作者：崔志利 惠延年 康军 王琳
【关键词】 视神经
关键词: 视神经;损伤;睫状神经营养因子;闪光视觉诱发电位;大鼠
摘 要:目的 观察睫状神经生长因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）对视神经损伤后视觉电生理变化的作用. 方法 采用镊夹视神经法制作大鼠视神经损伤模型，夹伤后立即向球后一次性注射CNTF50ng，并于损伤当时和损伤后1，2，3和4wk时检测夹伤视神经眼的闪光视觉诱发电位（flare-visional evoked potential，F-VEP）. 结果 视神经夹伤后损伤眼F-VEP的P1波振幅（wave amplitude，WA）在1wk时下降，后回升;峰潜时（wave latency，WL）延长.CNTF组中WA在视神经夹伤后1wk和2wk时与对照组相比差异显著（P&<0.05），WL仅在视神经夹伤后1wk时与对照组相比具显著差异（P&<0.05）. 结论 视神经损伤后一次性球后注射CNTF在早期加强了神经系统对损伤的反应强度，促进了视神经损伤后神经冲动传导功能的恢复.
Keywords:optic nerve;injury;ciliary neurotrophic factor;flare-visional evoked potential;rat
Abstract:AIM To study the effects of ciliary neurotrophic factor（CNTF）on changes of flare-visional evoked potential（F-VEP）in the crushed optic nerve rats.METHODS The optic nerve injury models were induced by crushing the optic nerve2mm retrobulbarly.Then an retrobulbar injection of CNTF（50ng）was performed.The F-VEP was observed1，2，3and4weeks after injury.RESULTS The F-VEP P1wave amplitude（WA）of optic nerve-crushed eyes of Spraque-Dawley（SD）rats was decreased at1week after in-jury，then recovered partially later.The P1wave latency（WL）was delayed after injury.At1and2weeks after crush，the P1WA of CNTF group was significantly greater than that of the control groups（P&<0.05）.At1week after crush，the P1WL of CNTF group was shorter than that of the control groups（P&<0.05）.CONCLUSION An retrob-ulbar injection of CNTF after optic nerve crush can enhance the responses of optic nerve system，improve the recovery of nerve impulse transition.
0 引言
视神经损伤往往引起视力丧失［1］ .治疗和功能恢复困难［2］ .研究发现睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）能够促进多种神经细胞的存活，在神经系统发育、分化和损伤修复中具有非常重要的作用［3］ .我们采用大鼠视神经夹伤模型，观察视神经夹伤眼的视觉电生理改变，以评价CNTF对大鼠视神经损伤后功能恢复的作用.
1 材料和方法
1.1 材料 二级成年SD大鼠，2～3mo龄，雌雄不限，体质量200～250g，由第四军医大学实验动物中心提供.自由饮食，在光/暗周期为12h/12h，光照时间6:00～18:00，背景噪音（40±10）db，温度（20±3）℃条件限制下饲养.将实验动物随机分为对照组和CNTF组，各组又分为7，14，21和28d4个时间组，每组5只动物，每只动物进行单眼试验.视神经所采用小号动脉阻血镊前端1mm宽（上海医疗器械厂），所用重组人CNTF购买自美国Sigma公司.
1.2 方法 视神经夹伤模型制作和球后给药:846麻醉剂1mL・kg-1 im，置于手术盘中，消毒手术眼局部，于双目显微镜下切开外眦，打开Tenon囊，分离外直肌并剪断，沿颞侧巩膜表面钝性分离至视神经，于眼球后2～3mm处用小号动脉阻血镊夹压视神经10s，加压时完全闭合阻血镊完成夹伤.治疗组在手术后当时用微量注射器向球后注入CNTF50ng，对照组注入生理盐水10μL.将眼球复位，缝合Tenon囊及外眦，于直接检眼镜下观察视网膜血供良好者纳入试验.为了做到视神经损伤程度一致，在视神经夹伤模型制作时，统一在视神经球后段2mm处采用小号动脉阻血镊进行定量致伤.保证实验眼的眼底血液循环良好是为了避免由于在视神经夹伤中损伤了眼的血供，而影响检查结果［4］ ，根据预实验，视神经夹伤时间定为10s，夹压时间太短，视觉电生理检查值变化不明显，时间太长容易将视神经夹断，导致视电完全消失.不同的测量装置，不同的实验环境检测出的数值差异很大，因此在本实验过程中，均由同一名实验员、在同一台仪器上、在相同的大鼠麻醉深度下进行闪光视觉诱发电位（F-VEP）检测.大鼠846麻醉剂1mL・kg-1 im麻醉，用自制捆绑器将动物捆绑后置于视觉电生理检查仪实验台上.双眼F-VEP检测均在麻药注射后20min时相同的麻醉深度下进行视觉电生理检查.检测参数采用全视野连续白光刺激，频率2Hz，光强5档，记录仪频带宽为0.1～85Hz，迭加次数100，放大倍数10，观测指标为F-VEP的P1波的WA和WL［5］ .
统计学处理:全部数据x ±s表示，应用Micro-cal Origin5.0软件包进行处理，健眼作为对照.CNTF组和对照组各组各时间点的数据之间分别进行配对t检验.
2 结果
正常二级成年SD大鼠F-VEP检查P1波WA为（7.6±1.7）μV，WL为（74.6±7.5）ms（n=17）（Fig1，2）.正常二级成年SD大鼠行球后视神经夹伤后F-VEP检查发现，在一定的夹伤程度下，夹伤当时P1波WA大幅度下降，在夹伤1wk时上升并且超过正常值，到夹伤后4wk时逐渐恢复正常;而P1波WL在夹伤当时显著延长，夹伤1wk以后逐渐恢复正常（Fig1，2）.CNTF治疗组中WA在视神经夹伤后1～2wk时与对照组相比差异显著（P&<0.05），而WL仅在1wk时差异显著（P&<0.05，Tab1）.
VEP潜伏期的长短取决于:刺激引起的冲动沿神经传导的速度，刺激点与记录点之间的距离，传导 路径中所经历的突触数的多少，突触延搁的时间长短表示着神经传导途径中是否有阻滞存在.F-VEP反映的是中心部视网膜机能，检查黄斑部与视路的机能状态，受外界和机体的影响相对较小.闪光刺激引起的诱发电位随刺激光的强度变化而导致其WA和WL大小不同.弱刺激光引起的反应电位小，随着刺激强度增加，反应电位的WL缩短，WA增大.笼统地讲，WA反映黄斑部视网膜感受机能，WL反映视神经传导机能.二级成年SD大鼠行F-VEP检查，通常只能引出N波和P1波，N波变化的意义不大，因此在本实验中将P1波作为观察指标.P1波WA反应刺激的强弱和机体的反应强度，P1WL反应机体发生反应的时间间隔，就是潜伏期［10］ .
图1 － 图2 略
CNTF作为神经营养因子能够促进多种神经细胞的存活，在神经系统发育、分化和损伤修复中具有非常重要的作用.CNTF不仅可以在体外促进RGC存活和生长［6］ ，也可以在体内起作用，显著延缓视神经损伤后RGC细胞的死亡，提高早期存活率.不同种属CNTF之间有较大同源性，人和大鼠、兔子的同源性达85%以上［3］ .体内应用CNTF的有效剂量为50ng.我们首次将CNTF应用于神经损伤局部以促进损伤神经的修复和再生.在SD大鼠视神经夹伤后将50ng（10μL）重组人CNTF一次性注入球后，观察到CNTF对夹伤眼F-VEP P1波WA和WL变化的影响，主要发生在损伤后1～2wk内.夹伤后1～2wk时实验组P1波WA显著高于对照组，说明CNTF在神经损伤早期加强了神经系统对损伤的反应强度.实验组P1波WL在夹伤后1wk时的数值明显低于对照组，说明实验组视神经传导延搁时间在神经损伤后恢复要显著快于对照组.后期作用强度不明显，可能原因在于损伤后一次性给药，不能达到持续促进神经功能恢复所需的药物浓度，从而影响神经功能的持续恢复.
表1 视神经夹伤后闪光视觉诱发电位检查结果 略
参考文献:
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［6］Cui Q，Lu Q，So KF.CNTF，not other trophic factors，pro-motes axonal regeneration of axotomized retinal ganglion cells in adult hamsters ［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，1999;40（3）:760-766.