四妙合萆薢渗湿汤对急性痛风性关节炎的IL1β、PGE2的影响的实验研究

　　　　 作者：叶红芳 黄平 应华忠 寿旗扬

【摘要】 [目的]对四妙合萆薢渗湿汤治疗实验性大鼠急性痛风性关节炎的作用进行实验研究。[方法]采用向大鼠踝关节腔注射尿酸钠溶液建立急性痛风性关节炎模型，将四妙合萆薢渗湿汤用于模型的治疗，并与秋水仙碱做组间对照，观察其对关节肿胀度、关节局部IL1β、PGE2的含量的影响。[结果]1.大鼠踝关节肿胀度：造模后4h，高剂量中药组、中剂量中药组肿胀程度均降低(P<0.05);造模后12h，高剂量中药组、中剂量中药组肿胀程度均显著降低(P<0.01)，低剂量中药组有差异(P<0.05);造模后24h，高剂量中药组、中剂量中药组均有显著差异(P<0.01);造模后48h，高剂量中药组有差异(P<0.05)，中剂量中药组有差异(P<0.05);2.IL1β：高剂量中药组关节局部IL1β下降(P<0.05);3.PGE2：高剂量中药组关节局部PGE2下降(P<0.05)。[结论]四妙合萆薢渗湿汤能减轻尿酸钠结晶所致急性痛风性关节炎关节肿胀度，能降低关节局部IL1β、PGE2水平。

【关键词】 四妙合萆薢渗湿汤;痛风;关节炎

　　Abstract：[Objective]To confirm the role of simiao bixie decoction for dying dampness in the treatment of experimental acute gouty arthritis.[Methods]Use the treatment of simiao bixie decoction for dying dampness to the model established by injecting monosodium urate(MSU)solution into ankle cavities of the rats，and compare with colchicine，to observe the effect of joint swelling degree，the IL1βand PGE2 contents of the swelling joint.[Results]1st： Rats ankle swelling degree： After rats models of acute gouty arthritis established，high dose and medium dose of Chinese traditional medicine can reduce the degree of ankle swelling in 4h(P< 0.05).High dose and medium dose of traditional Chinese medicine can significantly reduce the degree of ankle swelling in 12h.(P< 0.01)，and low dose group of traditional Chinese medicine has difference compared with model group(P< 0.05).After 24 hours，high dose group and medium dose group of traditional Chinese medicine both have significant difference by principle of statistics(P< 0.01).After 48 hours，high dose group and medium dose group of traditional Chinese medicine have difference by principle of statistics(P< 0.05).2nd： IL 1β contents： High dose of traditional Chinese medicine can reduce the IL1β contents in swelling joints(P< 0.05).3rd： PGE2 contents： High dose of traditional Chinese medicine can reduce the PGE2 contents in swelling joints(P< 0.05).[Conclusion]Simiao bixie decoction for dying dampness can reduce the degree of ankle swelling，reduce the contents of IL 1βand PGE2 of acute gouty arthritis rats models established by MSU.

　　Key words:Simiao bixie decoction for dying dampness;gouty;arthritis

　痛风是嘌呤代谢和(或)尿酸排泄障碍所导致的血尿酸增高的一组异质性疾病，其临床特点为高尿酸血症及尿酸盐结晶、沉积所致的特征性急性关节炎反复发作，主要表现为关节红、肿、热、痛，其主要的病理改变是尿酸钠晶体在关节周围组织沉积引起急性炎症反应。临床根据清热祛湿、解毒消肿、化瘀止痛的原则[12]，运用自拟四妙合萆薢渗湿汤用于治疗急性痛风性关节炎，在控制痛风性关节炎急性发作，减轻受累关节红肿热痛症状等方面有明显疗效。本实验从动物实验角度研究四妙合萆薢渗湿汤对大鼠急性痛风性关节炎IL1β、PGE2的影响，为中药治疗痛风治疗提供实验依据。

　　1 实验材料

　　1.1 实验动物 实验选用普通健康SD大鼠，雄性，体重(200±20)g，60只，由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供，生产许可证：SCXK(沪)20070005。

　　1.2 实验药品及造模药物 秋水仙碱片：昆明制药集团股份有限公司，生产批号：07LJ。四妙合萆薢渗湿汤：由黄柏15g、苍术15g、牛膝15g、薏苡仁15g、萆薢9g、猪苓12 g、茯苓12g、防己30 g、泽泻20 g组成。上述中药均由浙江省中医院中药房提供，为优质生药，由浙江中医药大学制剂室煎成生药浓度为4g/ml。

　　叶红芳，等: 四妙合萆薢渗湿汤对急性痛风性关节炎的IL1β、PGE2的影响的实验研究

　　1.3 主要试剂 尿酸钠晶体：美国SIGMAALDRICH公司，生产批号：2148381。戊巴比妥、BCA蛋白浓度测定试剂盒、大鼠白介素1(IL1)ELISA试剂盒、大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒均由上海西塘生物科技有限公司进口分装。

　　1.4 主要仪器 YLS7A足趾容积测量仪、DENLEY DRAGON Wellscan MK 3酶标仪、Wellwash 4 MK2洗板机、PYXDHS数字显示隔水式电热恒温培养箱、TGL168离心机、规格20200ul移液枪等。

　　2 实验方法

　　2.1 动物分组 将60只大鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组(西药组)、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组，每组10只。

　　2.2 治疗与造模 造模前5天开始治疗。药物剂量按照《中药药理研究方法学》[3]试验动物与人用药量的换算方法换算。各组给药计量分别如下。空白组：生理盐水10ml/kg。模型组：生理盐水10ml/kg。中药高剂量组：每只大鼠灌胃17.16g/kg。中药中剂量组：每只大鼠灌胃8.58g/kg。中药低剂量组：每只大鼠灌胃4.29g/kg。秋水仙碱组：秋水仙碱组每只大鼠灌胃0.48g/kg，每组给药均每日1次，共7天。实验的第五天灌胃后开始造模，大鼠腹腔注射戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉，用5号注射针在受试大鼠右踝关节外侧后方为穿刺点，针口斜面朝前上方与胫骨成45°角穿入踝关节腔，注入50μl尿酸钠溶液(浓度为20mg/dl)到关节腔，以关节囊对侧鼓起为注入目标，空白对照组注射50μl PBS。

　　2.3 观察指标及检测方法

　　2.3.1 测量大鼠关节趾肿胀度 参考《药理实验方法学》大鼠足肿胀法[4]，正式实验时，用记号笔在大鼠右后肢踝关节周围做一标记，在造模前、造模后4h、12h、24h、48h分别测定大鼠右后足容积测算关节肿胀度。造模后72h取下受试关节，用于炎症因子的监测。表1 对尿酸钠结晶急性痛风性踝关节炎大鼠关节肿胀度的影响与空白组比较：**P<0.01，*P<0.05，与模型组比较★★P<0.01，★P<0.05;与秋水仙碱组比较：☆☆P<0.01，☆P<0.05

　　2.3.2 测关节肿胀部位IL1β、PEG2含量的测定 造模后72h处死大鼠，在右踝关节上0.5cm剪断，剪去脚爪，剥去皮肤，剪开周围关节组织，切取关节囊、滑膜等组织移至装有PBS试管中，缓冲液中加入50u/ml的抑肽酶，匀浆后4℃离心，4000r/min，10min，取上清液分装于Eppendorf管中测定相关指标。IL1β、PEG2的测定采用ELISA双抗体夹心酶联免疫法。

　　2.4 统计学方法 计量资料均以均数±标准差(x±sd)表示，多组样本均数的两两比较采用单因素方差分析(oneway ANOVA)，方差齐性检验用Homageneity of variance test，如果方差齐用LSD，方差不齐用Tamhane，s T2统计方法，采用SPSS13.0统计软件进行分析。

　　3 结果

　　对实验性急性痛风性关节炎关节肿胀度的影响 见表1。对IL1β、PEG2含量的影响见表2。

　　4 讨论

　　急性痛风性关节炎是由于尿酸盐结晶沉积引起的炎症反应，针对此机制，Coderre等[5]最早设计了尿酸盐局部局部关节注射的痛风性关节炎模型。黄火高等[6]在 Coderre的基础上进行了改良，采用成年大鼠单个踝关节局部注射尿酸钠的最佳剂量为20mg/ml×50μl动物模型表现出早期急性发作、迅速出现高峰和随后缓解的典型病变过程，更充分模拟了人类急性痛风性关节炎。故本实验采用此法。本实验也证明该造模方法简单、快速、成功率高。表2 对实验性急性痛风性关节炎局部IL1β、PGE2含量与空白组比较，*P<0.05，与模型组比较，★P<0.05

　　现代药理研究证实，四妙合萆薢渗湿汤有较强的抗炎、镇痛作用。本实验显示，四妙合萆薢渗湿汤的高剂量组、中剂量组对MSU所致大鼠关节肿胀均有较强的抑制作用。

　　IL1β是由于尿酸钠与滑膜液中的IgG结合，原位活化A型滑膜细胞、单核细胞产生的。急性炎症时，在IL1β产生的基础上局部PH值降低，更有利于结晶的形成恶性循环，同时，在中性粒细胞趋化、激活过程中起重要作用，是调节炎症启动因素和炎症反应的重要调节剂[7]。本实验显示，四妙合萆薢渗湿汤对急性痛风性关节炎模型动物关节局部炎症因子IL1β有降低作用。通过降低IL1β的水平，可以减少其诱导血管内皮细胞的表达，降低巨噬细胞、粒细胞的活性，同时可以减少刺激单核巨噬细胞等合成IL6、IL8及TNFα，从而减轻炎症反应。

　　痛风性关节炎的病理过程中会出现炎症因子大量释放，造成滑膜和关节周围组织炎症等病变，前列腺素(PG)尤其是PGE2是参与这些病理变化的主要介质[8]。四妙合萆薢渗湿汤对急性痛风性关节炎模型动物关节局部炎症因子PGE2的水平有降低作用，可能因限制对其他疼痛介质的增敏作用，而且弱化其与趋化因子的协同作用，降低局部组织的红肿热痛等炎症反应。

参考文献

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