两种方法取材检测HPV DNA的临床对比分析

作者：骆伟雄 李庆勇 冯丽蓉

【摘要】目的 比较临床上检测尖锐湿疣的两种取材方法的可靠性。方法 对86例在临床上可见明显疣体增生物，并经醋白实验初步诊断为CA的患者，进行了在疣体表面取材和直接剪切疣体组织进行FQ-PCR检测，并把两组所得检测值求得对数均数和标准差进行对比，在CA经过电灼治疗后一周，选取无CA复发的患者38例，进行在原电灼部位皮肤表面取材和在同一点用10ML，一次性注射器针头直接钻取活体组织送检FQ-PCR两种方法的对比研究。结果 电灼治疗前两种取材方法所得检测值求得的对数均数和标准差分别为: 疣体表面取材组5.73±4.76， 疣体组织碎片组6.83±5.96，两组相比较u=0.76，P&>0.05.电灼后两种取材方法所得检测值求得的对数均数和标准差分别为:皮肤表面组4.00±3.25，皮肤组织碎片组5.99±4.07，t=2.06 P&<0.05。结论 对于有明显疣体组织增生的患者，两种取材方法均可以使用，但对皮肤表面无明显疣体组织增生者，不应使用皮肤表面直接取材方法，以免产生误差。
【关键词】尖锐湿疣 取材方法 检测
　　尖锐湿疣(简称CA)，是由人类乳头瘤病毒(简称HPV)感染引起的一种性传播性疾病，对CA的检测临床上除可用醋白试验来初步诊断外，常用的确诊方法为直接在疣体取材进行PCR检测HPV DNA，取材方法一般为直接在疣体表面用棉签摩擦后送检。为验证该方法的可靠性，我们对86例在临床上可见明显疣体增生物，并经醋白实试验初步诊断为CA的患者，在疣体表面取材和直接剪切疣体组织送检两种方法的对比，并在CA经电灼治疗后一周， 选取无CA复发的患者38例，在进行在原电灼部位皮肤表面取材和在同一点用10ML，一次性注射器针头直接钻取活体组织送检FQ-PCR两种方法的对比研究。现将结果报告如下：
　　1 病例来源
　　所有85例患者均来自本院皮肤科性病门诊，其中男67例，女19例，年龄在17～65岁，病程1个月至1年，所选病例均可见明显的疣状增生物，醋白试验阳性。疣体位于寇状沟、包皮、阴茎茎根部、肛周、女性大小阴唇处。所选病例年龄、性别、病程、皮损部位均具有可比性。
　　2 取材及检测
　　2.1 取材方法
　　2.1.1 电灼前取材:暴露疣体，充分消毒后，局部用2%利多卡因5ML作局部麻醉，取一无菌棉签在疣体表面来回稍用力摩擦5次，再在疣体中固定一点稍用力向下旋转5次。所得棉签放入PCR专用小塑料胶管中送检。用蚊式组织剪剪除部分疣体组织，把所得组织碎块亦放入小塑胶管中送检。完成两种取材后，余下疣体组织电灼清除此。
　　2.1.2 电灼治疗后取材方法：电灼治疗一周后，选取未见疣体组织复发而取材处皮肤表面醋白试验阴性的CA患者，在原电灼部位旁边皮肤选取一点，在该点上先用无菌棉签来回稍用力磨擦5次，再使棉签向下稍用力压紧取材点皮肤旋转5圈，所得棉签放入PCR管中送检。
再取一10ML一次性注射器，把取材点充分消毒后，将注射器针头从取材点穿刺入皮肤，针头与皮肤的夹角约为10°，在针头进入皮肤及皮下组织时，将注射器针头紧贴表皮并旋转和稍用力抽吸注射器以获得皮肤组织及皮下组织的碎片，进入3-5MM后抽出针头，把组织碎片放入内装生理盐水的PCR管中送检。另外再选取阴茎珍珠丘疹病、系带旁丘疹、女性外阴假性湿疣病共15例作为阴性对照。取材方法为局麻后剪切少量组织送检，所要检测的为病毒HPV6、11、16、18病毒。 转贴于 　　 2.2 检测方法
　　检测方法为用荧光定量聚合酶反应FQ-PCR检测人乳头瘤病毒分型中的6、11、16、18四种亚型。检测采用 的试剂盒是有中山医科大学达安基因诊断中心提供的，内含HPV6、11、16、18一段保守的DNA片断为引物，所用仪器为德国B48孔型PCR扩增仪和上海棱光技术有限公司DA-620型微量荧光检测器。具体操作步骤按照仪器及试剂盒给出的说明书进行。对送检的组织碎片可先经组织研碎，蛋白酶K消化，酚/氯仿提取组织中的DNA成分等步骤把所检组织中的DNA提取出来后，再用上述仪器及试剂对其进行检测。
　　3 结果
　　对电灼前所取标本检测的结果为疣体表面HPV6、11、阳性者78例，HPV16、18阳性者7例，其中有5例HPV16、18阳性者同时合并 HPV6、11、感染。HPV6、11、16、18检测阴性者6例。疣体组织碎片HPV6、11阳性者82例。HPV16、18阳性者7例，其中5例HPV16、18 阳性者同时合并 HPV6、11、感染，HPV6、11、16、18检测阴性者2例。电灼后一周，对未见湿疣复发的38例患者所进行的HPV病毒检测结果为：表皮取样组织HPV6、11、阳性者26例，无HPV16、18 阳性者。皮肤组织碎片组织HPV6、11、阳性者33例，1例 HPV16、18阳性者。由于所检测的四种HPV病毒亚型中以HPV6、11、阳占绝大部分，故仅对这两组检测值中的HPV6、11、阳进行统计学处理。用求几何均数和标准差的方法对由FQ-PCR所测得的电灼前后各两组数据进行处理，电灼治疗前两种取材方法所得检测值求得的对数均数和标准差分别为：疣体表面取材组5.73±4.76，疣体组织碎片组6.83±5.96。两组相比较u=0.76，P&>0.05。电灼后两种取材方法所得检测值求得的对数均数和标准差分别为：皮肤表面组4.00±3.25，皮肤组织碎片组5.99±4.07，t=2.06，P&<0.05.对阴茎珍珠丘疹病、系带旁丘疹、女性外阴假性湿疣病共15例的表皮及组织碎片检测HPV6、11、16、18均为阴性。
　　4 讨论
　　在临床工作中，在用PCR检测尖锐湿疣时，对有明显呈菜花样等外观的尖锐湿疣，很多医务工作者都喜欢在疣体表面用棉签直接取材送检。经研究表明，这种方法是可行的。因为电灼前疣体表面组与疣体组织碎片组的检测经过统计学处理表明，两者之间无明显差异(u=0.76，P&>0.05)。该结果与韩世范[1]等和LA[2]所得结果是一致的。但该方法不建议用于无明显疣体增生组织的正常皮肤检测HPV病毒，因为从本研究可见，正常皮肤表面所取标本与组织碎片标本间的HPV6、11、检测是有明显差异的(t=2.06 P&<0.05)，该结果与廖元兴[3]的主张是一致的。
参 考 文 献
[1]韩世范，王复梅，程金莲.尖锐湿疣患者疣体表面HPV DNA检测[J].中华皮肤科杂志，2000，38:181.
[2]LA.男性尖锐湿疣患者尿样人类乳透瘤病毒DNA检测[J].国外医学皮肤性病学分册，1999，25:63-64.
[3]廖元兴.现代性病临床诊断彩色图谱[M].南昌：江西科学技术出版社，1997.