ST段。结果 丹红注射液(20，30 g/kg)剂量组能明显减少心肌缺血损伤大鼠心肌梗死面积，分别为(23.26±5.95)%、(20.54±9.78)%，而模型组为(36.79±8.01)%;模型组心电图出现ST段明显抬高(0.48±0.05) mV，而丹红注射液各剂量组能明显降低ST段抬高(0.29±0.04)，(0.22±0.04)，(0.17±0.03) mV (均P&<0.01)。另外，丹红注射液能降低血清CK、LDH、AST活性、血清及心肌组织MDA含量，增加血清及心肌组织SOD活性。结论 丹红注射液对大鼠心肌缺血损伤具有保护作用，其机制可能与抗氧化作用有关。

【关键词】 丹红注射液;心肌缺血;抗氧化

　已有研究证明，丹红注射液对大鼠移植肾缺血再灌注损伤有保护作用〔1，2〕，然而对丹红注射液心肌损伤保护作用尚无详细研究。本实验从抗氧化角度出发，探讨丹红注射液抗大鼠心肌缺血氧化损伤的作用机制。

　　1 料与方法

　　1.1 实验材料

　　1.1.1 动物 Wistar大鼠，清洁级，雄性，体重250～280 g，由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK20020001。

　　1.1.2 药品与试剂 丹红注射液(国药准字Z20026866，济南步长制药有限公司)，每支10 ml，含生药10 g(丹参75%，红花25%)，批号：070970，为红棕色的澄明液体。丹参注射液(上海中西制药有限公司)含生药1.5 g/ml，批号：0706030。乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所，批号分别为：070508，070206，070303，20070902，20070514。红四氮唑(Tetrazolium chloride，TTC)购自中国医药集团上海化学试剂公司，批号20070903。其他化学试剂均为国产分析纯。

　　1.1.3 主要仪器 UV2000型紫外可见分光光度计(上海尤尼克公司)。HX200型动物呼吸机(成都泰盟科技有限公司)，ECG651型心电图机(上海光电医用电子仪器有限公司)，TGL16G型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，DKZ2BO型恒温水浴振荡器(上海一恒科技有限公司)，DHG9053A型鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 大鼠心肌缺血模型的制备 结扎冠状动脉前降支，当出现TST幅度增高(&>0.2 mV)，即缺血模型成功。假手术组只穿线不结扎冠脉。

　　1.2.2 分组与给药 术后第12小时，选取手术成功动物60只，将大鼠随机分为假手术组;模型组;丹参注射液阳性对照组(含生药10 g/kg);丹红注射液低、中、高剂量组(含生药10，20，30 g/kg)，每组10只。各组动物在术后12、23 h 分别尾静脉注射给药1 次，假手术组和模型组给予同体积生理盐水。

　　1.2.3 心电图ST段记录〔3〕 分别于冠脉结扎后13、24 h记录心电图。观察Ⅱ导联T波、ST段的变化。

　　1.2.4 心肌梗死面积测定〔4〕 待结扎冠脉24 h后，取心脏，-20℃冰冻10 min，在结扎线下平行于冠状沟将左心室横切5片，在1%TTC溶液37 ℃染色6 min，染色后吸干水分，测量梗死区面积占心室面积的百分比。

　　1.2.5 血清及心肌组织的生化指标测定 待结扎冠脉24 h后，腹主动脉取血，分离血清，按试剂盒要求操作测CK，LDH，AST，MDA，SOD;取心肌组织，用0.025 mol/L蔗糖溶液(含1 mmol/L EDTA)制成匀浆，离心 (12 000 r/min)30 min，取上清液，按试剂盒要求检测MDA、SOD。

　　1.3 统计学分析 采用SPSS11.0软件，数据用x±s表示，各组间均数比较采用单因素方差分析(oneway ANOVA test)，组间比较采用双侧t检验。对各组数据进行正态分布和齐性检验〔5〕，均符合要求。

　　2 结 果

　　2.1 对大鼠心肌梗死面积的影响 大鼠冠脉前降支结扎24 h后，模型组动物心脏出现明显的梗死区，心肌缺血区面积与心脏面积比为(36.79±8.01)%，而丹红注射液低、中、高剂量组(10，20，30 g/kg)分别为(26.73±6.21)%，(23.26±5.95)%，(20.54±9.78)%(P&>0.05，P&<0.05，P&<0.05)。与模型组比较，丹红注射液中、高剂量组(20，30 g/kg)降低梗死面积有明显差异。丹参注射液阳性对照组(10 g/kg)有明显降低死面积的作用(18.12±3.34)%(P&<0.05)。

　　2.2 对心肌缺血大鼠心电图 ST段的影响 与假手术组(0.13±0.03) mV比较，模型组在结扎24 h后心电图出现ST段明显抬高(0.48±0.05) mV(P&<0.01)。而丹红注射液低、中、高剂量组(10，20，30 g/kg)及丹参注射液阳性对照组(10 g/kg)能明显降低ST段抬高(0.29±0.04)、(0.22±0.04)、(0.17±0.03)、(0.16±0.02) mV，与模型组比较具有显著差异(均P&<0.01)。

　　2.3 对心肌缺血大鼠血清LDH、AST、CK、SOD、MDA的影响 见表1。与假手术组比较，大鼠心肌缺血模型组可见血清CK，LDH，AST，MDA均明显增加(P&<0.05)，而血清SOD活性明显下降(P&<0.05)。丹红注射液低、中、高剂量组及丹参注射液阳性对照组(10 g/kg)均可提高心肌缺血大鼠血清SOD活性、降低MDA水平，抑制血清LDH，AST，CK的增加，与模型组比较有统计学差异(P&<0.05～&<0.001)。

　　2.4 对心肌缺血大鼠心肌组织SOD、 MDA的影响 见表2。与假手术组比较，大鼠心肌缺血模型组可见心肌MDA含量明显增加，SOD活性明显下降。丹红注射液各剂量组及丹参注射液组均可明显提高心肌缺血大鼠心肌SOD活性、降低MDA含量，与模型组比较有显著差异(P&<0.01～&<0.001)。表1 丹红注射液对心肌缺血大鼠血清LDH、AST、CK、SOD、 MDA的影响表2 丹红注射液对心肌缺血大鼠心肌组织MDA的影响

　　3 讨 论

　　长期心肌缺血会导致心肌梗死、心肌细胞死亡〔6〕，心肌缺血时，心肌酶CK，LDH，AST被认为是心肌细胞受损程度的重要标志酶。本实验证明，丹红注射液各剂量组可明显抑制心肌缺血大鼠血清LDH，AST，CK的增加，同时能改善心电图损伤变化，抑制ST段的抬高，缩小心肌梗死面积，提示丹红注射液对心肌缺血心肌损伤具有保护作用。

　　氧自由基形成过多是心肌缺血发生的主要机制之一〔6〕。MDA含量变化可间接反映细胞受自由基损伤的程度。SOD可清除超氧阴离子，保护机体免受氧自由基损伤，其活性高低可间接反映机体清除氧自由基的能力〔5〕。本实验证明，丹红注射液各剂量组能明显抑制心肌缺血损伤大鼠血清、心肌组织MDA含量的升高，提高SOD 活性，提示丹红注射液可能通过提高内源性抗氧化酶SOD活性，清除自由基引起的脂质过氧化反应，减轻自由基对心肌细胞的损伤，起到保护心肌损伤的作用。

　　目前的实验和临床研究均表明，应用心肌保护剂能明显降低人、动物的心肌梗死范围，减轻心肌损伤程度〔7〕。最近有人研究，利用结扎SD大鼠冠状动脉左前降支40 min后，再灌注120 min，建立心肌缺血再灌注损伤模型。静脉注射给药丹参红花提取物有效成分。结果表明，与模型组比较，丹参红花提取物有效成分——丹参酚酸B和羟基红花黄色素A(丹酚酸B含量10.44 mg/g、羟基红花黄色素A含量22.1 mg/g)小剂量(1.94生药g/kg)组、中剂量(3.89生药g/kg)组和大剂量(5.83生药g/kg)组，均可使大鼠血清CKMB的含量显著降低(P&<0.01);丹红中、大剂量组还可抑制心肌缺血/再灌注损伤后大鼠血小板聚集率。 提示丹参红花有效成分配伍中、大剂量组对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用〔8〕。

　　综上所述，丹红注射液对缺血心肌损伤具有保护作用，其机制可能与抗氧化作用有关。

参考文献

　1 夏 康，吴小候，李家兵.丹红注射液对大鼠移植肾缺血再灌注损伤的保护作用〔J〕.中药新药与临床药理，2009;17(2):610.

　　2 Stanton LW，Garrard LJ，Damm D，et al.Altered patterns of gene expression in response to myocardial infarction〔J〕.Circ Res，2000;86(9)：93945.

　　3 Bian GX，Li GG，Yang Y，et al.Madecassoside reduces ischemiareperfusion injury on regional ischemia induced heart infarction in rat〔J〕.Biol Pharmacol Bull，2008;31(3):45865.

　　4 Hangaishi M，Nakajima H，Taguchi J，et al.Lecithinized Cu，Znsuperoxide dismutase limits the infarct size following ischemiareperfusion injury in rat hearts in vivo〔J〕.Biochem Biophy Res Commun，2001;285(5)：12208.

　　5 徐淑云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学〔M〕.第3版.北京：人民卫生出版社，2002：210.

　　6 Valko M，Leibfritz D，Moncola J，et al.Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease〔J〕.Int J Biochem Cell Biol，2007;39(1):4452.

　　7 Wang QD，Pernow J，Sjoquist PO，et al.Pharmacological possibilities for protection against myocardial reperfusion injury〔J〕.Cardiovas Res，2002;55(1):2533.

　　8 张 蕾，刘剑刚，史大卓，等.丹参红花有效部位配伍对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用〔J〕.中国实验方剂学杂志，2009;15(6):569.