【摘要】 目的 探讨产舒康颗粒的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法进行含量测定。色谱条件：Kromasil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-2%冰醋酸水溶液(40∶60)；检测波长：324 nm。结果 本品中检出当归、川芎、胎盘、甘草，阿魏酸在0.625～3.750 μg范围内线性关系良好，3批产舒康颗粒中阿魏酸含量分别为0.054%、0.037%、0.042%，平均回收率96.2%，RSD＝2.37%。结论 薄层色谱法可用于本品中4种中药的鉴别，高效液相色谱法简便、灵敏、准确，为控制产舒康颗粒的质量提供了依据。
【关键词】 阿魏酸；产舒康颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准
Abstract：Objective To study the quality control method for Chanshukang granule. Methods TLC and HPLC method were used to identify the Chinese herbal medicines. The determination was carried on HPLC， using Kromasil C18 column (200 mm×4.6 mm， 5 μm)， ethanol-2% glacial acetic acid (40∶60) as mobile phase and detected at the wavelength of 324 nm. Results The Chinese herbal medicines， Radix Angelicae Sinensis， Rhizoma Chuanxiong， Placenta Hominis and Radix Glycyrrhizae Preparata， in granules were identified by TLC. The calibration curve was linear in the range of 0.625～3.750 μg for ferulic acid. The contents in three batches were 0.054%， 0.037%， 0.042% respectively. The average recovery was 96.2% and RSD=2.37%. Conclusion The TLC method can be used for the quality control of four herbal medicines in the granule. The HPLC method is simple， sensitive， accurate and provides a certain evidence for controlling the quality of Chanshukang Granule.
Key words：ferulic acid；Chanshukang granule；TLC；HPLC；quality standard
产舒康颗粒是在济南市妇幼保健院医院制剂基础上新研制的产后康复用制剂，由当归20 g，川芎9 g，益母草20 g，胎盘超微粉3 g，桃仁6 g，炮姜3 g，炙甘草5 g组成。本实验对产舒康颗粒处方中当归、川芎、胎盘、炙甘草进行薄层鉴别研究。当归、川芎、益母草均含有效成分阿魏酸，本品由药材到制剂，其提取转移率为77.93%，以此为质控指标能代表本品的质量，故采用HPLC法测定阿魏酸的含量。
1 材料与仪器
产舒康颗粒，济南市妇幼保健院制剂室制备，批号20020302、20020328、20020415；当归(9271-200110)、川芎(0918-200004)对照药材，甘草次酸(723-200109)、阿魏酸(批号773-200103)对照品，均由中国药品生物制品检定所提供。薄层层析用硅胶G(青岛海洋化工厂)；甲醇为色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)，其他试剂均为分析纯。
ZF-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，微量进样器(上海医用激光仪器厂)，Waters HPLC系统：600E泵，7725i定量进样阀，2996二极管阵列检测器，M32色谱工作站；Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，先德(天津)科技仪器有限公司产品。
2 薄层色谱的鉴别
2.1 当归、川芎
取本品9 g，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚50 mL，振摇提取30 min，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各1 g，分别加乙醚10 mL，同法制成对照药材溶液。再取缺当归、川芎，以及缺当归、川芎、益母草的制剂，同法制成阴性对照溶液。取供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL，对照药材溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的蓝色荧光斑点，阴性对照无此斑点。
2.2 胎盘
取本品12 g，置索氏提取器中，加氯仿100 mL，加热回流提取2 h，提取液回收氯仿至干，残渣加氯仿1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取胎盘对照药材1 g，加氯仿适量，同法制成对照药材溶液。再取缺胎盘制剂12 g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以醋酐-浓硫酸(9∶1)溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的蓝绿色斑点，而阴性对照无此斑点。
2.3 甘草
取本品6 g，研细，加盐酸3 mL、氯仿50 mL，加热回流提取1 h，放冷，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加1 mL乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取缺甘草制剂，同法制成阴性对照溶液。取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%磷钼酸乙醇液，105 ℃加热5 min至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点，而阴性对照无此斑点。
3 含量测定
3.1 供试品、阴性对照与对照品溶液的制备
取本品2袋，研细，取12 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50 mL，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，加水补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，加盐酸调pH至1～2，加乙酸乙酯振摇提取5次，每次30 mL。合并乙酸乙酯液，回收至干，残渣加甲醇溶解，移置10 mL棕色量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取缺当归、川芎、益母草及缺当归、川芎模拟剂，同法制备阴性对照溶液。精密称取干燥至恒重的阿魏酸对照品2.5 mg，加甲醇溶解，定容于10 mL棕色量瓶中，制成每1 mL含0.25 mg的对照品溶液。
转贴于 3.2 色谱条件
甲醇-2%冰醋酸水溶液(40∶60)为流动相；流速1.0 mL/min；柱温25 ℃；检测波长324 nm；进样量：10 μL。
3.3 线性关系
精密吸取对照品溶液(0.25 mg/mL)2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL，进样，测定峰面积积分值，分别为2 443 039、4 882 384、7 577 423、10 166 159、12 605 063、15 144 112，得回归方程：Y=4.080 6×106X-1.231 9×105，r=1.000。表明阿魏酸在0.625～3.750 μg范围与峰面积积分值呈良好线性关系。
3.4 专属性试验
吸取当归、川芎、益母草的阴性对照、对照品、供试品溶液10 μL分别进样，记录色谱图，见图1。
3.5 精密度、稳定性和重现性
精密吸取同一供试品溶液，重复进样5次，结果RSD= 1.48%(n=5)，显示仪器精密度好。精密吸取同一供试品溶液，按0、0.5、1、3、4 h时间间隔进样，结果RSD=2.91%(n=5)，表明供试品溶液在4 h内基本稳定。取批号20020328的产舒康颗粒，研细，各取6 g，精密称定，共5份，测定阿魏酸含量，结果RSD=1.70%，显示测定方法重现性良好。
3.6 加样回收率试验
取已知阿魏酸含量的产舒康颗粒(批号20020328)各3 g，精密称定，共5份，分别精密加入1 mg对照品，测定含量，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
3.7 样品含量测定
取3个批号的产舒康颗粒，测定阿魏酸含量。结果见表2。表2 3批产舒康颗粒中阿魏酸含量测定结果(略)
4 讨论
当归、川芎、益母草中均含有阿魏酸，但本试验方法的薄层色谱所得结果，阴性对照中含与不含益母草对当归和川芎的鉴别结果影响不大，只是色谱图略有不同。甘草酸单胺盐作为对照品也可检出甘草，但经试验分离效果较甘草次酸差，所以本品使用甘草次酸鉴别甘草。
阿魏酸为本品主要有效成分，溶于热水，提取转移率较高。虽然涉及3种药材，质控目的性较差，但仍是本品最主要的质控手段。含量测定中操作方法简便，测定值重现性强，可作为质量控制指标。供试品测试中，取阿魏酸对照品色谱峰，计算色谱柱理论板数=5.54×(8.640/0.289 383 8)2=4 938.4&>3 000，其中Rt=8.640，50%Width=0.289 383 8。
由图1可以看出，缺当归、川芎含有益母草的阴性对照品存在阿魏酸色谱峰，保留时间与阿魏酸对照品一致，初步证实益母草中含有阿魏酸成分，与文献[1]报道吻合，仍需其他光谱的进一步佐证。本实验中阿魏酸的峰面积积分值线性范围可扩展到0.035～3.750 μg，对阿魏酸含量较低的益母草也可准确测试。
【参考文献】
[1] 秦雪梅，郝旭亮，周迎春，等.益母草中阿魏酸的色谱鉴别[J].中草药，2001，32(5)：447－448.