关于自然痰与诱导痰涂片细胞分类计数比较

　　　　　　　　作者：魏为利， 吕寒静， 杨忠民， 洪光朝， 刘瑞麟， 邱忠民

【关键词】 诱导痰
　　【Abstract】 AIM: To investigate the cell viability between induced sputum and natural sputum smear. METHODS: A tenmonth randomized， doubleblinded and controlled trial was conducted in our Department of Respiratory Medicine. Between July 1， 2003 and April 5， 2004， the sputum smears with or without 14 mL of 4% saline inhaled via an ultrasonic nebulizer were harvested randomly at 4 to 5 hours interval and total 43 natural sputum smears and 56 induced sputum smears from 59 patients with respiratory diseases such as asthma， cough variant asthma and chronic obstructive pulmonary diseases were obtained. We pided the 43 induced sputum and the corresponding 43 natural sputum of the same patients into two groups. After the smears of both groups were stained with Giemsa solution， the number and percentage of monocytes， lymphocytes， neutrophils， eosinophila and granulocytes under per high power field were compared between the induced and natural sputum smears of the same patient. RESULTS: Induced sputum and natural sputum were obtained by 95% and 73% respectively (χ2=10.60， P&<0.01). The count of monocytes， lymphocytes， neutrophils and eosinophila of induced sputum and natural one was respectively 45.50±25.41 and 38.50±21.50， 31.25±8.24 and 27.25±7.19， 40.00±21.66 and 32.75±17.73， 3.50±1.53 and 2.50±1.09 under per high power field (P&<0.05) and their percentage was respectively (37.8±21.1)% and (38.1±21.3)%， (26.0±6.8)% and (27.0±7.1)%， (33.3±18.0)% and (32.4±17.6)%， (2.9±1.3)% and (2.5±1.1)%， (P&>0.05). CONCLUSION: Sputum induced by four percent saline inhaled via an ultrasonic nebulizer is more effective than natural sputum for the induced sputum. Cell count is higher but the percentage of monocytes， lymphocytes， neutrophils and eosinophila of induced sputum is the same as that of natural sputum.
　　【Keywords】 induced sputum; Giemsa stain; cell counts
　　【摘要】 目的: 比较诱导痰与自然痰涂片细胞分类计数和留取成功率，为广泛应用诱导痰提供理论依据. 方法: 呼吸道疾病患者59例间隔4~5 h随机先后留取自然痰和0.068 mol/L氯化钠（即4% NaCl）超声雾化的诱导痰，成功地留取合格自然痰标本43份、诱导痰56份. 43位患者的诱导痰和相应的自然痰涂片分为两组，Giemsa染色后比较诱导痰和自然痰两组每高倍镜视野单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞`嗜酸性粒细胞和粒细胞的绝对数，以及每种细胞占粒细胞的百分比. 结果: 诱导痰和自然痰的成功率分别为95%和73%，χ2=10.60， P＜0.01；粒细胞总数分别为120.25±28.16和101.00±23.65个／每高倍镜视野，t=8.37，P＜0.01；单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞数分别为45.50±25.41和38.50±21.50， 31.25±8.24和27.25±7.19， 40.00±21.66和32.75±17.73， 3.50±1.53和2.50±1.09个／每高倍镜视野 P＜0.05，然而，每种细胞占粒细胞的百分比分别为(37.8±21.1)%和(38.1±21.3)%， (26.0±6.8)%和（27.0±7.1）%，（33.3±18.0）%和（32.4±17.6）%，（2.9±1.3）%和（2.5±1.1）%，各组P&>0.05. 结论: 与自然痰相比，雾化吸入0.068 mol/L高渗NaCl溶液后，留取诱导痰的成功率较高，诱导痰中单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞总数增加，但百分比无差别.
　　【关键词】 诱导痰;Giemsa染色;细胞计数
　　0引言
　　对于不能深咳痰的患者，以气溶胶诱导可以激发出强烈的咳嗽反射，由此产生的痰称为诱导痰. 诱导痰的应用不足50 a，诱导痰涂片Giemsa染色细胞分类计数用于呼吸道咳嗽变异性哮喘、嗜酸细胞性支气管炎和感染性疾病的诊断. 目前这种方法多局限于科学研究，临床上尚未广泛应用. 我们总结了我院开展的诱导痰涂片Giemsa染色细胞分析技术，将诱导痰与自然痰相比较，证实了前者的优越性.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　我院呼吸内科自20030701/20040405对门诊和住院患者（慢性支气管炎、支气管哮喘、慢性支气管炎合并哮喘和慢性咳嗽）59例开展留取痰液检查，按下述方法间隔4~5 h随机先后留取自然痰和诱导痰. 室温下以无菌生理盐水漱口3次，鼓励咳出深部痰，留取第一口以后的痰作标本. 患者自行咳出的痰液称为自然痰. 以1.71 mol/L NaCl (10% NaCl) 4 mL和0.15 mol/L NaCl (0.9% NaCl) 10 mL配制而成0.68 mol/L NaCl(4% NaCl)溶液，经超声雾化仪（NEU12; OMRON; ToKyo， Japan）雾化吸入，留取诱导痰. 镜检筛选合格标本(鳞状上皮细胞&<10个/低倍视野、多核白细胞&>25个/低倍视野，或二者比例&<12.5)，成功的留取合格自然痰标本43份、诱导痰56份.
　　1.2方法
　　13份诱导痰标本由于缺少对照样本而被剔除，将43份自然痰标本与对应的诱导痰标本划分为自然痰与诱导痰两组. 涂片染色方法：每份标本均以镊子取痰栓涂片6~8张（高倍显微镜下无细胞重叠且每视野细胞数大于50个为合格痰涂片），自然干燥后以甲醇固定，Giemsa原液(上海虹桥乐翔医用试剂公司)与蒸馏水以2∶9配制成0.1818浓度的稀释液，每张涂片以1 mL Giemsa稀释液染色10 min，再以流水水平方向冲洗同样时间，自然干燥后，两次高倍镜下重复计数不同涂片至少四个视野中400个有核细胞（上皮细胞除外），并分别计数单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的绝对数，计算出每种细胞的百分比，以每高倍镜视野为单位取均值作为记录数据.
　　统计学处理：计数资料作配对比较t检验，百分比作四格表资料的χ2检验.
　　2结果
　　2.1诱导痰与自然痰留取成功率在59例患者中，取得自然痰标本43份，诱导痰标本56份. 四格表资料的χ2检验，得出χ2=10.60， P＜0.01，留取诱导痰较自然痰成功率高（Fig 1）.
　　2.2诱导痰与自然痰涂片细胞分类计数两组痰涂片进行配对比较t检验，每高倍显微镜中单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和总数增加（Tab 1）.表1诱导痰与自然痰涂片细胞分类计数比较（略）
　　2.3诱导痰和自然痰痰涂片百分比诱导痰和自然痰涂片中单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞所占百分比无差别（Tab 2）.表2诱导痰与自然痰涂片细胞分类计数百分比比较（略）
　　3讨论
　　高渗NaCl水雾化吸入诱导痰液的方法是Bickerman于1958年最早提出的，诱导痰脱落细胞病理检查的应用，提高了肺部肿瘤的诊断率. 之后人们又发现诱导痰细菌涂片或培养可以提高肺结核［1］的诊断率，1986年高渗NaCl水吸入诱导痰方法成功地用于艾滋病患者肺炎的诊断［2］. 1992年Pin等［3］首次将诱导痰液方法用于哮喘研究，并率先引入痰涂片细胞分类计数方法，扩大了痰液分析的应用范围. 近十余年来，去细胞诱导痰处理液中嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）、白介素、前列腺素和组胺的测定技术已经用于哮喘的科学研究. 诱导痰的机制尚不十分清楚，可能通过:①渗透盐效应增加水分进入气道；②使黏液变稀，黏液层容易被纤毛带走，从而增加黏膜清除率［4］；③促进黏膜腺体的分泌而促进气道表面黏液的排出等机制而产生痰液. 文献中用于诱导痰的NaCl水浓度自0.15~1.20 (0.9%~2%) mol/L不等［5］，从0.51 (3%) mol/L NaCl开始，在诱导过程中NaCl的浓度会逐渐增加至0.68 (4%) mol/L或0.85 (5%) mol/L［3，6］.

　　本实验我们对0.68 mol/L NaCl诱导痰方法进行研究，显示诱导痰较自然痰留取的成功率显著增高（Fig 1），尽管Bartoli等［7］是将高渗NaCl水和生理NaCl水诱导痰相比较，但是所得结论与本研究有一致之处. 另外，我们研究得出，与自然痰相比诱导痰中白细胞总数和其中的单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞于每高倍镜视野的绝对计数显著增加，而细胞分类计数无差别的结论；本实验结果与诱导痰液中的炎症细胞含量较经纤维支气管镜肺泡灌洗液高［8］的结论相似. 有报道高渗NaCl水吸入后诱导痰中，上皮细胞和肥大细胞释放的ECP和组胺增加，而白三烯和前列腺素的含量无变化，这可能是由于前两者以细胞内储存的形式存在，而后两者则相反［9］. 此结论尚需进一步证实. 由于客观条件的限制，本实验未将痰液预处理后取细胞成分进行精确定量分析；然而本实验过程由同一名不知试验目的医师以镊子捏取痰栓涂片6-8张痰涂片，并且两次重复计数不同涂片的五个视野中至少400个细胞，剔除每高倍镜视野细胞过少和重叠堆积情况，取均值进行比较. 因此该痰涂片细胞分类计数方法虽然简易，但是不影响所得结果的正确性，能够满足基层临床经济和快速检测的需要，适宜推广.
　　呼吸道疾病的早期诊断、疗效与预后评估是呼吸科医务人员的工作目标，诱导痰具有无创、安全、高效、经济和结果客观的优点，因此已成为当前研究下呼吸道炎症非创伤性检测的热点、科研与临床工作必不可少的工具［10］，如诱导痰嗜酸细胞减少说明支气管哮喘［11］与慢性阻塞性肺病［12］对激素治疗反应良好. 相信在不远的将来，痰液细胞分类计数检查亦将如血常规一样在临床中得以广泛应用.
　　致谢感谢血液实验室顾荣泉主任、摄影师徐百强和病理科汤如勇主任的指导，感谢戴燕、郑伟萍和王雪莉医师的帮助.
　　

参考文献

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