【关键词】 免疫组化染色
关键词: 玻璃体视网膜病变，增生性;内皮素;α-平滑肌肌动蛋白;免疫组化染色
摘 要:目的 讨论内皮素（ET）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）增生膜中的表达. 方法 手术切取14例PVR患者的增生膜，以ET-1抗体和α-SMA抗体用免疫组织化学方法检测ET-1和α-SMA在增生膜的分布. 结果 ET-1分布于增生膜中的部分细胞质和核中，以及细胞外基质中，并在膜表面染色加深，膜边缘的细胞核呈深染的梭形和长条形.而α-SMA表达在膜的中央和边缘部，主要表达在细胞中，阳性细胞与膜的方向平行. 结论 ET和α-SMA在增生膜细胞中表达，增生膜细胞可能合成并分泌内皮素至细胞外基质中，作用于α-SMA表达的细胞使其收缩.
Keywords:vitreoretinopathy，proliferative;endotheline;al-pha smooth muscle actin;immunohistochemical stainings
Abstract:AIM To discuss the expression of endotheline and alpha smooth muscle actin in periretinal membrane of prolif-erative vitreoretinopathy（PVR）.METHODS 14periretinal membranes（PCM）obtained from14cases of PVR with retinal detachment（RD）undergoing vitretomy were used to examine the expression of endotheline-1（ET-1）andα-SMA by immunohistochemical detection.RESULTS The reac-tions of ET-1were observed in the cells and extracellular ma-trix（ECM）in the various grades of the PRMs and darken at the rim of the PCM，in which some of cytonucleus became the shape of fusiform and/or slimer and longer.Whileα-SMA was expressed in the centre and verge of various grades the PCM，and the positive cells were parallel to the contrac-tive orientation of the PCM.CONCLUSION Both ET-1andα-SMA could be expressed in the PCM，the cells in the PRMs may express ET and secret it to ECM and deliver ef-fects on the contractive cells that expressα-SMA.
0 引言
增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreo-retinopathy，PVR）是眼内过度修复过程，是视网膜脱离和手术失败的主要原因.内皮素（endotheline，ET）参与机体血管生理和细胞增殖活动的调节［1，2］ ，促进修复细胞分泌细胞外基质和肌动蛋白并引起其收缩［3］ .而α-平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin，α-SMA）是细胞移行和具有收缩功能的基础.司艳芳等［4］ 的研究提示随着增生膜的发展α-SMA表达增强.但ET与α-SMA在PVR的增生膜中相互作用却未见报道.本实验讨论ET和α-SMA在其收缩中的相互关系.
1 材料和方法
1.1 材料 2000-07/2001-11本院眼科确诊为孔源性视网膜脱离（RRD）伴PVR患者14例，年龄4～63岁，病程2mo～2a.PVR分级标准参照1983年美国视网膜学会分级方法，分级为C3～D3.以上患眼行玻璃体切割术时取视网膜表面增生膜，其中下膜5例，前膜9例.以上组织用40g L-1 多聚甲醛固定30min，4℃.经脱水、透明制成蜡块.最后制成5μm厚的切片，贴附于用多聚赖氨酸涂片的玻片上.ET-1鼠抗人mAb、鼠抗人α-SMA mAb、S-ABC即用型试剂盒、DAB试剂盒（均为博士德公司提供）.
1.2 方法 切片浸入7.5mL L-1 h3 O2 -PBS，37℃30min，封闭内源性过氧化物酶;正常羊血清封闭消除非特异性染色;滴加α-SMA鼠抗人mAb（1 200）和ET-1鼠抗人mAb（1 200），湿盒4℃过夜，漂洗5min×3次;滴加生物素化兔抗小鼠IgG（1 200），湿盒37℃孵育30min;滴加SABC复合物，37℃孵育30min;DAB显色，显微镜下观察，水洗中止反应;苏木素复染，脱水，透明，封片.
2 结果
在14例不同级别的PRM中ET和α-SMA均有阳性表达，在6例PVR/C3级的PRM中，可见细胞成分较多，细胞间质较少，细胞多为圆形，阳性细胞多（Fig1，3）;在8例D级PRM中，细胞成分较少，细胞间质多，阳性细胞少（Fig2，4）.各级增生膜均可见色素颗粒和团块.在PVR/C3膜中，两者均在膜的边缘浓染，胞体呈梭形，胞核呈圆形或卵圆形的阳性细胞.在细胞较多的区域，阳性细胞数目较多，染色较浅淡，胞体为长圆形，胞核呈圆形，在部分阳性细胞中可见色素存在;ET-1表达的较均匀，不但表达在细胞中，在细胞外基质中也有阳性染色;而α-SMA则主要表达在细胞中，在膜边缘呈节段分布（Fig1，3）.在PVR/D膜中，α-SMA在膜的中央和边缘均见一些强阳性细胞，胞体呈狭长的梭形，与标本的长径走行方向平行（Fig2）;而ET-1在组织的中央区域阳性细胞较少，分布无方向性.在膜表面染色明显加深，细胞外基质中棕色均匀染色.在膜的中央部可见散在的淡染的细胞，细胞和核呈圆形或椭圆形（Fig4）. 图1 －图4 略
3 讨论
ET-1和α-SMA表达有明显的同步现象，即随着细胞向梭形细胞的转化表达增强.同时两者的表达又有差异，在PVR/C3级的PRM中，α-SMA在膜表面呈节段分布，说明其表达在细胞中;而ET-1在膜表面均匀加深，说明不但表达在细胞中而且分泌在细胞外基质中;在PVR/D级的PRM中，α-SMA在膜的中央部位有强表达，阳性细胞与膜的收缩方向平行，而ET-1均匀地表达在膜的中央部，在膜的表面表达较强.这些表达上的差异说明了两者在增生膜的收缩行使不同的功能.
ET-1是内皮素的一种异构体［3］ ，不但促进血管平滑肌的收缩，而且参与全身许多组织的损伤修复，促进肝、心、肾和肺窦的星形细胞活化为类肌原母细胞，产生并增加α-SMA和细胞外基质数量，其结果是造成组织纤维化［5］ .α-SMA是一种表达在多种类型细胞胞质中的具有收缩功能的细胞骨架微丝结构，是细胞移行和具有收缩功能的基础.从膜中可见大量的色素团块和一些色素细胞，说明RPE参与PVR，RPE通过移行、增生，部分RPE表现出肌成纤维细胞样特征，合成胞外基质，具有特殊的微丝微管结构，有自身收缩功能，并能够介导胶原等胞外基质的收缩［6］ .因此，ET-1与组织的损伤修复和细胞外基质的作用关系密切.
PVR是眼内过度修复过程，RPE是主要的参与细胞.Udono等［7］ 证明，缺氧时，体外培养的RPE分泌内皮素.本研究中ET-1在细胞外基质中的阳性表现可能是转化细胞表达分泌内皮素的结果.α-SMA不但作用膜的边缘，而且是膜内收缩的骨架部分，ET不但有通过细胞介导膜收缩作用，而且ET可通过旁分泌方式直接作用于肌纤维母细胞，介导具收缩功能细胞中α-SMA的收缩，在膜内的收缩中起重要作用.
参考文献
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