前列腺癌p21 mRNA的表达及其与淋巴结转移的相关性

【摘要】 目的 研究原发前列腺癌中p21的表达情况，探讨其在前列腺癌中的临床意义。方法 用RTPCR的方法检测前列腺癌及癌旁组织p21的表达。结果 在67例前列腺癌组织中，有31例(46.29%)表达p21 mRNA;癌旁正常组织中，有49例(73.13%)表达p21mRNA。将前列腺癌组织分成2组，分别是有淋巴结转移和无淋巴结转移组。在41例有区域淋巴结转移病例中，p21 mRNA表达13例(31.71%)。在26例无淋巴结转移的病例中，p21 mRNA表达18例(69.23%)。 结论 p21在原发前列腺癌组织中的表达与癌旁正常组织相比明显减少;P21在有淋巴结转移组织表达明显低于无淋巴结转移组。

【关键词】 p21;前列腺癌;抑癌基因

p21是目前已知的具有最广泛CDK抑制活性的细胞周期抑制蛋白，负性调节CDK的功能预示其在抑制肿瘤方面的作用。P21与肿瘤发生、发展及其生物学行为有关，有可能成为估计肿瘤恶性行为及预后的新指标。本实验旨在应用分子生物学的方法检测和分析原发前列腺癌中p21的表达情况，探讨其在前列腺癌中的临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 组织与试剂 收集2007年1月至2008年7月本院泌尿外科67例前列腺癌手术患者的癌组织和癌旁正常组织。手术切除后立即送至-80℃深低温冰箱中冻存。所有病例术前均未发现远处转移，未行放疗和化疗，术后均有病理证实，均为原发前列腺癌。Trizol购于Invitron公司，Taq酶购于Takara公司，RT试剂盒购于MBI公司。

　　1.2 方法 通过RTPCR检测p21 mRNA的表达

　　1.2.1 总RNA提取 从-80℃冰箱取出保存好的组织，称量50 mg，在液氮中研磨成粉末，用 Trizol一步法裂解细胞提取总RNA，用紫外分光光度计测量 260 nm/280 nm吸光度比值在1.8～2.0之间，RNA变性凝胶电泳检测。

　　1.2.2 序列引物 上游： 5′TACTCCCCTGCCCTCAACAA 3′，下游： 5′CGCTATCTGAGCAGCGCTCAT 3′，由上海生工合成。

　　1.2.3 反转录 以提取的RNA为模板，条件为： oligo(dT)18 ( 0.5 g/L ) 1 μl，总 RNA 1 μg，去离子水6 μl，70℃ 5 min，立即冰浴 ，随后依次加入5×reaction buffer 4 μl，RNA酶抑制剂 (20 × 10 U/L) 1 μl，dNTP (10 mmol /L)2 μl，依次 37℃ 5 min，42℃ 60 min，70℃ 10 min。PCR ： 94℃ 2 min，随后加入Taq DNA聚合酶 0.25 μl; 94℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 1 min，30个循环，最后延伸72℃ 1 min。

　　1.4 统计学处理 采用χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 RTPCR结果 总RNA电泳显示 28S、18S条带清晰，5S稍暗，260 nm /280 nm吸光度比值为1.89。PCR产物1.2 g/L琼脂糖凝胶电泳结果显示，扩增出预期大小的目的片段，大小约 483 bp(图1)。

　　1：癌旁组织，2：癌组织，M：100～1 400 bp Marker，No：有淋巴结转移癌组织，N1：无淋巴结转移癌组织

　　图1 RTPCR扩增结果

　　2.2 p21 mRNA在原发前列腺癌的表达 在67例癌组织中，有31例(46.29%)表达p21 mRNA。癌旁正常组织中，有49例(73.13%)表达p21 mRNA。组间比较有非常显著性的差异(χ2=10.05，P<0.01)。

　　2.3 p21mRNA的表达与淋巴结转移 在41例有区域淋巴结转移病例中，p21mRNA表达13例(31.71%);在26例无淋巴结转移的病例中，p21mRNA表达18例(69.23%)，组间比较有显著性差异(χ2=8.02，P<0.01)。

　　3 讨 论

　　许多研究表明，P21 与肿瘤的分化、增生、转移有关，并且具有预后价值〔1～3〕。本实验中，p21在癌旁正常组织中的表达率为73.13%，在癌组织中表达只有46.29%，在无淋巴结转移的病例中表达率高达69.23%，而在淋巴结转移的病例中迅速降低为31.71%，可能有以下几个原因：(1) p21基因突变与缺失。正常组织在受到外界因素的影响和刺激时，有可能出现p21的突变和缺失〔4〕。(2)本实验选取的正常组织均为食管癌患者肿瘤组织旁的正常组织，不除外有组织恶变倾向，p21突变缺失的可能。笔者认为p21 mRNA在有无淋巴结转移的病例中差异显著有可能是：在无淋巴结转移原发癌中，作为抑癌基因p21代偿性过度表达;而在有淋巴结转移后p21表达减少、突变或缺失。p21在前列腺癌及其他肿瘤组织中的表达不尽相同。另外，p21蛋白阳性表达与前列腺癌分期呈负相关及易于表达于无淋巴结转移的病灶中。以上结果提示，p21基因失活以及其蛋白表达缺失在前列腺癌发生机制起着重要作用，并且p21蛋白表达可作为判断肿瘤分化程度的参考指标。有人推测可能因为某些肿瘤细胞已变成耐p21介导的抑制信号的细胞，逃避了衰老和生长停滞。另一方面，肿瘤的发生、发展非p21单一因素调节，而是正性、负性因子平衡协调的调节〔5〕。p21与肿瘤发生、发展的关系及其临床意义还有待进一步研究。研究也证实p21多态性及阳性表达与多种肿瘤的生物学行为有关，显示出p21基因治疗从根本上改变肿瘤治疗策略的前景。

参考文献

　　1 丁焕然，姜广建，马小兵，等.肺癌组织中HSG、p21和PCNA的表达及意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，2009;25(2)：14750.

　　2 李春晓，李 伟，王 薇，等.P21蛋白在不同级别宫颈组织中的表达及其与高危HPV感染相关性的研究〔J〕.中国组织化学与细胞化学杂志，2009;18(1)：448.

　　3 于 江，俸 姗，黄 健，等.p21和p27基因多态性与妇科肿瘤的相关性研究〔J〕.山东医药，2008;48(33)：45.

　　4 杨力军，王 禾，袁建林，等.前列腺癌p21^CIP1/WAF1、Rb及PCNA的表达及意义〔J〕.免疫学杂志，2006;22(5)：53841.

　　5 杨力军，刘荣福.前列腺癌p21^CIP1/WAF1和PCNA的表达及相关性研究〔J〕.第四军医大学学报，2002;23(12)：11214.