作者：夏汝山 刘玉峰 李承新 党育平 万业宏 卢涛
【关键词】 抗角蛋白自身抗体
关键词: 抗角蛋白自身抗体;接触性皮炎;白细胞介素6;白细胞介素8
摘 要:目的 研究同种异体抗角蛋白自身抗体（AK auto Abs）对家兔接触性皮炎模型血清IL-6，IL-8的影响. 方法 24只家兔随机分为AK auto Abs组和对照组，每组12只;AK auto Abs组im药物，剂量为5mg・kg-1 ，1次・2d-1 ，30d;对照组动物以同样方法每次注射2mL生理盐水.ELISA检测血清IL-6，IL-8水平变化. 结果 AK auto Abs组动物血清IL-6，IL-8的水平下降;对照组动物血清IL-6，IL-8的水平升高. 结论 接触性皮炎可诱导IL-6，IL-8的产生;AK au-to Abs则抑制IL-6，IL-8的产生.
Keywords:antikeratin autoantibodies（AK auto Abs）;con-tact dermatitis;interleukin6;interlerkin8
Abstract:AIM To study the influence of homologuous an-tikeratin autoantibodies（AK auto Abs）on serum IL-6and IL-8in rabbit model of contact dermatitis.METHODS 24rabbits were randomly pided into two groups，12rabbits in each group.Animals in AK auto Abs group were intramuscu-larly injected with AK auto Abs（5mg・kg-1 ）every two days for30days，and those in control group were adminis-trated2mL9g・L-1 NaCl in the same way.Modifications of serum IL-6and IL-8levels were measured with ELISA.RESULTS Serum IL-6and IL-8of AK auto Abs group rose，while those of control group established with9g・L-1 NaCl fell.CONCLUSION Contact dermatitis can induce generation of IL-6and IL-8，while AK autoAbs inhibit the generation of IL-6and IL-8.
0 引言
天然抗角蛋白自身抗体（AK auto Abs）是天然自身抗体家族的一员，广泛存在于人及多种动物体内，在机体及皮肤的生理和病理过程中具有重要作用.刘玉峰等［1］ 发现，不同血清AK auto Abs滴度的动物在发生接触性过敏性皮炎时，其炎症反应强度、组织损伤及修复过程有明显的差异.最近研究表明，短期应用AK auto Abs对家兔银屑病样皮炎和接触性皮炎模型具有明显治疗作用［2］ .为了进一步明确大量应用AK auto Abs对机体细胞免疫功能的影响，探索AK auto Abs临床应用的可能及作用机制，我们对照观察了兔源AK auto Abs对家兔血清内细胞因子IL-6，IL-8的影响.
1 材料和方法
1.1 材料 雄性1a龄新西兰白兔体质量1.8～2.2kg由本校实验动物中心（医动字第08-015号）提供;兔角蛋白亲和层析柱参照本室制备人角蛋白亲和层析柱方法制备［3］ ;兔AK auto Abs为本室制备［4，5］ ;IL-6，IL-8试剂盒由本校基础部免疫学教研室提供.
1.2 方法 ①采用亲和层析法从健康家兔混合血清中提取AK auto Abs，透析除盐后浓缩调整浓度至5g・L-1 ;临床注射用生理盐水1mL・kg-1 ;②24只新西兰白兔用饱和硫化钠（Na2 S）溶液涂于所有动物右侧背部一直径10cm区域，造成局部脱毛、皮肤红斑、肿胀及糜烂，诱发接触性刺激性皮炎［6］ ;随机分为治疗组及对照组，每组12只;治疗组im AK auto Abs，剂量为5mg・kg-1 ;对照组im生理盐水2mL，1次・2d-1 ，30d;③im药物前从耳静脉采血，每2wk采血1次，离心后血清-20℃冻存，1mo后处死家兔;④夹心法ELISA［7］ 检测IL-6，IL-8用0.05mol・L-1 pH9.6.Na2 CO3 -NaHCO3 缓冲液稀释包被抗体100倍加入96孔酶标板包被，100μL/孔，4℃过夜;0.5g・L-1 Tween20-PBS液洗涤3次，加30g・L-1 牛血清白蛋白200μL/孔，37℃孵育1h;振洗3次，加待测样品、阴性对照及倍比稀释的标准品，100μL/孔，37℃孵育1h;加酶标抗体:振洗3次，加稀释好的酶标抗体，100μL/孔，37℃孵育1h.振洗3次，加新鲜配制的ABTS显色液，100μL/孔，室温显色15min.ELISA读数仪测410nm处A值，绘制标准曲线.
2 结果
2.1 AK auto Abs治疗后IL┐6水平的变化 在家兔接触性皮炎模型，AK auto Abs组动物治疗后1～5wk血清IL-6水平分别为:0.1403±0.0631，0.1726±0.0835，0.4763±0.2217，0.3067±0.1276，0.1910±0.0843;对照组动物血清IL-6水平升高，分别为:0.3858±0.2076，2.8087±0.5059，2.7297±0.8050，2.4691±0.7435，0.2379±0.0939;经统计学分析，两组动物在2，3和4wk差异显著（P&<0.01）.
2.2 AK auto Abs治疗后IL┐8水平的变化 在家兔接触性皮炎模型，AK auto Abs组动物血清IL-8的水平分别为:0.0639±0.0041，0.0662±0.0086，0.0681±0.0036，0.0678±0.0036，0.0641±0.0055;对照组动物分别为:0.0625±0.0034，0.0656±0.0021，0.1277±0.0081，0.1089±0.0074，0.0693±0.0036;经统计学分析两组动物3，4wk差异显著（P&<0.01）.
3 讨论
AK auto Abs作为天然自身抗体的重要成员之一，自从Krough发现以来，已对其生物学特性、免疫作用及生理、病理意义等进行了深入的研究.Grubauer等认为IgM AK auto Abs在体内可以协助处理由死亡脱落的角质形成细胞产生的自身抗原，在防止免疫系统对角蛋白诱发的炎症反应中起积极作用.我们曾成功地制备了不同血清AK auto Abs滴度的动物模型，发现在炎症性皮肤病，正常滴度的AK auto Abs对组织起保护作用并有利于其修复，并发现AK auto Abs可以抑制炎症、抑制角质形成细胞增殖，参与炎症反应及修复过程［8］ .但AK auto Abs在体内发挥作用的具体机制尚不明确.我们还发现体外培养的角质形成细胞被不同浓度的AK au-to Abs作用后，在IL-1β的作用下，IL-6，IL-8的产生 受抑制［9］ .在过敏性接触性皮炎等炎症性皮肤病，皮损中有IL-8较高水平的表达［10，11］ ，角质形成细胞内有IL-6mRNA水平、蛋白质水平的高表达［12］ .IL-6，IL-8还积极参与各种生理及病理过程［13-15］ .本实验结果表明，在接触性皮炎时，对照组动物血清IL-6，IL-8的水平升高，这与炎症细胞及角质形成细胞至少通过分泌IL-6，IL-8两种细胞因子来维持局部炎症有关.
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