关键词: 肺/损伤;扎鲁司特;受体，白三烯/拮抗剂和抑制剂
摘 要:目的 观察扎鲁司特（zafirlukast）对急性肺损伤的防治作用. 方法 新西兰大白兔24只，随机分为对照组（n=8），致伤组（n=8），扎鲁司特治疗组（n=8）.致伤组经颈静脉注入内毒素（LPS，1mL kg-1 ），对照组经颈静脉注入生理盐水（1ml kg-1 ），治疗组经颈静脉注入内毒素（LPS，1mL kg-1 ）前1h及30min，胃内注入扎鲁司特（20mg kg-1 ）.测定各组肺动脉压、氧分压、外周血白细胞计数、肺泡灌洗液NO浓度、肺系数（肺湿质量/体质量）及肺湿/干比，并取肺活组织行HE染色. 结果 治疗组肺动脉压及NO浓度与致伤组无显著差别（P&>0.05），氧分压较致伤组明显改善（P&<0.01），肺系数和肺湿/干比显著低于致伤组（P&<0.01），外周血白细胞高于致伤组（P&<0.01）.病理检查结果显示，治疗组肺损伤减轻. 结论 扎鲁司特对急性肺损伤有一定的防治作用.
Keywords:lung/injuries;zafirlukast;receptors，leuko-triene/antagonists&&inhibitors
Abstract:AIM To observe the preventive effect of zafir-lukast against acute lung injury.METHODS 24New-Zealand rabbits were randomly pided into three groups:Control group（n=8），injury group（n=8），and treatment group（n=8）.into rats in injury group was Endotoxin（LPS，1mL kg-1 ），normal saline（1mL kg-1 ）in control group，zafirlukast in treatment group（20mg kg
-1 ）twice before be-ing injected endotoxin（LPS，1mL kg-1 ）half an hour and one hour.Observe the arterial oxygen pressure（PaO2 ），the pulmonary arterial pressure，count of peripheral-blood leuko-cytes，NO concentration in the BALF，lung index（wet weight/body weight），lung’s wet/dry weight ratio（W/D）and had HE staining of the pathological sections were ob-served respectively.RESULTS The pulmonary arterial pressure and NO concentration in treatment group had no sig-nificant difference with that in injury group（P&>0.05），PaO2 in treatment group significantly improved（P&<0.01）.Lung index and W/D ratio in treatment group were significantly lower than those in injury group（P&<0.01），the count of pe-ripheral-blood leukocytes in treatment group was higher than that in injury group（P&<0.01）.HE staining showed that lung injury in treatment group was improved.CONCLUSION Zafirlukast has preventive effect against acute lung injury.
0 引言
成人呼吸窘迫综合征（adult respiratory distress syndrome，ARDS）发病机制错综复杂，急性肺损伤是其基础病变，迄今对其发病机制尚未完全阐明.研究表明炎症反应起关键作用，许多炎症介质如IL-8［1］ ，NF-KB［2，3］ 等参与其中.炎症介质白三烯有强烈的趋化活性，在ARDS发病中起重要作用，Amat等［4］ 报道，ARDS患者血浆中白三烯浓度明显升高.国内有关白三烯在ARDS中的作用研究报道甚少.扎鲁司特［5］ 为白三烯受体拮抗剂，能竞争性抑制白三烯活性，有效防止白三烯多肽的血管通透性增加.我们建立内毒素致兔急性肺损伤模型，观察扎鲁司特对急性肺损伤的影响.
1 材料和方法
1.1 材料 新西兰大白兔（购自第四军医大学实验动物中心），LPS O5 B55 （购于Sigma公司）.XD-30C多道生理记录仪，752C紫外可见分光光度计（均由本校病理生理教研室提供），GRESS试剂（购于北京东亚试剂公司）.
1.2 方法
1.2.1 动物模型制备 新西兰大白兔24只，体质量2～3kg，随机分为对照组（n=8），致伤组（n=8），扎鲁司特治疗组（n=8）.对照组兔颈静脉插管注入生理盐水1mL kg-1 ，致伤组兔颈静脉插管注入内毒素（LPS O
5 B55 ），配成等渗液浓度（1g L-1 ）:1mL kg-1 .治疗组兔胃内注入扎鲁司特（20mg kg-1 ），30min后再次注入扎鲁司特（20mg kg-1 ），此后30min经颈静脉注入内毒素（LPS O5 B55 ，1mL kg-1 ）.
1.2.2 检测方法 ①肺动脉压的测定:参照孙波等［6］ 方法，实验动物用250g L-1 乌拉坦（1.0g kg-1 ）耳缘静脉注入麻醉后固定于手术台，作颈正中切开，在多导生理记录仪监视下，经右颈外静脉作肺动脉插管，记录肺动脉压.②血样收集:经左颈外静脉插管，分别在对照组注入生理盐水，致伤组及治疗组注入内毒素后于0，30，60，90和120min经左颈动脉抽动脉血进行血气分析及外周血白细胞计数.③支气管肺泡灌洗:动物于130min放血活杀，取肺称全肺湿质量;取左肺称湿质量，之后经支气管注入生理盐水9mL kg-1 ，反复灌洗3次，每次冲洗3遍.灌洗液于4000r min-1 离心5min，取上清液，采用GRIESS法［7］ 测灌洗液中NO浓度.左湿肺于60℃下烘烤72h后称干质量.分别计算肺湿/干比，肺系数（肺湿质量/体质量）.取右肺做病理标本，多聚甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，观察病理变化.
统计学处理:数据用x ±s表示，组间比较采用配对t检验，P&<0.01为显著性差异.
2 结果
2.1 肺动脉压变化 致伤组内毒素注入后30min，肺动脉压明显升高，于致伤后60～120min保持在较高水平，与正常对照组差别显著（P&<0.05），治疗组肺动脉压升高较致伤组低，但仍显著高于正常对照组，与致伤组无显著差别（Tab1）.
2.2 外周血白细胞计数 致伤组外周血白细胞显著降低，与正常对照组差别显著（P&<0.01）.治疗组外周血白细胞较致伤组高，但较正常对照组低，组间存在显著差别（Tab1）.
表1 不同时间点各组肺动脉压值、外周血白细胞计数值 略
2.3 动脉氧分压 致伤组于注入内毒素30min后PaO2 明显下降，致伤后30～120min保持在较低水平，与正常对照组差别显著（P&<0.01），治疗组氧分压随时间推移而降低，但总体保持较高水平（Tab2）. 表2 不同时间点各组动脉氧分压 略
2.4 NO浓度 正常对照组NO浓度低于致伤组及治疗组，有显著差别（P&<0.01）.致伤组与治疗组无显著差别（Tab3）.
2.5 肺系数及湿/干变化 致伤组肺系数及湿/干比较对照组显著升高（P&<0.01），治疗组肺系数及湿/干比较致伤组降低，差别显著（Tab3）.
2.6 组织病理学结果 正常对照组兔肺泡结构清晰，肺泡内无渗液.致伤组肺泡壁充血、增厚、肺间质、肺泡腔及肺泡壁可见大量炎症细胞浸润.治疗组上述肺损伤及肺水肿表现明显减轻（Fig1～3）.
表3 BALF中NO浓度及肺系数，湿/干比 略
3 讨论
ARDS是由多种致病因子启动，各种炎症细胞和细胞因子参与并相互作用以促进病程发展，最终导致以肺为主要靶器官伴有多脏器损伤的炎症性疾病.
白三烯是一组具有多种作用的生物活性物质，参与炎症和变态反应.白三烯可由激活的中性粒细胞大量产生，可直接破坏血管的完整性，并有强大的中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞趋化集中作用［8］ .炎症细胞中多核白细胞（PMN）是参与机体反应的主要细胞［9］ .PMN在肺微血管内的聚集，继之与血管内皮细胞粘附，释放炎症介质（包括白三烯），损伤肺泡毛细血管膜，导致通透性肺水肿，是导致急性肺损伤的重要因素.Ishizaka等［10］ 及VanderMeer等［11］ 发现白三烯拮抗剂ONO-1078，LY-306669可减轻急性肺损伤并认为这主要是由于ONO-1078，LY-306669抑制了白三烯的作用.Antonelli等［12］ 发现ARDS患者肺泡灌洗液中白三烯浓度和中性粒细胞计数明显高于对照组，进一步证实了白三烯在ARDS发病中的地位.
图1 － 图3 略
扎鲁司特，作为白三烯受体拮抗剂，竞争性抑制白三烯活性.本实验中治疗组动物动脉血氧分压较损伤组明显改善，治疗组兔的肺系数、湿/干比降低，均与致伤组差别显著，其病理学结果显示肺水肿和肺损伤减轻，证明扎鲁司特能有效降低肺组织血管通透性，对ARDS有一定的防治作用.致伤组中NO浓度较正常对照组显著增高，显示NO在ARDS的致病过程中起重要作用.治疗组的NO浓度较正常对照组明显增高，而较损伤组无显著差别，表明扎鲁司特对ARDS的治疗作用与NO无关.致伤组中兔肺动脉压较正常对照组明显升高，扎鲁司特治疗组肺动脉压增高与致伤组无显著差别，表明扎鲁司特在ARDS的治疗中不能降低肺动脉压.致伤组动物外周血白细胞计数明显降低，提示肺内白细胞在肺内趋化聚集，治疗组外周血白细胞计数下降较致伤组显著而与正常对照组无明显差别，表明扎鲁司特对ARDS的治疗可能是通过抑制白细胞肺内趋化聚集起作用.
参考文献
［1］Gon Y，Hashimoto S，Nakayama T，Matsumoto K，Koura T，Takeshita I，Horie T.N-acetyl-L-cysteine inhibits bleomycin-induced interleukin-8secretion by bronchial epithelial cells ［J］.Respirology，2000;5（4）:309-313.
［2］Fan J，Ye RD，Malik AB.Transcriptional mechanisms of acute lung injury ［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2001;281（5）:L1037-L1050.
［3］Zhang J，Li HZ，Qi HW，Huang WJ，Cheng BF，Yan PS.Jix-ing Feisunshang Xiaoshu NF-kB Biaoda Yiyi ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mili Med Univ），2001;21（2）:190-192.
［4］Amat M，Barcons M，Mancebo J，Mateo J，Oliver A，Mayoral JF，Fontcuberta J，Vila L.Evolution of leukotriene B4，peptide leukotrienes，and interleukin-8plasma concentrations in patients at risk of acute respiratory distress syndrome and with acute res-piratory distress syndrome:Mortality prognostic study ［J］.Crit Care Med，2000;28（1）:57-62.
［5］Liao ML.Accolate ［J］.Zhonggou Xinyao Zazhi（Chin New Drug J），1999;8（2）:117-118.
［6］Sun B，Liu LW.Youxin Daoguan Ceding Dashu Feidongmaiya de Shiyan Fangfa ［J］.Zhongguo Yixue Kexueyuan Xuebao（Ac-ta Acade Med Sini），1984;6（6）:465-466.
［7］Cheng L，Zhao JH.Yiyang Huadan zai Jixing Huxi Jiongpo Zonghezheng Fabing Jizhi zhong Zuoyong de Chubu Yanjiu ［J］.Zhonghua Neike Zazhi（Chin J Intern Med），2000;39（6）:388-391.
［8］Jagels MA，Hugli TE.Neutrophil chemotactic factors promote leukocytosis ［J］.J Immunol，1992;148（4）:1119-1128.
［9］Sun GY，Mao BL.Research of adult respiratory distress syn-drome ［J］.Zhonghua Jiehe he Huxi Zazhi（Chin J Tuberc Respir Dis），1996;19（4）:196-198.
［10］Ishizaka A，Hasegawa N，Sakamaki F，Tasaka S，Nakamura H，Kishikawa K，Yamada A，Obata T，Sayama K，Urano T，Kanazawa M ［J］.Am J Respir Crit Care Med，1994;15（4）:1325-1331.
［11］VanderMeer TJ，Menconi MJ，O’Sullivan BP，Larkin VA，Wang H，Sofia M，Fink MP.Acute lung injury in endotoxemic pigs:Role of leukotriene B4［J］.J Appl Physiol，1995;78（3）:1121-1131.
［12］Antonelli M，Lenti L，Bufi M，De BR，Vivino G，Conti G，Pelain P，Zicari G，Gasparetto A.Differential evaluation of bronchoalvedar lavage cells and leukotrienes in unilateral acute lung injury and ARDS patients ［J］.Intensive Care Med，1989;15（7）:439-445.