【摘要】 目的 研究复方罗布麻片中罗布麻叶的提取工艺。方法 以槲皮素含量为指标，以乙醇浓度、乙醇体积和提取时间为考察因素，应用L9(34)正交试验优化罗布麻叶的提取工艺，并用高效液相色谱法测定复方罗布麻片中槲皮素的含量。色谱条件为：Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(27∶73)，检测波长为371 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃。结果 用30倍85%乙醇，在水浴中回流2 h。槲皮素在0.963 0～0.080 3 μg范围内具有良好的线性关系，r＝0.999 8(n＝7)，平均回收率为99.46%。结论 本工艺提取完全，并获得了满意的测定结果。
【关键词】 复方罗布麻片；罗布麻叶；槲皮素；提取工艺
复方罗布麻片是由罗布麻叶、野菊花、防己粉，以及三硅酸镁、盐酸异丙嗪、维生素B1、维生素B6等组成的复方制剂，是临床治疗高血压的常用药物，具有降压平稳、不良反应小、价格便宜等特点，其质量标准收载于《国家药品标准·化学药品》第十一册[1]。现行复方罗布麻片的制备工艺为：取罗布麻叶加水煎煮3次，每次1 h，合并煎煮液，滤过，将滤液浓缩至清膏，干燥，制成干浸膏后与其他药物混合均匀，制成颗粒，干燥，整粒，压片，包衣。用水煎煮罗布麻叶的提取工艺不能充分提取罗布麻叶的有效成分，导致复方罗布麻片的质量和疗效出现不同程度的下降，急需进一步完善复方罗布麻片制备工艺。
1 仪器与试药
DIONEX P680LPG-4型高效液相色谱仪(美国戴安公司)， DIONEX 170UV紫外检测器(美国戴安公司)，Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，UV-1800SPC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，BS-21S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)，AEL-160型电子分析天平(日本岛津公司)，二孔型电热恒温水浴锅(北京科伟永鑫实验仪器设备厂)，YB-1A型真空恒温干燥箱(天津金洲科学仪器有限公司)。乙腈为色谱纯，乙醇、甲醇、盐酸与磷酸为分析纯，水为去离子水。槲皮素对照品(批号100081-200406，含量97.3%， 120 ℃干燥4 h后用)购于中国药品生物制品检定所。复方罗布麻片(山西云鹏制药有限公司，批号20060502；东芝堂药业安徽有限公司，批号06030301；山西亚宝药业集团股份公司，批号060114)为市售品。复方罗布麻片样品(自制，批号070511、070512、070513)。
2 方法与结果
2.1 紫外检测波长的选择
用流动相配制槲皮素的标准溶液0.01 mg/mL，在400～300 nm波长范围内扫描，在371 nm处有最大吸收，所以选择371 nm为槲皮素检测波长。
2.2 色谱条件
Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温：30 ℃，进样量：20 μL。根据槲皮素的化学性质，参考有关文献[2-6]，按乙睛-0.5%磷酸溶液(27∶73)比例，采用恒压恒流(流速为1.0 mL/min)洗脱方式将其分离。
2.3 罗布麻叶的提取工艺优化
通过查阅相关文献[7]及预试验，以槲皮素含量为指标，以乙醇浓度、乙醇体积和提取时间为考察因素，采用L9(34)正交试验优化槲皮素的提取工艺。取罗布麻叶细粉(过3号筛)约1 g，加B倍A浓度的乙醇，加盐酸9 mL，在水浴中回流C小时，冷却后，转移至250 mL量瓶中，加乙醇至刻度，用微孔滤膜滤过。见表1～表3。表1 试验因素水平（略）表2 正交试验表（略）表3 方差分析表（略）注：F0.05(2，2)=19，F0.01(2，2)=99
可见，乙醇浓度、加乙醇体积和提取时间对试验结果有显著影响，影响因素的作用主次顺序为B、A、C。通过比较，确定罗布麻叶中槲皮素最佳提取工艺为B2A3C2，即加30倍体积的85%乙醇，在水浴中加热回流2 h。按上述试验确定的最佳提取工艺条件重复3次，结果罗布麻叶中槲皮素提取稳定，平均值为9.171 8 mg/g，说明上述提取工艺适合罗布麻叶中槲皮素的提取。
2.4 线性关系考察
精密称取槲皮素对照品(含量97.3%)20.62 mg，置于100 mL容量瓶中，加85%甲醇温热超声1 h溶解，并稀释至刻度，即得对照品贮备液。分别取上述对照品贮备溶液0.5、1、2、3、4、5、6 mL至25 mL量瓶中，加85%甲醇至刻度，分别进样20 μL。以进样量为横坐标、以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y＝-0.539 8＋60.282 8X，r＝0.999 8(n＝7)。槲皮素进样量在0.963 0～0.080 3 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取槲皮素对照品贮备溶液2 mL至25 mL量瓶中，加85%甲醇至刻度，连续进样6次，进样20 μL，槲皮素RSD＝0.08%。
2.6 罗布麻叶浸膏含量测定
精密称取自制复方罗布麻片的罗布麻叶浸膏，置于100 mL圆底烧瓶中，精密加50 mL盐酸甲醇溶液(1→25)，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。进样20 μL，记录色谱图，结果见表4。表4 浸膏含量测定结果（略）
2.7 样品含量测定
取本品20片，研细，精密称取适量，精密量取盐酸甲醇溶液(1→25)50 mL加入100 mL圆底烧瓶中，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过，进样20 μL，记录色谱图。结果见表5。表5 样品含量测定结果（略）
2.8 重复性试验
取自制样品(批号070511)约0.07 g，5份，按“2.7”项下方法操作，进样20 μL，槲皮素RSD＝1.07%。
2.9 空白干扰试验
取除罗布麻叶外的复方罗布麻片阴性样品，置具塞锥形瓶中，按“2.7”项下方法操作，进样20 μL，，结果表明在槲皮素峰处无干扰，见图1。
2.10 稳定性试验
以“2.7”项下的自制样品(批号070511)作为供试品溶液，于0、1、2、3、6、12、24 h分别进样20 μL，测得峰面积值，槲皮素RSD＝1.27%。
2.11 加样回收试验
精密加入槲皮素对照品贮备溶液2 mL，置于100 mL圆底烧瓶中，挥干后，取自制样品(批号070512)20片，精密称定，研细，称取适量，6份，置于烧瓶中，精密加入50 mL盐酸甲醇溶液(1→25)，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作供试品溶液。进样20 μL，结果见表6。表6 加样回收率测定结果（略）
3 讨论
以槲皮素含量为指标，以乙醇浓度、乙醇体积和提取时间为考察因素，通过L9(34)正交试验优化罗布麻叶的提取工艺，确定罗布麻叶中槲皮素最佳工艺为B2A3C2，即加30倍体积的85%乙醇，在水浴中加热回流2 h。验证试验结果与其相吻合。
根据槲皮素的化学性质，参考有关文献，起初采用甲醇- 0.2%磷酸溶液作为流动相，发现槲皮素峰形既前展又拖尾。后来采用乙腈-0.5%磷酸溶液(27∶73)，槲皮素峰的分离度与不对称度符合要求。
通过对3个厂家的复方罗布麻片中槲皮素的含量测定，发现药物中槲皮素含量较低，甚至含量为零，而且含量极不均匀。因此，我们认为，有必要在复方罗布麻片质量标准中加入槲皮素含量测定项目，以确保药品监督管理部门更全面监管其内在质量，保障患者的用药安全、有效。
参考文献
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