石榴多酚对小鼠急性肝损伤的保护作用

　　　　作者：杨丽娜 林茜 付中喜 杨婷婷

【摘要】 目的 观察石榴多酚对小鼠肝损伤的防护作用。方法 用四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型，观察石榴多酚(200、400、600 mg/kg)对小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性和肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果 石榴多酚能明显降低急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平; 并可使肝脏中MDA含量降低，SOD活性升高。各实验组小鼠的肝体比值均低于肝损伤模型组。结论 石榴多酚对肝损伤具有保护作用，其作用可能与抗氧化有关。

【关键词】 石榴多酚;肝损伤;四氯化碳;脂质过氧化

　植物化学物石榴多酚是一类具有多酚羟基化合物的总称，具有抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗菌、润肤美容、降血压和预防心脑血管疾病〔1～3〕等多种生理和药理活性，但目前国内外对其肝损伤保护作用研究较少。本研究采用CCl4制备小鼠急性肝损伤模型，探讨石榴多酚对肝损伤的保护作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物 雄性昆明小鼠40只，体重(20±2)g，中南大学湘雅医学院实验动物学部供应。随机分为正常组、模型组和低、中、高三个剂量的石榴多酚组，每组8只。

　　1.2 试剂、仪器与药品 CCl4(分析纯)购自北京化学试剂公司;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。722型分光光度计(上海);HHS214型恒温水浴箱(北京)。石榴多酚(含多酚40%)购自长沙市惠瑞生物科技有限公司。

　　1.3 模型制备及给药方法 低、中、高剂量组每日分别给予200、400、600 mg/kg石榴多酚灌胃。于实验第7天给药后1 h，模型组和各石榴多酚组按10 ml/kg体重一次性腹腔注射0.2% CCl4，正常组给予等量橄榄油。16 h后处死动物，取血分离血清，检测AST、ALT取肝脏称重后用冷生理盐水在匀浆器中研磨制备1∶10肝匀浆，测定SOD及MDA。

　　1.4 观察指标 血清ALT、AST采用ELISA法。肝脏MDA含量用TBA比色法测定，SOD活性采用比色法测定。

　　1.5 统计学分析 采用SPSS16.0统计学软件进行数据分析，多样本的均数比较采用单因素方差分析，组间比较用q检验。

　　2 结 果

　　2.1 石榴多酚对小鼠肝脏指数的影响 与正常组小鼠肝脏指数〔(4.68±0.41) g/100 g〕比较，CCl4模型组〔(15.21±0.45) g/100 g〕明显增加(P&<0.05);与模型组比较，低、中、高剂量石榴多酚组〔(4.57±0.44)、(4.36±0.54)、(4.65±0.41) g/100 g〕均降低(P&<0.05)。

　　2.2 石榴多酚对血清ALT、AST水平的影响 与正常组相比，CCl4模型组小鼠血清ALT、AST水平明显升高(P&<0.01)，说明造模成功。石榴多酚低、中、高剂量组小鼠血清ALT水平均显著低于CCl4损伤模型组(P&<0.01);石榴多酚中、高剂量组小鼠血清AST水平均显著低于CCl4损伤模型组(P&<0.01)。见表1。表1 各组血清中ALT、AST水平

　　2.3 石榴多酚对肝脏SOD、MDA的影响 与正常组相比，模型组小鼠肝脏SOD活性明显降低(P&<0.01)，MDA含量明显升高(P&<0.01);石榴多酚低、中、高剂量组小鼠肝脏SOD活性均显著高于模型组(P&<0.01)，MDA含量显著低于模型组(P&<0.01)。见表2。表2 各组肝脏SOD、MDA水平

　　3 讨 论

　　肝损伤是多种致病因素造成的肝脏病理过程的一部分，是肝纤维化和肝硬化的起始动因。目前尚无更多的特效药可以明显地减轻肝脏的损伤和促进肝细胞的再生，因此肝损伤的防治一直是全球研究的热点。我国卫生部颁布的《中药药理肝损实验指导原则》中明确指定应用CCl4肝损伤动物模型进行保肝降酶新药的药理实验。CCl4在体内经过肝微粒体细胞色素P450酶激活后，通过肝细胞微粒体依赖NADPH的电子传递系统代谢为两个活跃的自由基Cl·和CClO·，再产生一系列的氧化性物质，包括三氯甲基自由基(CCl3·)，CCl3·继而与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，启动脂质过氧化反应，引起肝细胞膜结构和功能的损伤，致使酶渗漏以及各种类型的细胞病变，甚至坏死〔4〕。转氨酶是肝脏代谢中的主要酶类，ALT和AST在肝细胞内大量储存，当肝细胞受到损害时，大部分的ALT和AST被释放入血液造成转氨酶活性增高，因此检验血清ALT和AST水平是检验肝细胞损伤程度的灵敏而特异性指标。

　　肝细胞膜的脂质过氧化是CCl4介导的肝细胞损伤的主要机制，目前认为脂质过氧化损伤与自由基生成增多或清除减少的有关。MDA是脂质过氧化反应的终产物之一，因而测试MDA的含量常常可反映机体内脂质过氧化的情况，间接地反映出细胞损伤的程度。SOD是体内非常重要的抗氧化酶和氧自由基清除剂，对机体的氧化与抗氧化平衡起重要作用，它能抑制黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，减少自由基的产生，减轻肝细胞的损伤，同时SOD因其消耗而减少。据报道，各型肝病患者SOD的活性均明显降低，且与肝脏病理损伤的严重程度呈正相关〔5〕。因此SOD及MDA可反映出肝细胞损伤的程度和药物对肝细胞损伤的拮抗作用。本研究显示石榴多酚能显著降低CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT，AST水平，降低肝脏MDA含量，提高肝脏SOD活性，提示石榴多酚对肝损伤的防护作用可能与抑制自由基产生，减少脂质过氧化有关。

参考文献

　　1 Sumner MD，ElliottEller M，Weidne G，et al.Effects of pomegranate juice consumption on myocardial perfusion in patients with coronary heart disease〔J〕.Am J Cardiol，2005;96:8104.

　　2 Seeram NP，Adams LS，Henning SM，et al.In vitro antiproliferative，apoptotic and antioxidant activities of punicalagin，ellagic acid and a total pomegranate tannin extract are enhanced in combination with other polyphenols as found in pomegranate juice〔J〕.J Nutr Biochem，2005;16(6):3607.

　　3 李云峰，郭长江，杨继军.石榴皮提取物对高脂血症小鼠抗氧化功能和脂质代谢的影响〔J〕.营养学报，2005;27(6):4836.

　　4 Choi I，Kang HS，Yang Y，et al.IL6 induces hepatic inflammation and collagen synthesis in vivo〔J〕.Clin Exp Immunol，1994;95(3):5305.

　　5 李仪奎.中药药理实验方法学〔M〕.上海:上海科学技术出版社，1999:158463.