作者：刘健 宋祖军 袁顺书 陈广生
【关键词】 脱噬作用
关键词: 脱噬作用;热休克蛋白质类70;食道;癌，鳞状细胞;免疫组织化学
摘 要:目的 研究热休克蛋白70（HSP70）在食道鳞状细胞癌中的表达与意义. 方法 采用鼠抗人HSP70单克隆抗体及免疫组织化学SABC法. 结果 在60例食道鳞状细胞癌中，HSP70表达46例（76.7%）.HSP70在食道鳞状细胞癌Ⅰ级中表达强于在食道鳞状细胞癌Ⅲ级中的表达（P&<0.05）. 结论 HSP70在大部分食道鳞状细胞癌中有不同程度表达，HSP70可能参与食道鳞状细胞癌的凋亡调变;其表达与食道鳞状细胞癌分化有关.
Keywords:apoptosis;heat-shock proteins70;esophagus;carcinoma， squamous cell; immunohis-tochemistry
Abstract:AIM To study the expression and significence of HSP70in esophagus squamous cell carcinomas.METHODS Streptavidin-Biotin-peroxidase Complex（SABC）methods，monoclonal antibody against HSP70were employed.RE┐SULTS HSP70immunoreactivity was detected in46out of60cases of esophagus squamous cell carcinoma.The expres-sion of HSP70in esophagus squamous cell carcinoma signifi-cant difference was not found between the different grades in proper order of esophagus squamous cell carcinoma（P&>0.05），and in20low grade（WHO GradeⅠ）esophagus squamous cell carcinomas was higher than that in20cases high grade（WHO GradeⅢ）esophagus squamous cell carci-nomas（P&<0.05）.CONCLUSION HSP70are differently expressed in most of esophagus squamous cell carcinomas and that HSP70may take part in the modulation of apoptosis in esophagus squamous cell carcinomas.
0 引言
食道鳞状细胞癌是一种常见的肿瘤，对食道鳞状细胞癌凋亡调变的研究具有一定意义，这方面的研究文献报道较少.为此我们用免疫组化SABC法，检测了HSP70在60例食道鳞状细胞癌中的表达.
1 材料和方法
1.1 材料 60例食道鳞状细胞癌组织标本来自西京医院，全部病例均经病理诊断证实.其中Ⅰ级食道鳞状细胞癌20例，Ⅱ级20例，Ⅲ级20例.全部标本经40g・L-1 甲醛固定，石蜡包埋，5μm连续切片贴于经APES处理的载玻片.
1.2 方法 （1）免疫组化SABC法步骤如下:①切片脱蜡至水后经30mL・L-1 h3 O2 室温封闭10min;②98℃微波炉修复抗原10min，冷却至室温;③滴加抗原修复液（武汉博士德公司），室温10min;④20mL・L-1 正常山羊血清封闭30min，甩去不洗;⑤滴加鼠抗人HSP70单克隆抗体（SIGMA dilution1∶100）4℃冰箱过夜，37℃孵育50min;⑥滴加生物素化羊抗鼠IgG（武汉博士德公司dilution1∶100）40min;⑦滴加SABC复合物（武汉博士德公司dilution1∶100）40min;除④外每步后均以0.01mol・L-1 （pH7.4）PBS振洗3次，每次5min;⑧DAB-h3 O2 显色5min，苏木精衬染，脱水透明，DPX封固;（2）对照实验:阳性对照为HSP70明确阳性淋巴瘤组织;PBS的代替一抗为阴性对照;（3）结果评定:标本无阳性反应细胞及背景同空白对照者为阴性;标本阳性细胞率介于0%～30%为（+）;标本阳性细胞率介于30%～60%为（）;标本阳性细胞率&>60%为（）.统计学处理:统计阳性标本例数，计算阳性率，各组阳性率的比较用χ2 检验.
2.1 HSP70阳性物质 呈棕色颗粒状，位于磷状细胞癌的胞核和胞质中，在肿瘤组织中阳性细胞以团巢分布为主（Fig1），部分呈局灶性分布，少数散在分布.
图1 略
2.2 HSP70的表达阳性率 60例食道鳞状细胞癌中（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ级各20例）HSP70阳性率为76.7%（46/160例），详细情况:Ⅰ级95.（19/20）其中阴性1例（-），弱阳性1例（+），阳性3例（），强阳性15例（）;Ⅱ级85.0%（17/20例）其中阴性3例，弱阳性1例，阳性11例，强阳性5例;Ⅲ级50.0%（10/20例）其中，阴性10例，弱阳性7例，阳性3例，强阳性0例.
HSP70在Ⅰ和Ⅱ，Ⅱ和Ⅲ食道鳞状细胞癌相互间表达无显著差异（P&>0.05）;但HSP70的表达在Ⅰ级明显强于在Ⅲ级的表达（P&<0.05）.
3 讨论
目前关于HSP和凋亡的研究中存在不同观点. Gabai等［1］ 研究Ehrlich腹水癌（ehrlich ascites carci-noma，EAC）细胞时发现HSP70能促使癌细胞获得对凋亡的抵抗力.Samali等［2］ 转染HSP27或70的V937或Wehi-S细胞，对凋亡的抵抗力增强.但Chant等［3］ 在研究急性髓性白血病（AML）患者的血细胞中，发现HSP70的水平与凋亡率间呈正相关.在60例食道鳞状细胞癌中，46例（76.7%）HSP反应阳性，在不同病例中其阳性反应存在差异，表明HSP不同程度地参与了大部分食道鳞状细胞癌的凋亡，HSP70在Ⅰ和Ⅱ，Ⅱ和Ⅲ食道鳞状细胞癌相互间表达程度无显著差异，这表明HSP70的对凋亡作用在分化差别小的食道鳞状细胞癌中可能很相似.HSP70在Ⅰ级食道鳞状细胞癌中表达明显强于Ⅲ级的表达，提示HSP70的对凋亡作用在分化差别大的食道鳞状细胞癌中可能存在差异.级别低、分化程度高HSP70阳性表达强，反之，HSP70表达弱.
近年来在肿瘤细胞增殖与凋亡关系的研究中，发现细胞增殖活跃往往凋亡也活跃.Carroll等［4］ 研究发现，星形瘤细胞恶性程度越高凋亡指数越大.本研究HSP70在分化程度高的食道鳞状细胞癌中表达强，在分化程度低食道鳞状细胞癌中表达弱，说明HSP70可能参与食道鳞状细胞癌的凋亡调变;其表达与食道鳞状细胞癌分化有关.
参考文献:
［1］Gabai VL，Zamulaeva IV，Mosin AF，Makarova YM，Mosina VA，Budagova KR，Malutina YV，Kabakov AE.Resistance of ehrlich tumor cells to apoptosis can be due to accumulation of heat shock proteins ［J］.FEBS Lett，1995;375:21-26.
［2］Samali A，Cotter TG.Heat shock proteins increase resistance to apoptosis.［J］.Exp Cell Res，1996;223（1）:163-170.
［3］Chant ID，Rose PE，Morris AG.Susceptibility of AMLcells to in vitro apoptosis correlates with heat shock protein70（HSP70）expression ［J］.Br J Haematol，1996;93（4）:898-902.
［4］Caarroll RS，Zhang J，Chauncey BW，Chuntziara K，Frosch MP，Black PM.Apoptosis in astrocytic neoplasms ［J］.Acta Neurochir（Wien），1997;139（9）:845-850.转贴于