作者：冯绮，甘业梅，陈琨凤，阮群
【摘要】 目的 制定防芷鼻炎片的质量标准。方法 用TLC鉴别白芷、白芍、甘草、防风；以HPLC测定欧前胡素的含量。选用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(65∶35)，流速为1 mL/min，检测波长为248 nm。结果 TLC色谱中斑点清晰，易于识别；HPLC法精密度、重现性良好。欧前胡素在0.076～0.684 μg范围内有较好的线性关系，平均回收率98.63%(RSD=1.52%)。结论 本法可有效控制防芷鼻炎片的质量。
【关键词】 防芷鼻炎片；薄层色谱法；高效液相色谱法；欧前胡素；质量标准
Abstract：Objective To establish the method for quality standard of Fangzhi Biyan Tablet. Methods Radix Angelicae Dahuricae， Radix Paeoniae Alba， Radix Saposhnikiviae and Radix Glycyrrhizae in the tablet were identified by TLC. The content of Imperatorin in this medicine was determined by HPLC. The Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm×250 mm， 5 μm) was used， mobile phase was methanol-0.1%phosphoric acid solution (65∶35)， flow rate was 1.0 mL/min， detection wavelength was 248 nm. Results The TLC spots developed were fairly and simply identical. HPLC was accurate and reproducible. Imperatorin show a good liner relationship at range of 0.076～0.684 μg， the recovery was 98.63% (RSD=1.52%). Conclusion These methods can be used to control the quality of Fangzhi Biyan Tablet effectively.
Key words：Fangzhi Biyan Tablet；TLC；HPLC；Imperatorin；quality standard
防芷鼻炎片由苍耳子、白芷、白芍、墨旱莲、防风、甘草等中药组成，具有清热消炎、祛风通窍的功效，用于治疗慢性鼻炎引起的喷嚏、鼻塞、头痛、过敏性鼻炎。为了有效控制该产品的质量，笔者对处方中白芷、白芍，甘草、防风进行了定性鉴别，采用HPLC法测定白芷中欧前胡素的含量，结果方法简便、准确、重现性好，适用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药
Agilent1100系列高效液相色谱仪；CQX25-06超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。
防芷鼻炎片(广西玉林制药有限责任公司生产)；欧前胡素对照品(供含量测定用，批号0826-9502)，芍药苷对照品(批号0736-8904)，以及白芷、甘草、防风对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 定性鉴别
2.1 白芷
取本品15片，除去糖衣，研细，取2.5 g，加乙醇25 mL，超声提取30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芷对照药材1 g，按供试品溶液提取方法制成每1 mL含0.5 g的对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺白芷的阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚[1]为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同深蓝色的斑点，阴性对照无干扰。
2.2 白芍
取本品15片，除去糖衣，研细，称取2 g，加甲醇10 mL，超声提取20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品1 mg，加甲醇1 mL使溶解，作为对照品溶液，再按标准处方比例和制备方法制备缺白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨(8∶1∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上显相同灰褐色斑点，阴性对照无干扰。
2.3 防风
取本品20片，除去糖衣，研细，称取4 g，加丙酮20 mL，超声提取20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取防风对照药材1 g，按供试品溶液提取方法制备成每1 mL含0.5 g的对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺防风的阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，对照药材溶液4 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同颜色荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.4 甘草
取本品15片，除去糖衣，研细，称取2 g，加乙醇25 mL，超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1 g，按供试品溶液制备方法制备成每1 mL含0.5 g的对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺甘草的阴性对照溶液。照薄层色谱法[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-无水乙醇-氨试液(5∶1∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同橙黄色斑点，阴性对照无干扰。
3 欧前胡素的含量测定
3.1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(65∶35)；流速：1.0 mL/min；检测波长：248 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按欧前胡素峰计算应不低于3 000。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL含0.032 mg的溶液，摇匀，即得。
转贴于 3.3 供试品溶液的制备
取本品30片，除去糖衣，研细，称取约5 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，加甲醇45 mL，密塞，超声处理45 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液经0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。
3.4 空白试验
按处方及制备工艺制备不含白芷药材的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照在此保留时间无干扰(见图1)。
3.5 线性关系考察
称取欧前胡素对照品约3.8 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，作为欧前胡素对照品贮备液(0.076 mg/mL)。分别精密吸取贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度梯度为0.007 6、0.022 8、0.038 0、0.053 2、0.068 4 mg/mL的溶液。分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=7.591×10-4X+1.874×10-4，r=0.999 9，欧前胡素铵在0.076～0.684 μg范围内呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，重复进样6次，结果峰面积均值为1 280.94，RSD=0.89%。
3.7 重复性试验
平行制备防芷鼻炎片(批号为545001)供试品溶液6份，进行测定，结果平均含量为0.281 mg/g，RSD=1.01%。
3.8 稳定性考察
精密吸取供试品溶液10 μL，分别在0、2、4、6、8、10、12 h进样1次，测定峰面积，RSD=1.08%。表明供试品溶液在12 h内稳定。
3.9 加样回收率试验
称取已知含量为0.281 mg/g的防芷鼻炎片除包衣药粉3 g，精密称定，分别精密加入浓度为0.108 mg/mL的对照品贮备液(另配)5.5、5.5、7.8、7.8、10、10 mL，照“3.3”项下方法制备供试液，依法测定，计算回收率。结果见表1。表1 欧前胡素加样回收率测定结果（略）
3.10 样品测定
按“3.2”和“3.3”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表2。表2 样品测定结果（略）
4 讨论
本标准对制剂中的白芷、白芍、甘草、防风进行了薄层鉴别，结果与对照品或对照药材斑点一致，且阴性对照无干扰。在甘草薄层鉴别中，曾
参考文献
[2-3]中的展开剂，但效果都不理想，经摸索用乙酸乙酯-丙酮-无水乙醇-氨试液(5∶1∶2∶1)比较好，其中氨试液要求临用新配。采用甲醇-水作为流动相时，易产生拖尾现象，换成0.1%磷酸溶液可使色谱峰减少拖尾，能达到基线分离。
【参考文献
】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.477－478.
[2] 陈 平，戴 忠，高咏莉，等.糖尿灵片的质量标准研究[J].中成药，2005， 27(8)：903－905.
[3] 孙守景，高剑峰，李兰忠，等.加味酸枣仁合剂质量控制方法的研究[J].中国中医药信息杂志，2005，12(6)：44－45.