益骨口服液对去势大鼠骨密度与骨生物力学的影响

　　　　 作者：姚新苗 徐禄基 冷涛 张云鹏 方芳

【摘要】 [目的]探讨益骨口服液对实验去势大鼠骨密度和骨生物力学变化的影响。[方法]将大鼠随机分为A、B、C、D、E五组，A组(10只)为正常对照组(假手术); B组(10只)为模型组(造模后给予蒸馏水亦即空白组);C组(10只)为阳性对照组(切除双侧卵巢并予以倍美力治疗);D组(10只)为高浓度组(造模后给予含生药1.5g/ml益骨口服液治疗);E组(10只)为低浓度组(造模后给予含生药0.5g/ml益骨口服液治疗)。灌胃12周后，活杀各组动物，以双能 X线测定骨密度及三点弯曲试验测生物力学指标。[结果]治疗组骨密度明显高于模型组(P<0.05)，骨生物力学性能较模型组得到明显改善(P<0.05)。结论：益骨汤能促进骨形成，能提高骨强度及生物力学性能。

【关键词】 益骨口服液;骨密度;骨生物力学;去势大鼠

　　Abstract： [Objective] To observe the effect of YiGu Oral Solution on bone structure and bone biomechanics.[Methods]Rats were randomly pided into A，B，C，D，E five groups，A group(10)for the normal control group(sham operation);B group(10)as a model group(distilled water model that is，after the blank group);C group(10)for the positive control group(resection of bilateral ovarian and western medicine treatment Premarin);D group(10)for the high concentration group(model after treatment with 1.5g/mlYiGu Oral Solution Pharmacognosy );E group(10)for the low concentration group(model after treatment with 0.5g/mlYiGu Oral Solution pharmacognostic).Twelve weeks after oral administration of live animals in each group to kill in order to dualenergy Xray density of bone mineral density determination.[Results]BMD was significantly higher than the model group(P<0.05)，than the mechanical properties of bone biology has marked improvement in the model group(P<0.05).[Conclusion] YiGu Oral Solution can promote bone formation and improve the mechanical properties of bone biology.

　　Key words：YiGu Oral Solution;bone mineral density;bone biomechanics;ovariectomized rats

　　Fund project： Item supported by Zhejiang Provincial Scitech Bureau(No.2007C33019) 绝经后骨质疏松症是中老年妇女常见的骨代谢性疾病[12]。通过建立去势大鼠骨质疏松症的动物模型，探索益骨口服液防治骨质疏松症的作用机制。补肾健脾是中医治疗此骨质疏松症的方法之一，本实验将以补肾健脾胃为主的中药复方益骨口服液应用于去势大鼠的骨质疏松模型，观察其对大鼠骨密度及骨生物力学的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验药物 益骨口服液水提液：①按照益骨口服液的提取与成型工艺，由浙江中医药大学实验制剂中心加工。②倍美力水溶液：美国惠氏艾尔斯特制药公司艾尔斯特药厂制造，生产批号0502090，国药准字(2001)J51(2)号。水溶液浓度为9.4ug/ml。③氯氨酮：上海第一生化药业有限公司生产，批号沪卫药准字 (1995)第 001064号。

　　1.2 实验动物 取12周龄的雌性wistar大鼠50只，体重约200g左右(由浙江中医药大学实验动物中心提供)，饲养室保持良好通风，室温控制在(21±1)℃，湿度63%，噪音<55分贝，自由摄食、饮水，光照与黑暗时间为每12h交替。

　　1.3 造模方法 腹腔注射氯氨酮(5μg/100g)麻醉条件下，打开B、C、D、E组大鼠腹腔去除双侧卵巢，逐层缝合;A组大鼠仅予以单纯剖腹后立即关闭。造模期间的首3天，肌注青霉素4万u/只，预防感染。

　　1.4 饲养与给药 造模后大鼠分笼予以常规饲料喂养，第4天起开始给药。正常对照组、模型组每天以蒸馏水 10ml/kg灌胃;阳性对照组每天用浓度为9.4ug/ml的倍美力水溶液以10ml/kg灌胃;高浓度组、低浓度组每天分别用1.5g/ml、0.5g/ml 的益骨口服液以10ml/kg灌胃。整个灌胃过程持续12周。

　　1.5 观察指标 采用美国 LUNAR公司DPXL型双能X线骨密度仪测定大鼠脊柱与左股骨上干骺端骨密度以万能电子材料试验机作整骨三点弯曲试验。最大载荷20kg，两端跨距20mm，加载速度5mm/min，检测过程由计算机自动描记股骨的载荷——变形曲线。

　　1.6 数据处理 采用SPSS12.0统计软件包进行统计。各组数据采用x±s表示，各组数据间比较用t检验，计数资料采用x2检验。以P<0.05为显著性差异，P<0.01为非常显著性差异。

　　2 结果

　　阳性对照组、正常对照组的骨密度均明显高于模型组，有非常显著性差异(P<0.01)。高浓度组、低浓度组的骨密度亦均明显高于模型组，有非常显著性差异(P<0.05)。高浓度组、低浓度组与阳性对照组、正常对照组之间差异有统计学意义(P< 0.05)。高浓度组与低浓度组之间亦有明显差异(P< 0.05)。如表1所示。表 1 益骨口服液对去势大鼠脊柱与股骨上端骨密度变化的影响与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01;与高低浓度(益骨口服液)组比较，△P<0.05

　　正常对照组、高浓度组、低浓度组、阳性对照组弹性载荷、最大载荷均明显高于模型组，有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。高浓度组、低浓度组、阳性对照组弹性载荷、最大载荷、低于正常对照组，但明显高于模型组。(P<0.05)高浓度组与低浓度组二者之间亦有明显差异(P< 0.05)。如表2。表 2 益骨口服液对去势大鼠左股骨生物力学变化的影响

　　3 讨论

　　就骨质疏松的诊断而言，骨密度测量是目前最有帮助的放射学检查方法[3]。模型组脊柱BMD 和股骨BMD 较正常对照组明显下降，差异均有统计学意义，BMD 降低是骨质疏松时骨变化的重要特征，国内外学者一致认为双能X线骨密度仪是测量大鼠BMD 的精确、有效方法，本实验采用双能X 线密度仪对大鼠脊柱和股骨进行了检测，结果其他各组明显高于模型组。

　　益骨口服液能够显著提高实验性骨质疏松模型大鼠的载荷，提示益骨口服液在有效抑制模型鼠股骨干材料和结构的变化方面有确切的作用。现代医学认为，骨质疏松症是由于骨代谢失调，骨的丢失大于骨的重建，结果导致骨量丢失，骨小梁结构破坏，骨强度下降，而导致骨折风险升高的一种全身性代谢障碍的退行性骨骼疾病[48]。临床表现为腰背肢体疼痛、畸形、骨折等。中医认为“肾亏脾虚”是“骨枯”、“骨痿”的基本病因。骨质疏松症的主要症状是疼痛，“瘀则必痛”，“久病必瘀”是骨质疏松症的基本病理变化。对骨质疏松症的辨证论治强调从脾肾入手，以补肾益脾化瘀为治疗大法。本实验所采用益骨口服液(主要成分：山药、枸杞、丹参、骨碎补、补骨脂等)。以骨碎补、补骨脂补肾壮骨，山药、枸杞健脾养肝，丹参活血化瘀，有机配伍，相得益彰。

参考文献

　[1] 过邦辅编译.临床骨科生物力学基础[M].上海：上海远东出版社，1993：125.

　　[2] Liu KJ，Wang WJ，Li DJ，et al.Effects of Gengnianchun Recipe on bone mineraldensity，bone biomechanical parameters and serum lipid level in ovariectomized rats[J].Chin J Inteqr Med，2006，12：132136.

　　[3] 郭世绂，罗先正，邱贵兴.骨质疏松基础与临床[M].天津：天津科学技术出版社，2001:221.

　　[4] 陈宝龙，冯坤，王健智.补肾健脾方药对卵巢切除大鼠骨生物力学的影响[J].辽宁中医杂志，2001，28.

　　[5] 邵金莺.龙牡壮骨药对大鼠实验性骨质疏松的影响[J].中药药理与临床，1989，5(4)：2527，36.

　　[6] Huang F，Wu X N，Wang J L.Effects of Chinese medicine of kidneytonifing on bone biomechanics in ovariectomized rats[J].Chin J Gerontology，2004，24： 549550.

　　[7] Cui W，ShiZZ，Liu CL.Mineral redistribution and decrease in bonebiomechanical competence in rats with simulated weightlessness[J].Chin J of Osteoporo，1998，4：911.

　　[8] Huang JM，Bai JM，Zhu DB.The application of Stevens quality and test systems on bone mechanical[J].Chin J Osteoporosis，2003，9：276278.