关于肺癌患者血浆DNA p53基因突变的检测

作者：吕韶敏，刘娟，刘璐，王春秀

【关键词】 突变
【关键词】 肺癌；血浆DNA；p53基因；突变
　　1临床资料
　　200207/200412经病理组织学确诊为肺癌患者18(男13，女5)例，年龄28～70（平均49）岁. 其中非小细胞肺癌10例，小细胞肺癌8例，阳性对照为正常胃粘膜组织DNA，阴性对照为健康献血员新鲜血浆. 采用DNA提取试剂盒，引物据Genbank检索结果设计，PCR使用DNA扩增试剂盒和智能型热循环仪，100 bp DNA梯度以及琼脂糖，产物采用全自动DNA测序仪进行测序. 患者清晨空腹时采集静脉血提取DNA. DNA提取方法参照试剂盒说明，PCR重复循环35次，在 302 nm的紫外灯下观察结果，对于扩增效果较差，不能满足DHPLC分析要求的标本采用二次PCR方法扩增. 采用DHPLC WAVETMDNA片断分析系统，检测靶序列突变，色谱柱为其DNASep分析柱，检测器为紫外分光光度计（波长260 nm）. DNA测序样品为PCR扩增产物，同时提供上游引物序列做DNA，PCR产物直接测序分析. 在18例肺癌患者血浆DNA全部可扩增出目的片段，而健康献血员的血浆中无一例扩增出目的片段. 在18例标本中有5例外显子7发生突变，突变率为27.8%. 其中小细胞肺癌2例，非小细胞肺癌3例，测序结果证实了DHPLC检测突变的结果.
　　2讨论
　　近年来肿瘤预防和早期诊断越来越受到重视，其中基因突变是研究热点，而对p53基因突变研究的最为全面和透彻，p53基因在恶性肿瘤中的突变率较高. 研究发现多数肿瘤患者血浆循环核酸水平较正常人明显升高，提示其在肿瘤的早期诊断和预后判断等方面可能有重要作用［1］. 因此检测血浆DNA对肿瘤的诊断、治疗和预后评估可能有重要价值. 我们对18例肺癌患者的血浆核酸p53基因有高突变的外显子7，采用DHPLC进行突变检测，结果发现有5/18例突变，阳性率为27.8%.小细胞肺癌有2/8例突变、非小细胞肺癌有3/10例突变，对结果进行测序分析发现该5例均有点突变，证明了此方法是可行的. 由于血浆中循环核酸含量极低，成为研究的首要障碍，我们曾尝试此方法成功的检测了乳腺癌患者血浆中DNA p53基因突变［2］，现又采用此方法对肺癌患者血浆循环核酸p53基因突变率较高的外显子7进行突变检测，结果较满意，我们认为该方法可以用于研究血浆核酸.
　　【参考文献】
　　［1］ 汪海丹，任军，吕韶敏，等. 变性高效液相色谱技术检测恶性肿瘤患者血浆DNA p53突变［J］. 第四军医大学学报，2002，23(9):827-830.
　　［2］ 吕韶敏，汪海丹，斯晓明，等. 乳腺癌血浆循环核酸p53基因突变的意义［J］. 第四军医大学学报，2002，23(9):835-837.