关键词: 非小细胞肺癌;端粒酶;基因诊断
1 材料和方法
1.1 材料 组织标本由西安交通大学第二医院胸外科提供.每例标本分两份，一份进行病理分析，一份液氮冷冻进行端粒酶检测.非小细胞肺癌组织标本47例，不典型增生组织28例以及正常组织标本20例.并且对癌症患者随访30mo.
1.2 方法［1，2］ 冻存组织用冰冻低温切片机将活检组织标本切成15μm厚的切片，将10切片于冰裂解液中裂解30min，于4℃下12000×g离心30min，提取上清液并测定其蛋白浓度（标准浓度1～50g・L-1 ）.取2μL提取液与PCR反应液中作用引物反应30min后，进行PCR扩增，扩增程序为:94℃10s，50℃30s，72℃90s，共进行30个循环.取5μL TRAP反应产物与20μL变性液混合，变性后，加入225μL杂交缓冲液，混匀后，取100μL加入酶标板中，然后进行以地高辛过氧化物酶为中介的ELISA反应程序.酶标仪检测终产物450nm波长A值，A&>0.25者为阳性.以Hela细胞提取液为阳性对照，阳性对照为65℃加热10min的Hela细胞提取液.所得的计数资料进行χ
2 检验.
2 结果
非小细胞肺癌组织中端粒酶阳性率为85%，不典型增生组织14%，正常组织切片的阳性率为0，癌组织与不典型增生组织和正常组织之间端粒酶活性阳性率的差异均非常显著（P&<0.01），而不典型增生组织与正常组织之间端粒酶活性阳性率差异无显著性（P&>0.05，χ2 =2.52）.Ⅰ级组织分化程度与Ⅲ级组织分化程度的癌组织中端粒酶活性检出率差异有非常显著性（P&<0.01），分化程度越低端粒酶活性的检出率越高;有淋巴转移和无淋巴转移的癌组织端酶活性检出率差异有显著性（P&<0.05）;各组织分型间和各临床分期之间端粒酶活性检出率之间差异无显著性.非小细胞肺癌组织中端粒酶阳性检出率在存活期小于等于30mo与大于30mo病例之间差异非常显著（P&<0.01）. 3 讨论
端粒（telomere）是真核生物细胞染色体末端一端DNA结构，并与染色体的复制、定位及稳定性的维持有关.端粒酶（telomerase）能够特异性地合成端粒DNA，从而维持端粒DNA保持一定的长度.现在大量研究证明端粒酶活性与肿瘤的发生以及预后相关，可用于肿瘤诊断和预后的评价［2］ .通过检测发现支气管正常上皮组织中端粒酶无活性，而不典型增生组织却存在一定的端粒酶活性，非小细胞肺癌组织中的端粒酶活性检测率最高，这一现象说明端粒酶活性的出现是非小细胞肺癌发展的早期事件，并且和非小细胞肺癌发生有关系［2］ .研究发现端粒酶活性与非小细胞肺癌肿瘤分化程度、生存期长短有一定的关系，而与肿瘤的不同的临床分期和有无淋巴转移无关.
参考文献
［1］Guo YH，Yan XJ，Meng XR，Cui DX，Hou Y，Han FC，Feng YQ，Zhang J，Zhao JR.A quantitive PCR kit used in automatic genetic amplification instrument ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（15）:1349-1351.
［2］Shibuya K，Fujisawa T，Hoshino H，Baba M，Saitoh Y，Iizasa T，Sekine Y，Suzuki M，Hiroshima K，Ohwada H.Increased telomerase activity and elevatedhTERT mRNA expression dur-ing multistage carcinogenesis of squamous cell carcinoma of the lung ［J］.Cancer，2001;92（4）:849-855.