【关键词】 宫颈肿瘤
关键词: CD44;宫颈肿瘤;免疫组织化学
摘 要:目的 探讨CD44v6在宫颈癌前病变及宫颈癌中的表达及其临床意义. 方法 应用S-P免疫组化法观察宫颈癌60例、正常宫颈上皮组织10例和宫颈上皮内瘤样病变（CIN）12例中CD44v6的表达. 结果 正常宫颈上皮组织中CD44V6阳性率为20%，CIN中CD44v6阳性率为42%，而宫颈癌组织中CD44v6阳性率为68%.在宫颈癌中，随病理分级的升高，CD44v6表达增加，其Ⅰ，Ⅱ及Ⅲ级CD44v6阳性率分别为43%，69%和85%（P&<0.05）.CD44v6表达在有淋巴结转移组中（91%）明显高于无淋巴结转移组（52%，P&<0.05）.临床分期晚CD44v6表达高，Ⅰ，Ⅱ期和Ⅲ，Ⅳ期CD44v6阳性率分别为63%和80%，但无统计学意义（P&>0.05）. 结论 随着宫颈癌的发生、发展，CD44v6表达率逐渐增加，CD44v6可作为判断宫颈癌恶性程度、转移及预后的重要指标.
Keywords:CD44;cervix neoplasms;immunohistochemistry
Abstract:AIM To Study the clinical significance of CD44v6expression in cervical cancer.METHODS Specimens of60cervical cancer，10normal cervical epithelia and12cervical intraepithelial neoplasia（CIN）were examined for CD44v6expression by immunohistochemical staining.RESULTS Positive staining was seen in20%of normal cervical epithe-lia，42%of CIN，68%of cervical cancer.In cervical cancer，the frequency of abnormal CD44v6expression was correlated
to pathologic grade and lymph node metastasis（P&<0.05）.The higher the pathologic grade of tumor，the more the ex-pression of CD44v6.Positive CD44v6expression was signifi-cantly more frequent in the advanced stage of cervical cancer with lymph node metastasis.CONCLUSION Decreased ex-pression of CD44v6is a useful parameter of cervical malig-nancy.
0 引言
CD44是最主要的细胞粘附分子之一，因其介导着肿瘤细胞与宿主细胞和细胞外基质的相互作用，而成为研究肿瘤转移及预后的热点［1，2］ .其中以含有外显子v6的CD44变异体（CD44v6）与多种肿瘤的生长、侵袭、转移和预后有关［1］ .我们应用抗CD44v6抗体通过免疫组化法研究在宫颈癌及其癌前病变中的表达及其临床意义.
1 材料和方法
1.1 材料 我院1998/1999经手术切除的Ⅰ，Ⅱ期宫颈癌标本40例，不能手术的Ⅲ，Ⅳ期宫颈癌活检标本20例.年龄29～70（平均49）岁.病理分级Ⅰ级14例，Ⅱ级26例，Ⅲ级20例.术后证实有淋巴结转移11例，无淋巴结转移29例.并取同期正常宫颈上皮组织10例，宫颈上皮内瘤样病变（CIN）12例.所有患者取标本前均未经过放、化疗或其他特殊治疗.CD44v6mAb为Sigma公司产品，S-P试剂盒为Zymed公司生产.
1.2 方法 石蜡切片经脱蜡水化后，微波抗原修复，常规S-P法，DAB显色苏木素复染.设阳性对照，用PBS替代第Ⅰ抗体作阴性对照.染色阳性信号呈棕黄色，根据细胞显示有无和强弱分为:①阴性（-）:阳性细胞数小于等于25%，染色淡;②弱阳性（+）:阳性细胞数在26%～50%之间;③中阳性（）:阳性细胞数在51%～75%之间;④强阳性（）:阳性细胞数大于76%，染色较强.
统计学处理:数据采用χ2 检验.
2 结果
2.1 CD44v6在宫颈癌组织中的表达 CD44v6在正常宫颈上皮组织、CIN及宫颈癌组织（Fig1）中的阳性表达率分别为20%，42%和68%（Tab1），即随着从正常宫颈组织→CIN→宫颈癌，CD44v6的表达阳性率呈递增趋势，其差异有显著性（P&<0.01）.
图1 CD44v6在宫颈癌中的表达 略
表1 CD44v6在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中的表达 略
2.2 CD44V6表达与宫颈癌病理及临床特征的关系 本组高、中分化的宫颈癌CD44v6表达明显低于低分化（P&<0.05）;无淋巴结转移者CD44v6表达明显低于有淋巴结转移者（P&<0.05，Tab2）;CD44V6的表达与临床分期无关（P&>0.05）. 3 讨论
CD44基因蛋白是一种细胞表面跨膜糖蛋白，能与透明质酸、层粘蛋白等基质分子结合，参与细胞-细胞、细胞-基质的粘连.人CD44基因位于11号染色体短臂上，全长50kb，它至少含有19个外显子.CD44基因在转录表达时有2种类型:即标准型（CD44s）和变异型（CD44v）.其中以含有外显子v6的CD44变异体（CD44v6）与肿瘤的关系密切，近年来研究发现其在许多人实体肿瘤中表达，并与肿瘤转 移有关［3-5］ .最早发现CD44v6分子与肿瘤生长和转移相关的是Gunthert实验室.他们报道在大鼠中找到这种新的变构体，它只表达于发生转移或具有转移能力的细胞中，而在非转移的细胞株上不表达.把相应基因导入不具有转移能力的癌细胞，可使它们获得转移能力.而且，针对这种变构体的单抗有抑制转移的效果.这一发现引起了普遍关注，并很快在人的乳腺癌、结肠癌、胃癌及肝癌等细胞上找到了结构高度同源的CD44v6变构体，并发现其与肿瘤转移密切相关.有研究发现，随着由慢性浅表性胃炎→肠化→不典型增生→癌变的发展，CD44v6的表达逐渐升高.说明CD44v6介入了肿瘤的进展过程.本研究结果显示，CD44v6表达为正常宫颈组织（20%）0.05）.说明在宫颈癌中肿瘤分化差、有淋巴结转移者CD44v6表达愈高，这一结果与有关文献报告相符［7］ .
表2 60例宫颈癌病理及临床特征与CD44v6表达的关系 略
StageⅠ，Ⅱ 4015 25 62 StageⅢ，Ⅳ 20 4 16 80 由于CD44v6与肿瘤转移的密切相关，人们对其引起肿瘤转移的机制进行了研究，但其具体作用机制尚不十分清楚.目前认为，CD44v6破坏了标准型CD44在细胞间及细胞与基质间的相互作用.由于CD44v6等参与淋巴细胞活化、增殖及再循环，表达CD44v6的肿瘤细胞离开原发灶进入外周淋巴器官的过程同淋巴细胞循环的运行过程相似.因此，淋巴细胞活化迁移与肿瘤转移的共同动力学特点及CD44v6在二者中的共同作用，提示我们研究CD44V6在淋巴细胞活化、迁移中的作用可为CD44v6在肿瘤转移中的作用机制的研究奠定基础.CD44v6基因的异常表达早于k-ras基因和p53基因的突变.专一表达于正在增殖的或正在分化的细胞，而非增殖、分化的细胞中却不表达，这一事实使人们坚信CD44v6与无限分化、恶性增殖的肿瘤细胞的联系.我们通过研究认为，CD44v6的表达与宫颈癌的分化程度、淋巴结转移及预后密切相关，可以作为判定宫颈癌恶性程度及预后的重要指标之一.此外，在许多实体瘤CD44v6表达异常的同时，伴有血清可溶性CD44v6水平的升高，血清CD44v6浓度与肿瘤转移及荷瘤状态有关.但血清中可溶性CD44v6是否可作为一种新的肿瘤标志物，尚需进一步研究.
参考文献
［1］Li XY，Hu JL.The expression and Clinical significance of CD44S and CD44v6in gastric cancer ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1998;19（5）:534.
［2］Cao WD，Zhang X，Liu WP，Liu F，Liu XZ，Wang ZX.Ex-pression of CD44in meningiomas glioblastomas multiform and brain metastases ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（10）:1292-1294.
［3］Morris SF，O’Hanlon DM，McLaughlin R，McHale T，Connol-ly GE，Given HF.The prognostic significance of CD44s and CD44v6express in stage two breast carcinoma:An immunohis-tochemical ［J］.Eur J Surg Oncol，2001;27（6）:527-531.
［4］Wimmenauer S，Steiert A，Wolff-Vorbeck G，Xing B，Baier PK，Ruckauer KD，Kirste G，von Kleist S.Influence of cy-tokines on the expression of fas ligand CD44splice variants in colon carcinoma cells ［J］.Tumour Biol，1999;20（6）:294-303.
［5］Wang JH，Chu XY，Cheng LB，Zhu XJ，Long YL.Studies on the expressions of CD44v6and C-erb B-2gene product in hu-man non-Small cell Lung Cancer ［J］.Zhongliu Fangzhi Yanju（Cancer Res Prev Treat），2000;27（3）:191-193.
［6］Darai E，Walker-Combrouze F，Benifla JL.E-cadherin and CD44expression in cervical intraepithelial neoplasia:Compari-son between HIV-positive and HIV-negative women and corre-lation with HPV status ［J］.Gynecol Oncol，2000;76（1）:56-62.
［7］Kzinz C，Tempfer C，Kohlberger P，Janisch S，Koelbl H，Gitsch G，Breitenecker G.Immunohistochemical detection of adhesion molecule CD44splice variants in lymph node metas-tases of cervical cancer ［J］.Int J Cancer，1996;69（3）:170-173.