【摘要】 目的 利用DAD检测器可同时在线检测多个吸收波长的优势，建立一种可同时测定大川芎复方释药系统中阿魏酸与天麻素含量的反相高效液相色谱法。方法 采用ODS-2 Hypersil色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-1%冰醋酸为流动相，梯度洗脱，流速1 mL/min，柱温25 ℃，天麻素检测波长270 nm，阿魏酸检测波长322 nm。结果 天麻素与阿魏酸在40 min内均能与其他组分实现良好分离，天麻素在0.092～1.840 μg范围内呈现良好的线性关系，r＝1.000 0；阿魏酸在0.122～2.440 μg范围内呈现良好的线性关系，r＝1.000 0。天麻素加样回收率为99.50%， RSD＝1.23%(n＝5)；阿魏酸加样回收率为101.5%，RSD＝1.52%(n＝5)。结论 所建立的方法简单、准确可靠，能同时测定大川芎复方释药系统中阿魏酸及天麻素两种有效成分的含量。
【关键词】 大川芎复方释药系统；天麻素；阿魏酸；高效液相色谱法/二极管阵列检测器；含量测定
Abstract：Objective To set up a RP-HPLC method for determining gastrodin and ferulic acid in drug delivery system of Dachuanxiong simultaneously. Methods ODS-2 Hypersil column was used with methanol-1% glacial acetic acid as solution gradient elution. The flow rate was 1 mL/min and column temperature was 25 ℃. The wavelength of detector of gastrodin was 270 nm， and ferulic acid was 322 nm. Results Gastrodin and ferulic acid can be separated well with other components within 40 minutes. The linear range of gastrodin was 0.092～1.840 μg (r＝1.000 0)， and ferulic acid was 0.122～2.440 μg (r＝1.000 0). The average recovery rate of gastrodin was 99.50% with RSD＝1.23% (n＝5)， and ferulic acid was 101.5% with RSD＝1.52% (n＝5). Conclusion The method is simple， rapid， accurate and reliable， and can be used for determining gastrodin and ferulic acid in drug delivery system of Dachuanxiong simultaneously.
Key words：drug delivery system of Dachuanxiong；gastrodin；ferulic acid；HPLC/DAD；content determination
大川芎丸源于金·刘完素《宣明论方》，由川芎、天麻两味药组成，为治疗偏头痛的经典中药复方。大川芎复方释药系统即川芎效应组分与天麻效应组分制成缓释、速释微丸，并将缓释、速释微丸填充于同一胶囊制成的新型制剂。目前，市场上已有较多的大川芎方制剂，且大多以阿魏酸、天麻素作为质量控制指标，但因阿魏酸与天麻素分子的结构、极性等差异较大，需分别建立含量测定方法。为使含量测定方法简便、快速，本试验利用DAD检测器可同时在线检测多个吸收波长的优势，建立了一种同时测定大川芎复方释药系统中阿魏酸与天麻素的含量的高效液相色谱法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(LC-20AB型，日本岛津公司)，配有SPD-M20A型DAD检测器，二元梯度泵，SIL-20A型自动进样系统，LC Solution色谱工作站；SK7200LH超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)；FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；CP225D电子天平(德国Sartorius公司)；Millipore- Q Plus超纯水器(美国Millipore公司)。
大川芎复方释药系统(自制)；天麻素对照品(批号807- 9201，中国药品生物制品检定所产品)；阿魏酸对照品(批号0773-9910，中国药品生物制品检定所产品)；冰醋酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；甲醇(色谱纯，德国SIGMA公司)；水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：ODS-2 Hypersil柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特分析仪器有限公司)；流动相：甲醇(A)-1%冰醋酸(B)梯度洗脱，洗脱条件见表1；流速1 mL/min；柱温25 ℃；DAD检测器，检测波长270 nm(天麻素)、322 nm(阿魏酸)。在此色谱条件下，天麻素与阿魏酸均能与其他组分达到基线分离。色谱图见图1。
2.2 混合对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的天麻素与阿魏酸对照品适量，加甲醇-1%冰醋酸(35∶65)混合液，制成每1 mL含天麻素与阿魏酸分别为0.092 mg/mL与0.122 mg/mL的混合对照品溶液。表1 梯度洗脱条件（略）
2.3 供试品溶液的制备
取大川芎复方释药系统微丸约0.23 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入去离子水50 mL，超声处理1 h(频率59 kHz，功率350 W)，静置，取上清液，0.45 μm微孔滤膜滤过即可。
2.4 测定波长的选择
取混合对照品溶液，进样10 μL，在上述色谱条件下测定，DAD检测器对2个色谱峰分别于190～400 nm进行全波长扫描，发现天麻素在228、269 nm处有最大吸收峰，但色谱图在228 nm处基线漂移严重，且峰形较差，结合文献[1-2]，选择天麻素的测定波长为270 nm，在该测定波长下，天麻素的基线平稳，色谱峰峰形好。阿魏酸在322 nm处有一最大吸收峰，因此选用322 nm作为阿魏酸的吸收波长。
2.5 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液1、4、8、12、16、20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以进样量(μg)为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，进行线性回归，天麻素回归方程为：A＝12 718C－150.2，相关系数r＝1.000 0，线性范围为0.092～1.840 μg；阿魏酸回归方程为：A＝64 535C－47 729，相关系数r＝1.000 0，线性范围为0.122～2.440 μg。
2.6 空白干扰试验
取缺川芎部分(即无川芎缓释微丸)的阴性对照品、缺天麻部分(即无天麻缓释微丸及天麻速释微丸)的阴性对照品及川芎、天麻部分均缺的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成3种阴性对照品溶液，依法测定。结果表明，3种阴性对照品溶液对阿魏酸及天麻素的含量测定均无干扰。
2.7 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液10 μL，重复进样5次，依法测定。结果天麻素峰面积平均值为127 324，RSD＝0.17%；阿魏酸峰面积平均值为6 361 115，RSD＝0.17%。
2.8 稳定性试验
取样品适量，按供试品液制备方法制备，于0、2.5、5、8、10、13、16、19、48 h分别精密吸取10 μL，按上述色谱条件测定。结果天麻素峰面积平均值为226 484，RSD＝0.40%；阿魏酸峰面积平均值为2 033 999，RSD＝1.70%，表明供试品溶液在48 h内稳定。
2.9 重复性试验
精密称取同一批次大川芎复方释药系统微丸5份，按供试品溶液制备方法制备供试品液，按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算含量，天麻素RSD＝0.63%，阿魏酸RSD＝0.83%。
2.10 加样回收率试验
取天麻素、阿魏酸含量已知的大川芎复方释药系统微丸约0.23 g，精密称定，共5份，分别加入一定量天麻素及阿魏酸对照品，按供试品溶液制备项下操作，测定天麻素及阿魏酸含量。结果天麻素平均回收率99.50%，RSD＝1.23%；阿魏酸平均回收率为101.15%，RSD＝1.52%，结果见表2。 表2 加样回收率试验结果（略）
2.11 样品含量测定
取3批样品，按供试品液的制备方法制备样品溶液，分别取样品溶液和混合对照品溶液，按上述色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品中天麻素和阿魏酸含量。结果见表3。表3 样品含量测定结果（略）
3 讨论
本试验曾考察了多种供试品溶液的制备方法，在以水为溶剂超声法提取，阿魏酸与天麻素均能提取完全，且操作方便，无需后续纯化操作，溶剂价廉易得。
本试验所用的色谱条件可使川芎效应组分与天麻效应组分中的各主要色谱峰得到良好的分离，分析结果表明，270 nm处色谱图各色谱峰响应值较高，出峰数目最多，因此，该色谱条件亦可作为大川芎复方释药系统质量控制的指纹图谱色谱条件。
大川芎复方释药系统中的可控指标较少，仅以阿魏酸与天麻素作为质量评价的指标成分，很难全面反映出制剂的质量。因此，确定除阿魏酸、天麻素外更多的有效成分，并以此为评价指标控制效应组分及其制剂的质量，建立完善的质量标准已成为我们下一步的工作重点。
参考文献
[1] 李建祥，葛玉松.天麻胶囊质量标准研究[J].药物与临床，2007，10(5)：308－309.
[2] 徐艳丽，刘天富，王中彦，等.HPLC测定注射用大川芎(冻干)中阿魏酸和天麻素的含量[J].中成药，2006，28(9)：1281－1284.