作者：任卫琼，廖建萍，王诚元
【摘要】 目的 建立春雨烧伤凝胶剂中盐酸小檗碱含量测定的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-1%H3PO4-三乙胺(24∶76∶0.76)，检测波长：345 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃。结果 盐酸小檗碱在0.088～0.440 μg(r=0.999 7)之间具有良好的线性关系，平均回收率为98.13%， RSD=0.77%(n =6)。结论 该法检测快速，精密度高，重现性好，可用于春雨烧伤凝胶剂的定量分析。
【关键词】 春雨烧伤凝胶剂；盐酸小檗碱；含量测定
Abstract：Objective To establish an HPLC method for determination the contents of berberine hydrochloride in spring rain burns gels. Methods Analytical column was Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm， 5 μm) column with a mobile phase of Acetonitrile-1%H3PO4-Triethylamine (24∶76∶0.76)， the detective wavelength was 345 nm， the flow rate was 1.0 mL/min and column temperature was 30 ℃. Results A good linearity was obtained in the range of 0.088～0.440 μg (r=0.999 7)， and the average recovery was 98.13% with RSD=0.77% (n=6). Conclusion The method is rapid and reliable， and can be used for the quality control of spring rain burns gels.
Key words：spring rain burns gels；berberine hydrochloride；content determination
春雨烧伤凝胶剂由黄连、大黄、虎杖、栀子、冰片等9味中药组成，具有清热泻火、活血化瘀、消肿止痛及排脓生肌的功效，外用于治疗烧、烫伤。黄连为方中君药，主含有效成分为盐酸小檗碱[1]，法定标准[2]中收载了盐酸小檗碱含量的测定方法为薄层色谱扫描法。为控制该制剂的质量，本实验采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，结果准确，方法简便，可作为该制剂质量控制指标。
1 仪器、样品与试剂
Agilent 1100 高效液相色谱仪；二极管阵列检测器(DAD)。盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号0713-9906。春雨烧伤凝胶剂由湖南中医药大学第一附属医院剂改室提供(批号20060315，20060316，20060317)。乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：乙腈-1%H3PO4-三乙胺(24∶76∶0.76)，检测波长：345 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃，进样量：10 μL。
2.2 线性范围及标准曲线制备
精密称定盐酸小檗碱对照品4.40 mg，加甲醇配制成浓度为0.044 mg/mL的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μL，按上述色谱条件进行测定，得回归方程为：Y=1.280X+76.411(r=0.999 7)。结果表明，盐酸小檗碱在0.088～0.440 μg之间具有良好的线性关系。
2.3 供试品溶液的制备
取春雨烧伤凝胶剂0.3 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)50 mL，称重，控制水温40 ℃，密塞，超声处理2次。每次30 min，取出，冷却，放至室温后再称定重量，加盐酸-甲醇(1∶100)补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，并定容于10 mL量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.4 空白试验
按处方比例和制法，制成不含黄连的样品，并按“2.3”项下方法制得空白对照品溶液。依法进样测定，结果空白对照溶液在盐酸小檗碱保留时间处无色谱峰，表明在实验条件下，其他药材成分对测定无干扰。见图1。
2.5 精密度试验
精密吸取同一浓度的对照品溶液5 μL，重复进样5次，结果RSD=0.95%(n=5)，表明精密度较高，测定可靠。
2.6 稳定性试验
取样品(批号20060315)0.3 g，精密称定，按“2.3”项方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、24 h依法测定，结果峰面积RSD=1.05%(n=6)，表明供试品液在24 h内峰面积积分值基本稳定。
2.7 重复性试验
取同一批号样品(批号20060315)各5份，精密称定，按“2.3”项下方法制得供试品溶液，并按上述色谱条件进行测定，结果表明，本方法重复性较好，RSD=0.98%(n=5)。
2.8 加样回收率试验
精密称定已知含量的样品(批号20060315)0.3 g，各2份，各精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(浓度为0.67 mg/mL)，分别按“2.3”项下方法制得供试液，测定，计算回收率。结果见表1。表1 盐酸小檗碱回收率测定结果(略)
2.9 样品含量测定
取3批样品，精密称定，按“2.3”项下方法制得供试液，以上述色谱条件测定盐酸小檗碱含量，测定结果见表2。表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果(略)
3 讨论
笔者曾对多种流动相进行了比较，考察盐酸小檗碱的分离情况及检测灵敏度，结果采用乙腈-1%H3PO4-三乙胺(24∶76∶0.76)分离情况最好。曾对超声提取时间进行了考察，发现超声提取1 h已能将制剂中盐酸小檗碱提取完全，故选用超声1 h。
3组样品含量测定结果表明，其含量基本稳定，可作为本品的含量控制方法。
【参考文献】
[1] 李家实.中药鉴定学[M].上海：上海科学技术出版社，1996.57.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S] .北京：化学工业出版社，2005.213.