哮喘灵雾化吸入对哮喘大鼠IFNγ、 IL4及IgE水平的影响

　　　　作者：王清峰， 殷银霞， 郑天珍， 吴玉泓， 赵彬元， 周智辉

【摘要】 　　目的: 探讨哮喘灵雾化吸入对哮喘鼠血清中IFNγ、 IL4 和IgE水平的影响及其可能机制。方法: 建立Wistar大鼠哮喘模型， 哮喘灵（27.84 g/kg、 13.92 g/kg）雾化吸入治疗7 d， 用放射免疫法测定血清中IFNγ、 IL4及IgE的含量。结果: 与模型组比较， 哮喘灵治疗组大鼠血清IFNγ水平升高（P&<0.05）、 IL4和IgE水平下降（P&<0.01）， 且药物治疗组大鼠的哮喘症状得到缓解， 引喘潜伏期明显延长。结论: 哮喘灵可通过调节哮喘鼠IFNγ、 IL4和IgE的水平而起到治疗哮喘的作用。

【关键词】 哮喘灵 雾化吸入 哮喘 IFN γ I 4 IgE

　　支气管哮喘是以嗜酸性粒细胞、 淋巴细胞等浸润为主的气道慢性变态反应性炎症， 由于T淋巴细胞调控着其他炎性细胞的功能，　　因此T淋巴细胞的活化对哮喘的发生、 发展起关键作用[1， 2]。中药气雾剂在治疗呼吸系统疾病方面具有明显优势和广泛前景[3]。我们观察哮喘灵经超声雾化吸入对哮喘鼠的治疗作用及血清中IFNγ、 IL4及IgE水平的影响; 进一步为哮喘灵气雾剂的开发和应用提供理论基础。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料 健康SPF级Wistar大鼠40只(雌雄各半， 体质量180～220 g)， 由甘肃中医学院动物实验中心SPF实验室提供， 合格证号SCXK(甘)2004-0006。均以标准饲料喂养， 自由饮水。哮喘灵药液由桂枝、 白芍、 杏仁 、 厚朴、 甘草、 大枣、 生姜、 葶苈子等组成， 由甘肃中医学院科研实验中心采用水提醇沉法制备而成（1 L成药含生药4040 g）。蛤蚧定喘胶囊， 三金生物药业有限责任公司产品（批号060203）。卵蛋白(OVA)、 IFNγ放免试剂盒， 为上海升正生物技术有限公司产品; IL4、 IgE放免试剂盒， 为北京生物博大泰克生物技术有限公司产品; S888E型超声雾化仪由中外合资南京道芬电子有限公司产品; FJ2021型γ放射免疫计数器由西安二六二厂生产。

　　1.2 方法

　　1.2.1 分组、 造模与给药 将40只Wistar大鼠随机分为5组: 空白对照组、 模型组、 哮喘灵大、 小剂量组及阳性对照组(蛤蚧定喘胶囊)。除空白对照组外其余4组均采用Ikeda 等法[4]造模， 并作改进: 每只大鼠自第1天起腹腔注射由（OVA 10 mg加氢氧化铝干粉100 mg与灭活百日咳菌苗5×109个）配制成的混悬液1 mL进行致敏， 于第8天重复1次以加强致敏。第15天将致敏的大鼠置于15 L密闭玻璃容器内， 给予10 g/L OVA生理盐水超声雾化吸入加以激发， 每天1次， 每次30 min， 待出现张口呼吸， 节律不整， 腹式呼吸明显， 呼吸频率加快且不齐， 喷嚏或呛咳， 口鼻、 四肢及尾尖轻度紫绀， 粪便增多， 反应迟钝， 活动明显减少等症状时为引喘成功。其中各给药组于每天激发前12 h分别超声雾化吸入哮喘灵药液(13.92 g/kg、 27.84 g/kg)及蛤蚧定喘胶囊(0.6 g/kg， 用0.03 L生理盐水加以稀释）; 空白对照组以等量生理盐水进行腹腔注射和雾化， 方法同上。

　　1.2.2 观察项目 治疗过程中观察各组哮喘大鼠饮食、 体质量， 毛色等哮喘症状的变化， 且统计各组大鼠引喘潜伏期的变化情况。

　　1.2.3 检测指标 实验第22天， 各组大鼠末次激发2 h后， 以30 g/L的戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔注射麻醉各组大鼠于股动脉采血， 并分离血清。严格按照试剂盒说明采用放射免疫法测定哮喘大鼠血清中IFNγ、 IL4及IgE的含量， 并计算IFNγ/IL4的比值。

　　1.2.4 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件进行组间单因素方差分析， P&<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 各组大鼠症状及引喘潜伏期变化结果 各组大鼠激发前一般状态良好。空白组大鼠激发前后无明显变化; 模型组哮喘各症状进一步加重; 哮喘灵大小剂量组及阳性对照组与模型组比较， 哮喘症状明显减轻， 引喘潜伏期均明显延长， 差异有统计学意义（P&<0.01， 表1）。

　　表1 哮喘灵气雾剂对各组大鼠引喘潜伏期的影响（略）

　　bP&<0.01 vs 模型组.

　　2.2 哮喘灵对哮喘大鼠血清中IFNγ、 IL4及IgE水平的影响 模型组较空白组IFNγ降低， IL4、 IgE升高; 哮喘灵大剂量组较模型组IL4、 IgE降低， 大小剂量组IFNγ/IL4均降低， 差异有统计学意义（P&<0.05， P&<0.01， 表2）。

　　表2 哮喘灵对各组大鼠血清中IFNγ和IL4水平的影响（略）

　　aP&<0.05， bP&<0.01 vs 空白组; dP&<0.01 vs 模型组.

　　3 讨论
　　
　　Th通过所分泌的细胞因子相互调节， 以维持Th机体免疫功能的平衡[2]。IgE介导的I型变态反应是哮喘发病的主要机制[1]。IFNγ和IL4分别为Th1、 Th3主要细胞因子， IL4对IgE合成有正调节作用， IFNγ则起负调节作用。IL4可抑制IFNγ的产生并增加嗜酸性粒细胞的数量进而促进气道炎症的发生， IFNγ可下调IL4受体基因的表达[5] 。IFNγ和IL4的不平衡是哮喘的一个主要特征， 也是哮喘发病的重要机制之一， 调节Th1/Th3细胞的平衡是哮喘治疗的重要靶点[6]。哮喘灵药液是由《伤寒论》中“桂枝加厚朴汤”化裁而来， 并利用现代制剂工艺制备而成， 全方共凑降气化痰、 定喘止咳、 调理脾肺、 标本同治之功。现代药理学研究表明[7]， 桂枝主要成分桂皮醛能抑制IgE所致肥大细胞脱颗粒， 减少过敏介质释放等作用; 甘草中甘草酸有中枢性止咳、 祛痰及糖皮质激素样作用， 且可诱导IFNγ及NK细胞的活化; 厚朴具有广谱抗菌及兴奋支气管平滑肌等作用; 杏仁有较强的镇咳平喘作用; 葶苈子具有强心和平喘的作用。方中桂枝、 甘草、 大枣、 生姜均有免疫调节作用。
　　
　　本实验结果显示， 模型组与空白组比较大鼠出现呼吸节律不齐， 呛咳， 口鼻、 四肢及尾尖过敏等哮喘样症状; 血清中IgE， IL4的含量明显升高， IFNγ降低与文献[8]报道相似， 提示哮喘模型复制成功。蛤蚧定喘胶囊组指标变化不明显， 可能与该药物溶解不充分有关。哮喘灵大小剂量组较模型组呼吸节律整齐， 哮喘各症状明显减轻， 引喘潜伏期延长; 大剂量组血清IL4、 IgE及IFNγ/IL4均降低， 而IFNγ升高不明显; 小剂量组IFNγ升高， IL4、 IFNγ/IL4均降低， 但IgE下调不明显， 可能与哮喘灵对不同T细胞亚群的调节有关: 一方面药物可能通过阻断或抑制Th3细胞的活化而减少IL4的分泌， 另一方面可能通过激活Th1细胞， 促进IFNγ的分泌而下调IL4水平， 调节Th1/Th3失衡状态和降低哮喘大鼠血清IgE的水平。小剂量哮喘灵对Th3细胞的抑制较弱从而促进Th1细胞活化， 促进IFNγ升高间接调节IgE水平， 随着哮喘灵剂量的加大（27.84 g/kg）， 显示出较强的抑制Th3细胞活性， 导致IL4降低直接下调IgE的水平， 从而抑制气道的炎症反应和高反应性达到治疗哮喘的作用， 加之， 采用超声雾化吸入方式给药具有易达病所、 吸收快、 分布均匀， 避免肝脏的首过效应等优点故效果显著。有关哮喘灵的具体作用机制仍有待进一步研究。

参考文献

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