作者：徐圣秋，雷雨，李伟东 ，柏璐
【摘要】 目的 确定苍耳草的最佳采收期。方法 用紫外分光光度(UV)法测定不同生长采收期总酚酸的含量。结果 不同采收期苍耳草中总酚酸的含量以5月份最高，5月份之后随生长采收期的延长逐渐降低直到8月份，8月份后逐渐升高。结论 以总酚酸含量为指标，苍耳草的最佳采收期为5月份。
【关键词】 苍耳草;不同采收期;总酚酸;紫外分光光度法;含量测定
Abstract: Objective To determine the optimum harvest period of Xanthium sibiricum Patrin ex Widder. Methods Determination of total phenolic acids (TPA) of Xanthium sibiricum Patrin ex Widder harvested in different periods was performed by ultraviolet (UV) spectrophotometry. Results Xanthium sibiricum Patrin ex Widder harvested in May had the highest TPA content， which gradually decreased with the length of harvest in a time-dependent manner until August and thereafter gradually increased. Conclusion The optimized harvest period of Xanthium sibiricum Patrin ex Widder was May， according to the index of TPA content.
Key words: Xanthium sibiricum Patrin ex Widder; different harvest periods; total phenolic acids (TPA); ultraviolet (UV) spectrophotometry; content determination
苍耳草为菊科植物苍耳Xanthium sibiricum Patr.的全草，以带总苞的果实和全草入药。苍耳草别名为卷耳、地葵、常思、进贤菜、喝起草、佛耳、野茄、痴头婆、粘粘葵、苍子棵等，具有祛风散热、除湿解毒之功效，民间主要用于治疗感冒、头风、头晕、鼻渊、目赤、目翳、风湿痹痛、拘挛麻木、风癞、疗疮、疥癣、皮肤骚痒、痔疮、痢疾等症[1-3]。全草主要含隐苍耳内酯、苍耳内酯等倍半萜内酯以及咖啡酸、1，4-二咖啡酰奎宁酸等酚酸类成分[1]。苍耳全国均有分布，其主要产区有山东的荣城、文登、荷泽，江西宜春，湖北黄岗、孝感，江苏苏州、徐州，安徽等[4]。笔者对江苏徐州不同采收期苍耳草进行分析研究。
近年来有研究报道[5-6]，酚酸类化合物在药理学方面可作为利胆剂和中枢兴奋药，总酚酸具有抗炎、镇痛以及抗过敏作用等。绿原酸(chlorogenic acid，CHA)为众多药材和中成药抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分，同时是质量控制的重要指标。为了临床更科学、合理的用药，因此，实验建立了苍耳草不同采收期总酚酸的含量测定方法。
1 实验材料
1.1 样品来源 苍耳草药材采自江苏徐州，经南京中医药大学药学院陈建伟教授鉴定为菊科植物苍耳Xantliiurn sihiricum Patr.的干燥地上部分。药材来源及采收时间见表1。 表1 样品采集情况
1.2 材料 仪器：Mettler Toledo AG285 十万分之一天平;北京普析通用仪器有限责任公司 TU-1800S紫外可见分光光度计。试剂：化学试剂均为分析纯(南京化学试剂有限公司)，水为蒸馏水，绿原酸对照品(Carl Roth OHG 75 Karlsruhe-West，批号：7ba-13)。
2 方法与结果
2.1 苍耳草总酚酸含量测定方法的建立
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品4.4 mg，置10 ml量瓶中，用50%甲醇水溶液溶解，定容，作为绿原酸对照品溶液(0.44 g/L)。
2.1.2 供试品溶液的制备 取1～6号苍耳草药材适量，20～22℃自然风干，粉碎后过六号目筛，精密称取药材粉末100 mg，置250 ml圆底烧瓶中，加入50ml 50%甲醇，称重，85℃水浴回流加热1 h，放置室温，用50%甲醇补足原重。离心后移取上清液2 ml置于10 ml棕色容量瓶中，定容，作为供试品溶液。
2.1.3 检测波长的选择 将绿原酸对照品溶液和2号供试品溶液于200～400 nm进行扫描，对照品溶液和供试品溶液均在326 nm处有最大吸收峰，故检测波长选择为326 nm。
2.1.4 线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品溶液50、100、200、300、400 μl分别置于10 ml棕色容量瓶中，用50%甲醇定容，以对照品溶液浓度c为纵坐标，326 nm测得的光密度(D)为横坐标，绘制标准曲线。得线性回归方程为c=0.0185D-0.0001，R2=0.9988，绿原酸浓度在0.0022～0.0176 g/L呈良好的线性关系。见图1。
2.1.5 精密度试验 取2号供试品溶液，于326 nm处测定光密度，连续测定6次，结果RSD为0.42%(n=6)，说明仪器的精密度良好。
图1 线性关系考察
2.1.6 稳定性试验 取2号药材制成的供试品溶液每隔1 h于326 nm处测定光密度，结果供试品溶液在6 h内稳定，RSD为0.68%(n=6)。
2.1.7 重现性试验 精密称取2号药材粉末100 mg，共5份，按供试品溶液制备方法操作，于326 nm测定光密度，结果RSD为0.98%(n=5)，表明本方法重现性良好。
2.1.8 加样回收率试验 精密称取2号药材粉末50 mg，共5份，置于100 ml圆底烧瓶中，加50%甲醇25 ml，加入浓度为4.4 mg/L绿原酸溶液25 ml，按供试品溶液制备方法操作，于326 nm处测定光密度，结果平均回收率为102.91%，RSD为2.45%(n=5)，结果见表2。
2.2 总酚酸的含量测定 精密称取1～6号药材粉末各100 mg，按供试品溶液制备方法操作，在326 nm处测定光密度，将数据代入标准曲线计算出药材中总酚酸的含量，结果见表3。表2 绿原酸加样回收率试验(n=5) 表3 样品总酚酸含量测定(n=5)
3 讨 论
本实验采用紫外分光光度法、以绿原酸为参照、在波长326nm处测定总酚酸含量，其可行性分析结果证实：此方法的准确性、精密度、稳定性、加样回收率、线性关系均较好。
不同采收期的苍耳草中总酚酸的含量测定结果显示，以5月份含量最高，5月份之后随生长期的延长含量逐渐降低，8月份后又逐渐升高，至9、10月份趋于平稳。不同的生长期、植株形态、光照时间、温度可能是引起苍耳草中总酚酸含量变化的因素。
作为药用，苍耳草的采收季节还要结合其他有效成分的含量、药材产量、综合评定方可确定。
参考文献
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[2] 沈连生.中药图典[M].北京:华夏出版社，2006:7.
[3] 孟繁智.新编中草药图谱大典(上卷)[M].贵阳:贵州科技出版社，2003:590.
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[5] Ellnain M，Wojtaszek G.High-performance liquid chromatography and thin-layer chromatography of phenolic acids from Ginko biloba L.leaves collected within vegetative period[J].J Liq Chrom & Rel Technol，1999，22(9):1457-1471.
[6] 张鞍灵，马琼，高锦明，等.绿原酸及其类似物与生物活性[J].中草药，2001，32(2):173-176.