【摘要】 目的 建立枳术丸中辛弗林含量测定的方法。方法 采用高效液相色谱法，Diamonsil ODS1 C18色谱柱，以甲醇-磷酸二氢钾水溶液(取磷酸二氢钾0.6 g、十二烷基磺酸钠1.0 g、冰醋酸1 mL，加水溶解并稀释至1 000 mL， 50∶50)为流动相，流速为1.0 mL/min，λ＝275 nm。结果 辛弗林在0.065 6～0.656 μg范围内呈良好线性，回归方程为：Y＝478 526.3X＋827.146，r＝0.999 8，平均加样回收率为99%，RSD＝0.99%(n＝6)。结论 本方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为枳术丸中辛弗林的定量分析提供了有效方法。
【关键词】 枳术丸；辛弗林；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish the method for detemining the content of synephrine in Zhizhu Wan by HPLC. Methods Diamonsil ODS1 C18 column was used with methanol-potassium dihydrogen phosphate (per 1 000 mL contains 0.6 g potassium dihydrogen phosphote， 1.0 g SDS and 1 mL acetic acid， 50∶50) as the mobile phase， detection wavelength as 275 nm and flow rate of 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.065 6～0.656 μg for synephrine and linear equation was Y＝478 526.3X＋827.146， r＝0.999 8. The average recovery was 99% and the related standard deviation (RSD) was 0.99% (n＝6). Conclusion The method was simple， accurate and proper， and the reduplication of the result was good. It provides scientific quantitative analysis method of synephrine in Zhizhu Wan.
Key words：Zhizhu Wan；synephrine；HPLC；content determination
枳术丸收载于2010年版《中华人民共和国药典》(一部)中，功能健脾消食、行气化湿，用于脾胃虚弱，食少不化，脘腹痞满，处方由枳实(炒)、麸炒白术组成[1]。原标准中只有简单的显微鉴别项，而对处方中的主药枳实没有含量测定，不能全面控制药品的质量。为了更好地控制枳术丸的质量，本试验采用高效液相色谱(HPLC)法对枳实的主要成分辛弗林进行了含量测定，并进行了方法学研究。现报道如下。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：SPD-10A日本岛津；紫外分光光度仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H上海科导超声仪器有限公司。
辛弗林对照品(批号110727-200306，供含量测定用)，中国药品生物制品检定所提供；枳术丸(批号20100201、20100202、20100203)，河南百年康鑫药业有限公司提供；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸二氢钾水溶液(取磷酸二氢钾0.6 g、十二烷基磺酸钠1.0 g、冰醋酸1 mL，加水溶解并稀释至1 000 mL，50∶50)为流动相；检测波长为275 nm。理论板数按辛弗林峰计算应不低于2 000[1-2]。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取辛弗林对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，摇匀，通过聚酰胺柱(60～90目，2.5 g，内径1.5 cm，干法装柱)，用水25 mL洗脱。收集洗脱液，转移至25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 阴性样品的测试 取缺枳实的样品，按供试品制备法制备阴性样品后测定，在辛弗林相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。见图1。
A B
C
注：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品
图1 枳术丸HPLC图谱
2.3 线性关系的考察
分别精密吸取同一对照品溶液(32.8 μg /mL)2、4、8、10、20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以辛弗林对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y＝478 526.3X＋827.146，r＝0.999 8。结果表明，辛弗林对照品在0.065 6～0.656 μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
取同一对照品溶液，重复进样6次，每次进样5 μL，测定辛弗林峰面积，结果RSD＝1.14%，表明本法精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批号(批号20100201)供试品，按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，测定每份样品中辛弗林的含量，结果RSD＝0.48%(n＝6)，表明重复性良好。
2.6 稳定性试验
取同一批号(批号20100201)的供试品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h测定峰面积， 结果RSD＝1.92%(n＝5)。表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
采用加样回收法。称取已知含量的同一批号样品(批号20100201，含量为0.51 mg/g)1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共6份。分别精密加入辛弗林对照品溶液(0.032 8 mg/mL)各25 mL，蒸干，按供试品溶液制备方法制备，并照上述色谱条件测定，分别进样10 μL，测定辛弗林峰面积并计算辛弗林含量，结果平均回收率为99%，RSD＝0.99%(n＝6)。见表1。
表1 加样回收率试验结果
样品取样
量(g) 样品中辛弗
林量(mg) 加入辛弗林
量(mg) 测得总量
(mg) 回收率
(%) 平均回收
率(%) RSD
(%)
1.523 4 0.776 9 0.82 1.598 5 100.2
1.542 6 0.786 7 0.82 1.596 0 98.7
1.582 1 0.806 9 0.82 1.606 4 97.5 99 0.99
1.504 2 0.767 1 0.82 1.583 8 99.6
1.517 4 0.773 9 0.82 1.580 0 98.3
1.569 3 0.800 3 0.82 1.616 2 99.5
2.8 样品测定
按照供试品溶液制备方法对3批中试产品进行测定，结果见表2。
表2 辛弗林含量测定结果
批号 辛弗林含量(mg/g)
20100201 0.51
20100202 0.62
20100203 0.56
3 讨论
根据3批样品测定结果，每1 g含枳实以辛弗林(C9H13NO2)计均不少于0.5 mg，考虑到药材因产地、加工、运输、贮藏等因素的影响，药材中辛弗林也会有较大的差别，故暂规定：本品每1 g含枳实以辛弗林(C9H13NO2)计，不得少于0.45 mg。
取辛弗林对照品溶液，在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在275 nm波长处有最大吸收，故采用275 nm作为检测波长。
参考2010年版《中华人民共和国药典》(一部)收载的枳实原药材含量测定项下的供试品制备方法，分别考察了超声提取与加热回流提取方法，结果超声提取3 h以上才能基本提取完全；对加热回流提取时间分别考察了1、1.5、2 h，结果加热回流提取1.5 h基本提取完全，故采用加热回流提取。
本方法具有操作简便、结果准确、灵敏度高等特点，可以作为本品质量的控制方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：876，230－231.
[2] 许妍，付辉政.RP-HPLC法测定枳实中辛弗林的含量[J].药品评价，2005， 2(6)：436－437.
【摘要】 目的 建立枳术丸中辛弗林含量测定的方法。方法 采用高效液相色谱法，Diamonsil ODS1 C18色谱柱，以甲醇-磷酸二氢钾水溶液(取磷酸二氢钾0.6 g、十二烷基磺酸钠1.0 g、冰醋酸1 mL，加水溶解并稀释至1 000 mL， 50∶50)为流动相，流速为1.0 mL/min，λ＝275 nm。结果 辛弗林在0.065 6～0.656 μg范围内呈良好线性，回归方程为：Y＝478 526.3X＋827.146，r＝0.999 8，平均加样回收率为99%，RSD＝0.99%(n＝6)。结论 本方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为枳术丸中辛弗林的定量分析提供了有效方法。
【关键词】 枳术丸；辛弗林；高效液相色谱法；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2011.02.025
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2011)02-0061-02
Determination of Synephrine in Zhizhu Wan by HPLC CAI Jun-an (Henan Bainian Kangxin Pharmaceutical Co. Ltd， Dancheng 477150， China)
Abstract：Objective To establish the method for detemining the content of synephrine in Zhizhu Wan by HPLC. Methods Diamonsil ODS1 C18 column was used with methanol-potassium dihydrogen phosphate (per 1 000 mL contains 0.6 g potassium dihydrogen phosphote， 1.0 g SDS and 1 mL acetic acid， 50∶50) as the mobile phase， detection wavelength as 275 nm and flow rate of 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.065 6～0.656 μg for synephrine and linear equation was Y＝478 526.3X＋827.146， r＝0.999 8. The average recovery was 99% and the related standard deviation (RSD) was 0.99% (n＝6). Conclusion The method was simple， accurate and proper， and the reduplication of the result was good. It provides scientific quantitative analysis method of synephrine in Zhizhu Wan.
Key words：Zhizhu Wan；synephrine；HPLC；content determination
枳术丸收载于2010年版《中华人民共和国药典》(一部)中，功能健脾消食、行气化湿，用于脾胃虚弱，食少不化，脘腹痞满，处方由枳实(炒)、麸炒白术组成[1]。原标准中只有简单的显微鉴别项，而对处方中的主药枳实没有含量测定，不能全面控制药品的质量。为了更好地控制枳术丸的质量，本试验采用高效液相色谱(HPLC)法对枳实的主要成分辛弗林进行了含量测定，并进行了方法学研究。现报道如下。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：SPD-10A日本岛津；紫外分光光度仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H上海科导超声仪器有限公司。
辛弗林对照品(批号110727-200306，供含量测定用)，中国药品生物制品检定所提供；枳术丸(批号20100201、20100202、20100203)，河南百年康鑫药业有限公司提供；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸二氢钾水溶液(取磷酸二氢钾0.6 g、十二烷基磺酸钠1.0 g、冰醋酸1 mL，加水溶解并稀释至1 000 mL，50∶50)为流动相；检测波长为275 nm。理论板数按辛弗林峰计算应不低于2 000[1-2]。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取辛弗林对照品适量，精密称定，加水制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细，取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，摇匀，通过聚酰胺柱(60～90目，2.5 g，内径1.5 cm，干法装柱)，用水25 mL洗脱。收集洗脱液，转移至25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 阴性样品的测试 取缺枳实的样品，按供试品制备法制备阴性样品后测定，在辛弗林相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。见图1。
A B
C
注：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品
图1 枳术丸HPLC图谱
2.3 线性关系的考察
分别精密吸取同一对照品溶液(32.8 μg /mL)2、4、8、10、20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以辛弗林对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y＝478 526.3X＋827.146，r＝0.999 8。结果表明，辛弗林对照品在0.065 6～0.656 μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
取同一对照品溶液，重复进样6次，每次进样5 μL，测定辛弗林峰面积，结果RSD＝1.14%，表明本法精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批号(批号20100201)供试品，按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，测定每份样品中辛弗林的含量，结果RSD＝0.48%(n＝6)，表明重复性良好。
2.6 稳定性试验
取同一批号(批号20100201)的供试品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h测定峰面积， 结果RSD＝1.92%(n＝5)。表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
采用加样回收法。称取已知含量的同一批号样品(批号20100201，含量为0.51 mg/g)1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共6份。分别精密加入辛弗林对照品溶液(0.032 8 mg/mL)各25 mL，蒸干，按供试品溶液制备方法制备，并照上述色谱条件测定，分别进样10 μL，测定辛弗林峰面积并计算辛弗林含量，结果平均回收率为99%，RSD＝0.99%(n＝6)。见表1。
表1 加样回收率试验结果
样品取样
量(g) 样品中辛弗
林量(mg) 加入辛弗林
量(mg) 测得总量
(mg) 回收率
(%) 平均回收
率(%) RSD
(%)
1.523 4 0.776 9 0.82 1.598 5 100.2
1.542 6 0.786 7 0.82 1.596 0 98.7
1.582 1 0.806 9 0.82 1.606 4 97.5 99 0.99
1.504 2 0.767 1 0.82 1.583 8 99.6
1.517 4 0.773 9 0.82 1.580 0 98.3
1.569 3 0.800 3 0.82 1.616 2 99.5
2.8 样品测定
按照供试品溶液制备方法对3批中试产品进行测定，结果见表2。
表2 辛弗林含量测定结果
批号 辛弗林含量(mg/g)
20100201 0.51
20100202 0.62
20100203 0.56
3 讨论
根据3批样品测定结果，每1 g含枳实以辛弗林(C9H13NO2)计均不少于0.5 mg，考虑到药材因产地、加工、运输、贮藏等因素的影响，药材中辛弗林也会有较大的差别，故暂规定：本品每1 g含枳实以辛弗林(C9H13NO2)计，不得少于0.45 mg。
取辛弗林对照品溶液，在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在275 nm波长处有最大吸收，故采用275 nm作为检测波长。
参考2010年版《中华人民共和国药典》(一部)收载的枳实原药材含量测定项下的供试品制备方法，分别考察了超声提取与加热回流提取方法，结果超声提取3 h以上才能基本提取完全；对加热回流提取时间分别考察了1、1.5、2 h，结果加热回流提取1.5 h基本提取完全，故采用加热回流提取。
本方法具有操作简便、结果准确、灵敏度高等特点，可以作为本品质量的控制方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：876，230－231.
[2] 许妍，付辉政.RP-HPLC法测定枳实中辛弗林的含量[J].药品评价，2005， 2(6)：436－437.