正糖钳技术观察降浊合剂对大鼠胰岛素敏感性的影响

　　　　 作者：龚文波 陈霞波 周建扬 周开 贺娟 陈民利 王晖

【摘要】 [目的]采用正糖钳试验观察比较降浊合剂对Wistar大鼠胰岛素敏感性的影响。[方法]雄性Wistar大鼠32只，随机分成降浊合剂高剂量组、降浊合剂低剂量组、罗格列酮组、正常对照组各8只，各组灌予相应的药物7天后，大鼠腹腔麻醉，观察大鼠正糖钳试验稳态下的血糖(BG)和葡萄糖输注速率(GIR)。[结果]降浊合剂可明显降低大鼠正糖钳试验稳态下的血糖(BG)，提高稳态下的葡萄糖输注速率(GIR)。[结论]降浊合剂能提高胰岛素抵抗大鼠机体组织对外源性胰岛素的敏感性。

【关键词】 降浊合剂;罗格列酮;正糖钳;胰岛素敏感性

　　Abstract：[Objective] To observe the effect of jiangzhuo Mixture(JZM)on insulin sensitivity in Wistar rats by using the glucose clamp technique.[Methods]32 male Wistars were randomly pided into normal control group，control group treated with rosiglitazone and two experimental groups treated with high or low dose JZM.After durations of 7 days with corresponding treatment by intragastric administration，the blood glucose(BG)in homeostasis and glucose infusion rate(GIR)of each group is observed by using the glucose clamp technique.[Results]JZM can decrease the blood glucose(BG)in homeostasis and increase glucose infusion rate(GIR)obviously.[Couclusion]JZM can improve the insulin sensitivity in insulinresistancerats.

　　Key words： jiangzhuo Mixture(JZM);rosiglitazone;glucose clamp technique;insulin sensitivity

　　中药复方降浊合剂是根据我院国家级名老中医、主任中医师王晖多年临床用药经验，由我院制剂室配置的纯中药制剂，功能为补气升清降浊，该药在临床应用中对于治疗2型糖尿病属肥胖气虚痰浊型有较好的疗效[1]。本研究观察了降浊合剂对胰岛素钳夹Wistar大鼠稳态下的血糖(BG)和葡萄糖输注速率(GIR)的影响，并与阳性对照药—罗格列酮进行了比较。

　　1 实验材料

　　1.1 药品 降浊合剂浓缩液：棕色液体、500ml/瓶，生药浓度5g/ml，组成：生黄芪、丹参、生苍术、生薏苡仁、生麦芽、生扁豆、绞股蓝、生鸡金、生葛根，宁波市中医院提供。罗格列酮：商品名文迪雅，4mg/片，批号：h30020475。胰岛素注射液：江苏万邦生化医药股份有限公司，400U/10ml/瓶，批号：0404208。

　　1.2 仪器 WZ50C2型单道微量注射泵：浙江大学医学仪器有限公司生产。OneTouchR Ultra血糖仪、试纸：强生(上海)医疗器材有限公司。

　　1.3 动物 Wistar大鼠，SPF级，体重300～400g，32只，雄性，由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物质量合格证：SCXK(沪)20020010。自来水过滤灭菌，置于高压灭菌的饮水瓶中自由饮用，灭菌大鼠全价营养颗粒饲料，自由采食。

　　2 实验方法

　　2.1 分组、给药 Wistar大鼠32只，随机分为正常对照组、高剂量降浊合剂组、低剂量降浊合剂组和罗格列酮组各8只，各组体重无显著性差异。各组灌予相应的药物7天：空白对照组予生理盐水10ml/(kg·d)，阳性对照组(罗格列酮20mg/(kg·d)、高剂量降浊合剂组(降浊合剂浓缩液 20ml/kg·d)、低剂量降浊合剂组(降浊合剂浓缩液10ml/(kg·d)

　　2.2 稳态血糖(BG)和葡萄糖输注速率(GIR) 末次给药前禁食不禁水4～6h，给药30min后，大鼠腹腔麻醉。仰位固定于大鼠固定板上，切开颈部正中皮肤。分离右侧颈外静脉，结扎远心端，用眼科剪作切口，向近心端插入连接三通旋塞的插管(插管中预先注入80u/ml肝素生理盐水溶液)。用眼科镊夹住静脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。分离左侧颈总动脉，结扎远心端，用小动脉夹夹住近心端，用眼科剪作切口，往近心端反向插入连接1ml针筒的插管(插管中预先注入50μ/ml肝素生理盐水溶液)。放开小动脉夹，用眼科镊夹住动脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。颈静脉注射50μl/ml肝素0.1ml/100g作预防抗凝。三通旋塞龚文波，等: 正糖钳技术观察降浊合剂对大鼠胰岛素敏感性的影响的一个进口连接胰岛素输注微量泵另一个进口连接20%葡萄糖输注微量泵，避免管腔中出现气泡。待插管手术和输注装置安装完毕后，开始实验。用1ml针筒从右颈动脉取血0.5ml，用手术钳夹住插管，用OneTouchR Ultra血糖仪和试纸测定基础血糖约需5μl，放开手术钳，将剩余血再注回颈总动脉，插管头上加50ul肝素生理盐水溶液。胰岛素以速率为0.6ml/h(10μl/min)恒速输注，胰岛素输注10min后，以上述同样方法取右颈动脉血测血糖值，如血糖低于基础值，则开始输注20%葡萄糖，每隔10min取血，测定血糖。根据血糖值不断调整葡萄糖输注速率，使血糖维持在5mmol/L上下，一般60min左右可达稳态。达稳态后，每5min取血测血糖，记录稳态下6～8次葡萄糖输注速率的平均值作为稳态葡萄糖输注速率(GIR)，取稳态下6次血糖的平均值作为稳态下的血糖(BG)。

　　2.3 统计方法 所有数据均采用平均值±标准差(x±s)，计量资料两组间比较应用t检验，多组间比较采用方差分析。统计软件为spss for windows10.0。

　　3 实验结果

　　图1 各组大鼠GIR时间变化过程3.1 各组大鼠GIR时间变化过程 如图1，各组大鼠以速率为0.6ml/h(10μl/min)恒速输注胰岛素，空白对照组GIR迅速下降，60min时葡萄糖输注速率(GIR)均值降低至0.13ml/h，120min时降至0.06ml/h。高、低剂量降浊合剂组和阳性对照组大鼠GIR分别达到1.21ml/h、1.04ml/h和1.59ml/h后开始下降，最低值分别为0.89ml/h、0.59ml/h和1.35ml/h，100min后回升至初始值，并有继续上升的趋势。

　　3.2 各组大鼠间BG、稳态GIR的比较 高、低剂量降浊合剂组和罗格列酮组大鼠在70～110min稳态血糖(BG)的平均值显著降低，稳态下的葡萄糖输注速率(GIR)显著升高(P<0.01)。高、低剂量降浊合剂组GIR均值显著低于罗格列酮组。见表1。表1 各组大鼠正糖钳试验稳态下(70～110min)与正常对照组比较，*P<0.01;与罗格列酮组比较，△P<0.05

　　4 讨论

　　中药复方降浊合剂功能为补气升清降浊，该药在临床应用中对于治疗肥胖2型糖尿病属气虚痰浊型者有较好的疗效。前期研究提示降浊合剂能有效降低MSG大鼠血清胆固醇，具有明显改善大鼠空腹胰岛素水平、减少MSG大鼠生长过程中机体脂肪含量、明显降低其游离脂肪酸水平等作用[2]。

　　高胰岛素—正常血糖钳夹技术用于测定组织对胰岛素敏感性的定量分析，目前仍是测定机体胰岛素敏感性的“金标准”。本试验中观察到降浊合剂可明显降低胰岛素钳夹winstar大鼠的稳态血糖(BG)，提高稳态下的葡萄糖输注速率(GIR)，提示该中药复方制剂短期内可有效改善大鼠机体组织对外源性胰岛素的敏感性。

　　现代医学研究认为本复方中黄芪、丹参、葛根、绞股蓝、苍术等均有一定的改善胰岛素抵抗作用，如黄芪、丹参、葛根改善胰岛素敏感性的机制可能与调控脂肪细胞分布、增强脂肪细胞对葡萄糖摄取和利用的能力有关，苍术苷对体内巴斯德效应(paster effect)具有抑制作用，从而加速了糖代谢等，但作为复方制剂，其作用靶点尚待进一步研究。

参考文献