【摘要】 目的 完善养血安神丸的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中的鸡血藤、墨旱莲；采用高效液相色谱法测定养血安神丸中大黄素的含量。结果 鸡血藤、墨旱莲薄层斑点清晰；大黄素在0.009 92～0.124 0 μg范围线性关系良好，平均回收率为96.2%，RSD＝1.1%。结论 薄层鉴别及含量测定方法均简便易行，重复性好。
【关键词】 养血安神丸；薄层色谱；大黄素；高效液相色谱
Abstract：Objective To improve the quality standard for Yangxue Anshen Pills. Method TLC was used to identify caulis spatholobi and herba ecliptae， and HPLC to determine the content of emodin. Results The TLC spots of caulis spatholobi and herba ecliptae were clear. The linear range of emodin was 0.009 92～0.124 0 μg. The average recovery rate was 96.2%， and RSD was 1.1%. Conclusion The methods are simple and accurate， with good reproducity.
Key words：Yangxue Anshen Pills；TLC；emodin；HPLC
养血安神丸由夜交藤、鸡血藤、熟地黄、生地黄、合欢皮、墨旱莲、仙鹤草7味药材组成，具有滋阴养血、宁心安神之功效[1]。用于阴虚血少之心悸、头晕、失眠多梦、手足心热。原标准中仅有显微鉴别项。为了有效控制质量，确保用药安全有效，本试验增加了鸡血藤和墨旱莲的薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱(HPLC)法测定了夜交藤中大黄素的含量。结果表明，本方法简便快捷，专属性强，结果满意。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10A vp高效液相色谱仪。大黄素(批号110756-200110)、芒柄花素(批号111703-200501)、鸡血藤对照药材、墨旱莲对照药材(批号958-200203)均由中国药品生物制品检定所提供。养血安神丸样品由北京同仁堂股份有限责任公司提供，批号为6072173、6072488、6071697。其他试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
2.1 鸡血藤
取本品2 g，研细，加乙酸乙酯20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取鸡血藤对照药材，同法制成对照药材溶液。再取芒柄花素对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液[2]。空白溶液的制备按处方中各药味的比例，自制不含鸡血藤的样品，按制法项规定制备空白制剂，再按供试品溶液的制备方法制备。照薄层色谱法[(2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB)]试验，吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(30∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白无干扰。
2.2 墨旱莲
取墨旱莲对照药材1 g，研细，加乙酸乙酯20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液[2]。自制不含墨旱莲的样品按制法项规定制备空白制剂，再按供试品溶液的制备方法制备。照薄层色谱法[(2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB)]试验，吸取鸡血藤鉴
别项下的供试品溶液及上述对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白无干扰。
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：Phenomenex Gemini C18 110A(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(55∶45)；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：289 nm。理论塔板数按大黄素峰计算不低于3 000。
3.2 供试品溶液的制备
取本品，研碎，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣加水20 mL使溶解，加盐酸2 mL，三氯甲烷20 mL，加热回流30 min，取出，放冷，分取氯仿层，水层再用三氯甲烷振摇提取3次(20、15、15 mL)，合并三氯甲烷液，用铺有无水硫酸钠适量的棉花滤过，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并定量转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。
3.3 对照品溶液的制备
精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含5 μg的溶液，即得。
3.4 专属性试验
按处方中药味的比例，自配不含制何首乌和夜交藤的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液的制备方法制备并测定。结果空白溶液在与大黄素对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。色谱图见图1。
3.5 线性关系考察
精密量取大黄素对照品的甲醇溶液(0.004 96 mg/mL)2、5、15、20、25 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以大黄素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，大黄素在0.009 92～0.124 0 μg范围内线性良好，其回归方程为：Y＝4.525×104X－0.242 9，r＝0.999 9。
3.6 精密度试验
精密量取同一对照品溶液(0.004 96 mg/mL)，进样10 μL，重复进样6次，RSD＝0.31%。
3.7 稳定性试验
精密量取同一供试品溶液(批号6072173)，进样10 μL，分别于配制后0、5、12、30、55 h，依法测定，结果表明，在55 h内基本稳定，RSD＝1.4%。
3.8 重复性试验
配制供试品溶液共6份，分别精密吸取10 μL，依法测定， RSD＝1.59%。
3.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品约1 g，共6份，分别加入一定量对照品，按样品测定方法处理、测定，计算测定值和回收率。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
3.10 样品测定
测定3批养血安神丸(6072073、6072488、6071697)供试品溶液，各进样10 μL，每份重复进样2次，记录峰面积值，计算大黄素含量。结果见表2。表2 样品中大黄素含量测定结果(略)
4 讨论
试验中对甲醇回流提取时间和三氯甲烷萃取次数进行了选择，考察了回流提取30、60、90、120 min的情况，结果表明，采用甲醇回流提取60 min的方法，水解后溶液萃取3次，提取较为完全。
本试验增加了鸡血藤、墨旱莲的薄层色谱鉴别，色谱斑点清晰，专属性强，空白无干扰；采用HPLC法测定了制何首乌和夜交藤中大黄素的含量，方法简便、重复性好，回收率符合要求，可作为该制剂的质量控制方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准(中药成方制剂)[S].第十六册. 1989.118.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.134，259.