抑郁症模型大鼠睾酮水平的研究

　　　　　　 作者：杨利敏 赵华 康玉明　李晶 瘐英兰

【摘要】 目的 观察内源性及外源性抑郁症大鼠模型睾丸及血清内睾酮水平，探讨体内雄激素水平与抑郁症的关系。方法 给予成年雄性大鼠慢性温和刺激21 d，制备外源性抑郁症大鼠模型(CMS组);给予新出生第8天的雄性幼鼠腹腔注射新鲜配制的氯咪帕明(CLI)40 mg/kg体重，至第21天，制备内源性抑郁症大鼠模型(CLI组)。结果 两组抑郁症大鼠强迫游泳实验中的不动时间较正常组大鼠延长(P<0.01)，上窜时间较正常组大鼠明显缩短(P<0.01);开野实验中CMS组大鼠水平跑格数与直立次数均较刺激前明显减少(P<0.001);CLI组大鼠水平跑格次数较正常对照组明显增加(P<0.05)，直立次数明显减少(P<0.01)。CLI组大鼠睾丸内睾酮水平及血清睾酮水平较正常组明显升高(P<0.05)，而CMS组大鼠睾丸内睾酮水平及血清睾酮水平较正常组明显降低(P<0.05)。结论 抑郁症大鼠体内性激素分泌紊乱，不同类型的抑郁症大鼠睾酮水平变化不一致。单相抑郁症大鼠体内雄激素水平降低，双相抑郁症大鼠体内雄激素水平升高。

【关键词】 抑郁症;睾酮;睾丸;大鼠

　　【Abstract】 Objective To investigate the changes of the level of testosterone in two types of depressed rats， and study the relationship between testosterone and depressive disorder. Methods The rats was exposed to chronic mild stress (CMS) such as food deprivation， water deprivation， continuous lighting etc for 21 days. The male rats which born for 8 days were administered chlomipramine (CLI) by intraperitoneal injection till 21 days， then two months later behavioral test and other experimental process were performed. The level of testosterone was detected by radioimmunity. Results The immobility time of two types of the depressed rats were longer than those of control rats (P<0.01) and rearing time were shorter than those of control rats (P<0.01) in forcedswimming test. The crossing times and rearing times of CMS rats were decreased after stress in openfield test (P<0.001). The crossing times of CLI rats were increased (P<0.01) and the rearing times of CLI rats were decreaed (P<0.05) in openfield test. The levels of testosterone of testicle and serum in CLI rats were both increased (P<0.05). But the levels of testosterone of testicle and serum in CMS rats were both decreased (P<0.05). Conclusions There are sexual hormone parasecretion in depressed rats. The changes of testosterone is related with the type of depressive disorder.

　　【Key words】 Depressive disorder; Testosterone; Testicle; Rats

　 抑郁症的发生与性激素分泌水平是否具有相关性报道不一〔1〕，本实验主要观察外源性抑郁症大鼠模型和内源性抑郁症大鼠模型睾丸组织及血清内睾酮水平的变化，为探讨抑郁症对机体性激素水平及性功能的影响奠定基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物分组及模型制备

　　1.1.1 动物 均采用健康雄性清洁级Wistar大鼠，体重180～210 g及出生第8天的雄性幼鼠。由吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供。

　　1.1.2 外源性抑郁症大鼠模型 造模根据文献〔2〕的方法稍加改进。成年雄性Wistar大鼠，首先用强迫游泳实验进行行为评分，选择得分相近的动物20只，随机分为正常组10只;其余10只。每天随机实施禁食、禁水、隔离、光照等不同的慢性刺激，持续21 d，为外源性抑郁症大鼠模型(CMS组)。

　　1.1.3 内源性抑郁症大鼠模型 给予新生第8天的雄性幼鼠腹腔注射新鲜配制氯咪帕明(CLI)40 mg/kg体重，每天1次，直至第21天，停药后任其自由生长〔3〕。2个半月后进行强迫游泳实验，通过与正常组比较不动时间是否延长验证造模是否成功，为CLI组。

　　1.2 方法

　　1.2.1 强迫游泳实验 把大鼠分别放进水温23℃～27℃，水深18 cm的玻璃缸中(40 cm×18 cm)，使大鼠后肢不能靠玻璃缸底部支撑身体。该实验由两部分组成：先进行15 min预游，24 h后观测5 min的游泳行为，记录不动时间、游泳时间和上窜时间。

　　1.2.2 开野实验 用一个100 cm×100 cm×70 cm的敞箱，白色地面用黑笔画成25个方格。沿墙为外周格，其余为中央格。室内为暗光，将动物入中央格，观察5 min内的水平跑格数及直立次数。每次在同一时间观察。

　　1.2.3 睾酮水平检测 根据睾丸组织重量加相应体积生理盐水制成20%组织匀浆，离心取上清液。睾酮放射免疫测定试剂盒购自北京华英生物技术研究所，由专人严格按照试剂盒说明操作，利用均相竞争抑制原理，采用非饱和法。然后利用γ计数器(WH851漩涡混合器γ计数器：核工业部北京仪器厂)进行读数并打印结果。

　　1.3 统计学处理 计量数据均采用x±s表示，组间差异采用单因素方差分析，然后应用q检验进行两两比较。

　　2 结 果

　　2.1 强迫游泳实验结果 正常组与CMS组、CLI组的不动时间总体均数不相等(F=11.6，P=0.000 2);上窜时间3组的总体均数也不相等(F=33.14，P=0.000 0)。与正常组相比，CMS组大鼠的不动时间明显延长，上窜时间明显缩短;CMS组与正常组大鼠不动时间及上窜时间比较均有显著性差异，不动时间延长，上窜时间缩短。无论是CMS组还是CLI组大鼠被迫处于恶劣环境时，大鼠的求生欲望均降低，放弃了逃脱的企图，表现出行为绝望。见表1。表1 各组大鼠强迫游泳实验检测结果与正常组比较：1)P<0.05，2)P<0.01

　　2.2 开野实验 正常组与CMS组、CLI组的水平跑格次数总体均数不相等(F=32.93，P=0.000 0);3组直立次数的总体均数也不相等(F=12.36，P=0.000 0)。与正常组相比，CMS组大鼠的水平跑格数及直立次数均明显减少，有统计学意义，说明在开野实验中也表现出了抑郁的行为，但无焦虑的表现。CLI组大鼠在开野实验中的水平跑格数却明显增加，直立次数明显减少，与正常组大鼠比较也有显著性差异，说明CLI组大鼠出现了明显的焦虑行为。见表2。表2 各组大鼠开野实验检测结果与正常组大鼠比较：1)P<0.05，2)P<0.01

　　2.3 睾丸睾酮水平 3组大鼠睾丸内睾酮水平总体均数不相等(F=13.09，P=0.0002)。CMS组大鼠睾丸内睾酮水平〔(1.64±0.12)g/L〕明显低于正常组〔(4.59±0.93)g/L〕(P<0.05);而CLI组大鼠睾丸内睾酮水平〔(7.66±1.09)g/L〕明显高于正常组(P<0.05)。

　　2.4 血清睾酮水平 3组大鼠血清睾酮水平总体均数不相等(F=14.92，P=0.000 1)。CMS组大鼠血清睾酮水平〔(21.27±2.75)ng/ml〕明显低于正常组〔(41.65±6.25)ng/ml〕(P<0.05);而CLI组大鼠血清睾酮水平〔(248.94±56.08)ng/ml〕明显高于正常组(P<0.05)，与睾丸内睾酮水平变化一致。

　　3 讨 论

　　随着生活及教育水平的逐渐提高，人类对高质量生活水平的追求，导致竞争加剧，压力加大，以及婚姻困扰、失业、贫困、慢性躯体疾病等造成的长期不良处境，从而导致抑郁症的发病率呈现逐年上升的趋势。因此，对抑郁症发病及治疗机制的研究工作已经成为当今科研的主要课题。国内外多个实验室对抑郁症动物模型进行了长期的研究，发现慢性刺激诱导的抑郁症大鼠〔2〕及药物诱导的抑郁症大鼠〔4〕的抑郁行为与人类的抑郁症具有极强的相似性。因此，应用这两种抑郁症大鼠模型研究抑郁症的机制所得到的实验结果是有效的、可靠的，可为人类抑郁症发病机制的研究提供可靠的理论及实验依据。

　　从行为检测实验中发现CLI及CMS组大鼠在强迫游泳实验中的不动时间均较正常组大鼠延长，而上窜时间均缩短，与国外研究结果完全一致〔4〕。表明抑郁症组大鼠出现了抑郁行为，在恶劣的环境中放弃了求生的欲望，表现出了抑郁症的典型症状——绝望行为。在开野实验中CMS大鼠并没有表现出焦虑的行为，而CLI大鼠却表现出明显的焦虑行为，表明CMS大鼠的抑郁为单相抑郁而CLI大鼠的抑郁为双相抑郁。在随后的睾酮检测中发现，CMS大鼠无论是睾丸内睾酮水平还是血清睾酮水平均明显低于正常组大鼠，而CLI大鼠睾丸内睾酮水平和血清睾酮水平均明显高于正常组大鼠。因此推测单相抑郁患者体内性激素水平明显降低，导致患者性欲下降;而双相抑郁患者体内的性激素水平明显高于正常人，性功能可出现增加的表现。性激素水平的变化与抑郁症的分型具有密切的相关性。李强等〔5〕的临床调查结果显示，抑郁症患者性腺轴存在功能失调，有关症状与性激素水平改变无关。结合本实验结果认为，在人类诱发抑郁症的内源性因素和外源性因素可同时并存，因此抑郁症患者体内性激素水平降低和升高的现象均可出现〔1〕，这主要是由于内源性因素与外源性因素的长期相互作用致使下丘脑垂体性腺功能紊乱，导致性激素分泌紊乱，患者性功能与性激素水平的变化不完全一致。

参考文献

　1 喻东山.性激素和抑郁症〔J〕.国外医学·精神病学分册，1999;26:1112.

　　2 Willner P.The chronic mild stress model of depression：valid，reasonably reliable，and useful〔J〕.Psychopharmacology，1997;134:3717.

　　3 Bhagya V，Srikumar BN，Raju TR，et al.Neonatal clomipramine induced endogenous depression in rats is associated with learning impairment in adulthood〔J〕.Behav Brain Res，2008;187:1904.

　　4 Hansen HH，Sánchez C，Meier E.Neonatal administration of the selective serotonin reuptake inhibitor Lu 10134C increases forced swimminginduced immobility in adult rats: a putative animal model of depression〔J〕?J Pharmacol Exp Ther，1997;283:133341.

　　5 李 强，尚翠侠，马现仓，等.抑郁症患者的性激素分析〔J〕.中国神经精神疾病杂志，1999;25(5):2713