嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠痛阈的影响

　　　　 作者：李鸿梅 李昆 何海涛 刘剑凯 洪敏

【摘要】 目的 探讨嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠痛阈的影响。方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组和海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。于实验1、3、5、7 d用电子压痛仪检测大鼠尾压痛阈值，2、4、6、8 d进行热甩尾实验检测大鼠抗热痛觉过敏能力。结果 与对照组相比，第1天海洛因组及海洛因补偿嘌呤核苷酸组压痛阈值有所增加，但差异不显著(P>0.05);第3天起海洛因+嘌呤核苷酸组压痛阈值明显高于海洛因组(P<0.05)。第2天起海洛因组热甩尾潜伏期延长(P<0.05);第4天起海洛因+嘌呤核苷酸组热甩尾潜伏期时间长于海洛因组(P<0.05)。结论 嘌呤核苷酸补偿能够明显增强海洛因的镇痛作用。

【关键词】 嘌呤核苷酸;海洛因;痛阈

　　【Abstract】 Objective To investigate the effects of purine nucleotides compensation on pain threshold in heroin dependent rats. Methods 50 male Wistar rats were randomly pided into control (C)， heroin (H)， heroin plus purine nucleotides (Heroin +AMP+GMP， AMP and GMA were mixed in equimolar， HAG)， heroin plus AMP (Heroin+AMP， HA) and heroin plus GMP groups (Heroin+GMP， HG). Rat′s tail pressurepain threshold was detected at 1， 3， 5 and 7 d by electric pressure pain instrument. Rat antithermopain ability was examined at 2， 4， 6， and 8 d by tail flick test. Results The pressurepain threshold on rats tail was increased in H and HAG groups from 1 d comparing to that of C group， but the difference was not significant (P>0.05); the threshold of HAG group was higher than that of H group from 3 d (P<0.05). The latency of tail flick was increased in H group from 2 d (P<0.05)， and the latency was higher in HAG group than that in H group from 6 day (P<0.05). Conclusions Purine nucletogides compensation can increase the analgesic effect of heroin in heroin dependent rats.

　　【Key words】 Purine nucleotides; Heroin; Pain threshold

　 嘌呤核苷酸是核苷酸的组成成分，分为腺嘌呤核苷酸(AMP)和鸟嘌呤核苷酸(GMP)，在体内可去磷酸化生成腺苷和鸟苷。存在于细胞间的嘌呤核苷酸及嘌呤核苷主要通过与其受体相互作用产生效应〔1〕。有研究表明腺苷A1受体激动剂在临床上作为镇痛剂应用〔2〕，能够明显减轻病理性疼痛〔3〕。Lao等〔4〕也发现腺苷能够激活A1受体而抑制疼痛反应。腺苷受体和阿片受体在生理和病理状态下均有密切的联系〔5〕。海洛因是典型的阿片受体激动剂，作用于中枢神经系统可产生明显的镇痛、镇静作用，可抑制病人因紧张、烦躁、焦虑等精神因素引起的痛觉过敏及躯体不适症状，但会引起躯体依赖和精神依赖，撤药后有严重的不适症状及对药物强烈的渴求。本实验室前期研究发现，长期应用吗啡、海洛因等阿片类物质可引起嘌呤核苷酸分解过度 〔6～9〕，表明在阿片依赖的大鼠脑内可能存在嘌呤核苷酸匮乏，并且嘌呤核苷酸能够增强吗啡依赖大鼠的痛阈〔10〕。因此，本实验在前期研究结果的基础上，重点研究嘌呤核苷酸对海洛因镇痛效应的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料和仪器 雄性Wistar大鼠，体重(200±20)g，吉林大学医学实验动物中心提供(实验动物生产许可证号:20030001) 。海洛因(纯度为99% )由吉林省公安厅提供，临用时用灭菌三蒸水溶解。一磷酸腺苷(AMP)，批号：0634 和一磷酸鸟苷(GMP)，批号:0366为Amersco 产品。YLS3E电子压痛仪购自安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司。

　　1.2 动物分组及处理 50只大鼠随机分为5组，每组10只，普通饲养，使其适应环境3 d后进行实验。分组如下:①对照组(C组):每日两次腹腔注射与海洛因组给药体积相同的生理盐水。②海洛因组(H组):按本实验室前期制作模型的方法加以改进，建立海洛因依赖大鼠模型：第1～7天每日早晚2次腹腔注射海洛因，日剂量分别对应为0.5，0.75，1.25，2.0，3.0，4.25，5.75 mg/kg，第8天注射1次5.75 mg/kg。③海洛因+AMP+GMP组(HAG组):海洛因给药同H组，并且每日2次腹腔注射等剂量AMP+GMP，剂量为7.5 mg/kg。④海洛因+AMP组(HA组)：海洛因给药同H组，并且每日2次腹腔注射剂量为7.5 mg/kg的AMP。⑤海洛因+GMP组(HG组)：海洛因给药同H组，并且每日2次腹腔注射GMP 7.5 mg/kg。

　　1.3 嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠痛阈的影响

　　1.3.1 压痛实验 应用YLS3E电子压痛仪测定大鼠的痛阈。将大鼠装入固定筒内，使动物处于舒适又起固定作用的状态，用扁型压头对大鼠尾施压，当动物因疼痛出现鸣叫或挣扎时显示的压力值即为此动物的痛阈值。实验开始前测定基础痛阈，于实验的第1天开始每隔一日测定痛阈，在每日早上给药后3 h进行压痛实验。

　　1.3.2 热甩尾实验 从给药第2天起每隔一日于早上给药后30 min进行热甩尾实验。将大鼠尾巴垂直放入52℃热水中，记录从大鼠尾巴入水到甩出水面的时间，以此评价大鼠对热敏感的潜伏期。

　　1.4 统计学分析 结果采用SPSS11.0统计软件对实验数据进行分析，以x±s表示，并采用t检验。

　　2 结 果

　　2.1 压痛实验 与对照组测量的基础压痛值相比，给海洛因及嘌呤核苷酸第1天即出现压痛阈值增高，但差异不显著(P>0.05)。从第3天起，给予海洛因期间所测得的痛阈值均高于对照组(P<0.05)，并随给要次数的增加，压痛阈值逐渐增高。补偿嘌呤核苷酸的三组第3天的压痛阈值比海洛因给药组高(P<0.05)，随给要次数的增加压痛阈值逐渐增高。HAG，HA和HG组间压痛阈值无显著性差异(P>0.05)。见表1。

　　2.2 热甩尾实验 各组大鼠热甩尾潜伏期在第1天内无明显差异(P>0.05)，海洛因组及嘌呤核苷酸补偿组大鼠热甩尾潜伏期于给药第2天即明显长于对照组(P<0.05)，HAG，HA和HG组在给药第2天热甩尾潜伏期与海洛因组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。但从给药的第4天开始，大鼠热甩尾潜伏期明显比海洛因组长(P<0.05)，见表2。表1 五组大鼠压痛阈值比较与第1天比较：1)P<0.05;与第3天比较：2)P<0.05;与第5天比较：3)P<0.05;与海洛因组比较：4)P<0.05表2 五组大鼠热甩尾潜伏期比较与对照组比较：1)P<0.05;与海洛因组比较：2)P<0.05

　　3 讨 论

　　大量研究表明阿片类发挥其镇痛效果的原因之一是它能促进内源性腺苷的释放，正常情况下给与吗啡可导致腺苷释放，Cahill等〔11〕观察到μ受体激动剂可诱导腺苷释放;Zhang等〔12〕证实腺苷A1受体拮抗剂DPCPX 能够减轻阿片的镇痛作用;Delander等〔13〕在热疼痛测试中发现腺苷受体拮抗剂茶碱能对抗阿片的镇痛作用。Hwang等〔14〕也发现鞘内注射吗啡和腺苷受体激动剂在大鼠异常性疼痛实验中产生正协同效应。可见阿片和腺苷间存在密切的关系。

　　本研究发现海洛因与AMP及GMP(嘌呤核苷酸的组成成分)同时给药能够明显提高大鼠的机械痛阈和抗热痛觉过敏，延长疼痛反应的潜伏期，表明AMP和GMP能够增强海洛因的镇痛效应。本实验的结果表明，嘌呤核苷酸能够增强海洛因对成年雄性大鼠的镇痛效应。由此推测，嘌呤核苷酸也可能增强海洛因对老年大鼠的镇痛效应，此方面的研究意义重大。

参考文献

　　1 Pines A，Bivi N，Vascotto C，et al.Nucleotide receptors stimulation by extracellular ATP controls Hsp90 expression through APE1 /Ref1 in thyroid cancer cells：a novel tumorigenic pathway〔J〕.J Cell Physiol，2006;209(1)：4455.

　　2 Wu WP，Hao JX，Halldner L，et al.Increased nociceptive response in mice lacking the adenosine A1 receptor〔J〕.Pain，2005;113(3)：395404.

　　3 Doak GJ，Sawynok J.Complex role of peripheral adenosine in the genesis of the response to subcutaneous formalin in the rat〔J〕.Eur J Pharmacol，1995;281(3):3118.

　　4 Lao LJ，Kumamoto E，Luo C，et al.Adenosine inhibits excitatory transmission to substantia gelatinosa neurons of the adult rat spinal cord through the activation of presynaptic A1 adenosine receptor〔J〕.Pain，2001;94(3)：31524.

　　5 Peart JN，Gross GJ.Crosstalk between adenosine and opioid receptors〔J〕. Drug News Perspect，2005;18(4)：23742.

　　6 Liu C，Liu JK，Kan MJ，et al.Morphine enhances purine nucleotide catabolism in vivo and in vitro〔J〕.Acta Pharmacol Sin，2007;28(8)：110515.

　　7 Yang YD，Zhang JZ，Sun C，et al.Heroin affects purine nucleotides catabolism in rats in vivo〔J〕.Life Sci，2006;78(13)：14138.

　　8 阚慕洁，洪 敏，周 宏，等.吗啡对大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的促进作用及其可能的作用机制〔J〕.中国药理学通报，2004;20(3):3113.

　　9 付海英，迟秀梅，张纪周，等.海洛因对大鼠肾脏功能及核苷酸与氨基酸代谢相关酶活性的影响〔J〕.中国药理学通报，2007;23(3):3836.

　　10 孙 婷，崔佳乐，何海涛，等.嘌呤核苷酸对吗啡依赖大鼠痛阈及急性戒断症状的影响〔J〕.中国药物依赖性杂志，2007;16(6):4279.

　　11 Cahill CM，White TD，Sawynok J.Spinal opioid receptors and adenosine release：neurochemical and behavioral characterization of opioid subtypes〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，1995;275(1)：8493.

　　12 Zhang Y，Conkin DR，Li X，et al.Intrathecal morphine reduces allodynia after peripheral nerve injury in rats via activation of a spinal A1 adenosine receptor〔J〕.Anesthesiology，2005;102(2)：41620.

　　13 Delander GE，Hopkins CJ.Spinal adenosine modulates descending antinociceptive pathways stimulated by morphine〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，1986;239(1)：8893.

　　14 Hwang JH，Hwang GS，Cho SK，et al.Morphine can enhance the antiallodynic effect of intrathecal RP IA in rats with nerve ligation injury〔J〕. Anesth Analg，2005;100(2)：4618.