作者：沙建慧， 朱洪鸣 ，刘英华 ，姚萍 ，梁平 ，刘志洋，李云义
【关键词】 血小板聚集
【Abstract】AIM： To investigate the changes of platelet adhesiveness (Padt)， platelet aggregation (Pagt) and hemorheology following simulated pushpull maneuver in rats. METHODS： The rats were pided into control group， acceleration group and pushpull maneuver group. Placed in an animal centrifuge with body position reversing control system， the rats were exposed to +5 Gz 30 s →-5 Gz 3 s→+10 Gz 20 s in the pushpull maneuver group， +5 Gz 35 s→+10 Gz 20 s in the acceleration group respectively for 4 times at 5 min interval and in the control group the rats were placed in the same way for the same time but not exposed to ±Gz .The changes of PadT， PAgT and hemorheology were observed after repeated Gz exposures. RESULTS： Compared with the acceleration group， the PAdT and PAgT increased significantly in the simulated pushpull maneuver group ( P&<0.05; P&<0.01). Theηb，ηrd and erythrocyte accumulation index (EAI) also increased ( P&<0.05). There were not significant differences in the abovementioned indexes between the control group and the acceleration group. CONCLUSION： The results suggest that repeated pushpull maneuver exposures 4 times can lead to the increase of PAdT， PAgT，ηb，ηrd and EAI.
【Keywords】acceleration；platelet adhesiveness; platelet aggregation; hemorheology; pushpull maneuver; pushpull effect
【摘要】 目的: 探讨模拟推拉动作后，大鼠血小板计数（PLT）、粘附（PAdT）、聚集功能（PAgT）和血液流变学的变化.方法: 将大鼠分为对照组、单纯加速度组和推拉动作组.利用动物离心机和体位翻转控制装置，推拉动作组暴露+5 Gz 30 s后， -5 Gz暴露3 s， +10 Gz暴露 20 s.单纯加速度组进行+5 Gz暴露 35 s后，+10 Gz暴露 20 s.共作用4次，两次之间间歇5 min.对照组只进行同样时间、同样方法的固定，但不受±Gz作用.观察模拟推拉动作后，PLT， PAdT，PAgT和血液流变学的变化.结果:推拉动作组与单纯加速度组相比，PAdT和PAgT都明显增加(P&<005，P&<001)；全血粘度（ηb）、全血还原粘度（ηrd）和红细胞聚集指数（EAI）亦增加（P&<005）.单纯加速度组与对照组相比，各项指标差异无显著性.结论: 推拉动作 4次后，可引起PLT， PAdT和PAgT显著性增加，ηb，ηrd和EAI亦增加.
【关键词】 加速度；血小板粘附；血小板聚集；血液流变学；推拉动作；推拉效应
0引言
在小于+1 Gz的加速度后，迅速转入大于+1 Gz的飞行动作，叫做推拉动作.推拉动作使+Gz耐力下降的效应称为推拉效应［１］.由于+Gz耐力的下降，推拉动作时，在较低的G值情况下，即可发生GLOC，从而威胁飞行安全.特技飞行员在空中于±Gz之间的加速度环境中频繁暴露，最大可达+11 Gz和-8 Gz，±Gz的交替出现，时常存在推拉效应.曾有报道［２－４］，+ Gz重复暴露后，脑组织的超微结构有不同程度的损伤，全血粘度(ηb)增加可加重脑损伤，但在推拉动作后，血小板粘附(PAdT)、聚集(PAgT)功能及血液流变学是否有改变尚未见报道.我们的目的是观察在重复模拟推拉动作情况下，PAdT， PAgT和血流变的变化，为进一步探讨推拉效应的机制提供一定的理论依据.
1材料和方法
1.1材料
1.1.1动物雄性SD大鼠24只，由白求恩医科大学动物部提供，体质量(250～320) g，适应环境1 wk后，随机分为3组，即对照组、单纯加速度组和推拉动作组，每组8只.
1.1.2动物离心机与体位翻转遥控系统离心机（自制）转臂半径为2.45 m，由变频器（IHF1.5 K，日本三垦公司）进行程序控制，可产生G值范围为+（1～15）Gz，增长率为0.5～1.5 G・S-1，加速度曲线为梯形.离心机转臂一端的动物固定板连有体位翻转控制装置（自制），通过使用遥控手柄，使动物固定板在离心机旋转的同时，可以做90°，180°的前翻、后翻，翻转时间可调.
1.2方法
1.2.1+Gz暴露及推拉动作模拟用特制的两个固定板、固定服将2只大鼠俯卧固定，同时置于动物离心机两端的转臂上，头朝向离心机轴心，一侧为单纯加速度组，另一侧为推拉动作组.按
参考文献
［５］，推拉动作组暴露+5 Gz 30 s后，在2 s内前翻180°，呈仰卧位，头朝向离心机远端，行-5 Gz暴露3 s，随后后翻180度，恢复+Gz位置，并同时上升至+10 Gz，峰值持续时间为20 s，G增长率为1 G/S.加速度组只进行+5 Gz 35 s后，+10 Gz 20 s，共作用4次，每2次之间间歇5 min.对照组大鼠只进行同样时间、同样方法的固定，但不受±Gz作用.1.2.2血小板计数(PLT)、(PAdT)及PAgT的测定将各组动物末次处理后，立即乙醚麻醉，腹主动脉取血，38 g・L-1枸橼酸钠抗凝［血:抗凝剂(VV)=91］，尿素法测PLT.用玻璃珠法通过血小板粘附仪（LBYF5，北京第二生化仪器厂），测定血液在粘附仪上旋转15 min前后的血小板数，PAdT=［（粘附前的血小板数－粘附后的血小板数）/粘附前血小板数］×100%.用比浊法以ADP 20 μmol为诱导剂，通过血小板聚集仪（BS，北京生化仪器厂）测定PAgT.
1.2.3血液流变学检测取微量肝素抗凝血于红细胞压积管中，2264 g离心5 min，测定红细胞压积（HCT）；利用毛细管粘度计（重庆天海公司），测定血浆粘度（ηρ）；比浊法测量血浆纤维蛋白原含量（Fib）.全血粘度（ηb）、全血还原粘度（ηrd）、红细胞聚集指数（EAI）、红细胞刚性指数（TK）和屈服应力（Fc）指标用肝素抗凝血，通过MVS2010全自动血液流变分析仪（重庆天海公司）进行测定.
统计学处理：数据以x±s表示，采用方差分析及多重比较.
2结果
2.1PLT，PAdT和PAgT的变化单纯加速度组重复暴露+5 Gz 35 s， +10 Gz 20 s 4次后，与对照组相比，PLT，PAdT和PAgT变化不明显.而推拉动作组在模拟推拉动作4次后，PAdT明显高于对照组和单纯加速度组（依次为q=3.97，P&<0.05；q=3.88，P&<0.05）， PAgT也明显高于对照组和单纯加速度组（依次为q=5.45，P&<0.01；q=4.58， P&<0.01. Tab 1）.表明在模拟推拉动作后，血小板的粘附、聚集功能增强.
表1模拟推拉动作后，大鼠PLT， PAdT和PAgT的变化（略）
Tab 1Changes of PLT， PAdT and PAgT in rats exposured by pushpull maneuver for 4 times （略）
2.2血液流变学指标的变化推拉动作组ηb在各切变率时，较对照组和单纯加速度组有不同程度的升高，且在切变率为30 s-1和3 s-1差异显著.当切变率为30s-1时，与对照组相比，q=3.54，P&<0.05；当切变率为3s-1时，与对照组和单纯加速度组相比，分别为q=4.54，P&<0.01；q=3.75，P&<0.05.推拉动作组的ηrd与对照组和单纯加速度组相比有显著性差异，分别为q=4.31，P&<0.05；q=3.05，P&<0.05.推拉动作组的EAI与对照组和单纯加速度组相比，差异有显著性，分别为q=4.70，P&<0.01；q=3.73，P&<0.05.推拉动作组与对照组相比，TK增加，q=4.38，P&<0.05.而单纯加速度组的各项指标与对照组相比，差异均无显著性意义.表明做推拉动作后，全血粘度增加，尤以红细胞聚集性增加明显（Tab 2）. 3讨论
20世纪90年代以来，发现一些致死性A级飞行事故与推拉效应有关［6－8］，由于推拉效应严重威胁飞行安全，从而使推拉效应的研究成为加速度领域的新热点.在研究过程中，模拟推拉动作是实验的关键步骤.文献中出现的推拉动作模拟途径有载人离心机、飞机、旋转床等，载人离心机目前只有少数国家拥有；飞行实验不易控制；旋转床仅能模拟(+1～－1) Gz之间的加速度，无法测出 Gz后的加速度耐力.根据 Gz时，下体血液向上体转移的生理效应，目前较常用的人体模拟推拉动作方法有头位倾斜、下体正压和下体水浸泡法［９］，但这些方法实施后，与 Gz产生的生理效应仍存在差异，例如下体正压法中，具体下体正压值对应的 Gz数值尚不清楚［10，11］.为了补充人体的研究，使推拉动作更加接近实际情况，本实验采用动物体位翻转遥控系统来模拟推拉动作，其优点是：实验对象体位的方向性准确，易调整，在离心的同时，-Gz、+Gz的数值准确，-Gz与+Gz之间易转换.Sheriff等［５］通过头位倾斜方法观察到，（350～450）g大鼠在+5 Gz暴露过程中，当暴露-5 Gz 2 S后，立即暴露+10 Gz，在+10 Gz暴露第4至第8秒期间，颈动脉压与没有预先-Gz作用的大鼠相比，下降15 mmHg，表明大鼠在上述实验参数中出现了推拉效应.而且，在较小的-Gz时，推拉效应的高低与-Gz的作用时间无关.本实验中推拉动作的G值参数主要是根据上述文献报道而定.由于大鼠身体小，Gz耐力高，故采用了相对高的Gz水平.
表2模拟推拉动作后，大鼠血液流变学指标的变化（略）
Tab 2Hemorheological changes of rats exposured by pushpull maneuver for 4 times（略）
实验中观察到，当以+5 Gz 35 s， +10 Gz 20 s 4次后，PLT， PAdT， PAgT和血液流变各项指标都无明显变化，表明在高G值持续时间较短的情况下，对血小板功能和血流变的影响不大.当预先-5 Gz暴露，再+10 Gz 20 s作用4次后，PAdT和PAgT都增加，其原因可能是：① 由于加速度在短时间内要经过+Gz→-Gz→+Gz的方向性改变，使血液也有向下肢→头向→下肢的惯性移位，由于短时间内血液惯性移位的方向性快速变化，一方面使部分血管内皮细胞的完整性受到损伤，内皮下的主要成分胶原和弹性组织中的微纤维促使并参与了血小板的粘附过程，使PAdT增加；另一方面，易形成涡流，促进血小板的粘附、聚集；② 血管内皮损伤处，切变应力的增加，也是促进PAdT增加的主要因素；③ 粘附于内皮下组织的血小板发生粘性变形、释放反应，促进了血小板的聚集过程.红细胞的聚集性对低切变率时血液粘度起决定性作用.本实验中观察到，模拟推拉动作后，EAI明显增加，低切变率下全血粘度、全血还原粘度升高. PAdT， PAgT和EAI增加是导致血液呈高粘度状态的主要因素.由于血液粘度升高，影响了血流动力学，使局部尤其是脑组织血液灌流不足，出现微循环障碍，导致脑缺血、缺氧.
从本实验结果推测，模拟推拉动作后，血小板粘附、聚集和血液流变学特性的改变可能参与了推拉效应.
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