关于HPLC法测定增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量

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论文字数:**** 论文编号:lw2023112226 日期:2025-08-15 来源:论文网

       作者:郭朝晖,魏舒畅,欧阳晓玫

【摘要】 目的 建立增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量测定方法。方法 采用HPLC法,Kromasil C18柱,以乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长283 nm,柱温35 ℃,进样量20 μL。结果 柚皮苷回归方程为:Y=1.989 6×106X-1.243×103,r=0.999 9,线性范围为0.178 5~0.892 5 μg。橙皮苷回归方程为:Y=1.964 9×106X-1.015×104,r=0.999 9,线性范围为0.0736 8~0.368 4 μg。柚皮苷平均回收率为97.24%,RSD=1.21%。橙皮苷平均回收率为96.95%,RSD=1.49%。结论 方法简便、准确,重复性好,可作为增食颗粒的质量控制方法。

【关键词】 增食颗粒;高效液相色谱法;枳实;柚皮苷;橙皮苷

  增食颗粒系由全国名老中医于己百教授的经验方“于氏增食煮散”演化而来,由砂仁、枳实、鸡内金、焦三仙、连翘、蒲公英等组成,经多年临床应用,对于治疗小儿厌食症具有很好的疗效。但原剂型味觉差、服用体积大、携带不方便。根据本方的用途,将剂型改为颗粒剂,不仅方便服用,还能提高制剂的稳定性。为有效控制药品质量,本试验参照相关文献[1-4],以枳实中的柚皮苷和橙皮苷为质控成分,采用HPLC法进行了含量测定方法的研究。结果表明,该法操作简便、快速、重现性好,可用于其质量分析。

  1 仪器与试药

  高效液相色谱仪,Waters 515泵,2487紫外检测器,717自动进样器,Empower色谱工作站(Waters公司);KQ-250B超声波清洗器(昆山超声仪器公司);AE204可变量程电子天平(瑞士梅特勒公司)。柚皮苷(批号0722-200108)和橙皮苷(批号0721-9909)对照品由中国药品生物制品检定所提供;增食颗粒剂由甘肃中医学院药学院提供。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为超纯水。

  2 方法与结果

  2.1 色谱条件

  色谱柱:Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:
乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02);流速:1.0 mL/min;检测波长:283 nm;柱温:35 ℃;进样量:20 μL。对照品、样品及阴性对照色谱图见图1。

  2.2 对照品溶液的制备

  精密称取柚皮苷和橙皮苷对照品适量,加甲醇制成含柚皮苷35.700 μg/mL和橙皮苷14.736 μg/mL的对照品混合溶液。

  2.3 供试品溶液的制备

  取本品10袋,研细,精密称取约0.2 g,置25 mL容量瓶中,加甲醇20 mL,超声处理40 min,放冷,加甲醇定容,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。

  2.4 线性关系考察

  精密吸取柚皮苷和橙皮苷对照品混合溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μL,进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积为纵坐标、含量(μg)为横坐标绘制标准曲线。柚皮苷回归方程为:Y=1.989 6×106X-1.243×103,r=0.999 9,线性范围为0.178 5~0.892 5 μg;橙皮苷回归方程为:Y=1.964 9×106X-1.015×104,r=0.999 9,线性范围为0.0736 8~0.368 4 μg。结果表明,柚皮苷和橙皮苷进样量与峰面积呈良好线性关系。

  2.5 阴性对照试验

  取去枳实的阴性制剂,按“2.3”项下方法制备供试液,按上述色谱条件测定。结果阴性对照溶液在与橙皮苷和柚皮苷相同保留时间处,无色谱峰出现。

  2.6 精密度试验

  精密吸取对照品溶液20 μL,重复进样,按上述色谱条件测定,测得柚皮苷峰面积的RSD=1.03%(n=5),橙皮苷峰面积的RSD=0.57%(n=5)。

  2.7 稳定性试验

  取同一份供试品溶液,在6 h内不同时间进样,测得柚皮苷峰面积的RSD=0.86%(n=6),橙皮苷峰面积的RSD=1.75% (n=6),供试品溶液在6 h内基本稳定。

  2.8 重复性试验

  精密称取同一份样品5份,分别按上述方法制备和测定,柚皮苷含量的RSD=1.57%,橙皮苷含量的RSD=0.84%。

  2.9 加样回收率试验
  
  取已知含量的样品约0.2 g,精密称取6份,分别准确加入对照品溶液适量,按样品测定方法提取、测定,计算回收率,结果见表1、表2。表1 柚皮苷加样回收率试验结果(略)表2 橙皮苷加样回收率试验结果(略)

  2.10 样品测定

  取不同批号的样品,分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,按外标法,用峰面积计算样品含量,结果见表3。表3 增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量测定结果(略)

  3 讨论

  3.1 色谱条件的选择

  在283、286、288 nm处,以甲醇-水-磷酸及乙腈-水-磷酸为流动相系统的分离效果进行了考察,结果表明:3个波长的分离效果接近,在283 nm处,灵敏度较高;以甲醇-水-磷酸为流动相,峰形差,柚皮苷和橙皮苷的分离效果不理想。通过对比,确定以283 nm为检测波长,以乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02)为流动相系统,待测组份保留适中,柚皮苷和橙皮苷的分离度大于2。但应注意酸的浓度增加,柚皮苷和橙皮苷的分离度会下降,酸浓度以0.02~0.04较理想。

  3.2 提取方法的确定

  采用甲醇超声提取的方法,样品处理简单,误差小。通过对20、40、60 min等不同提取时间的考察,以甲醇超声提取较理想

参考文献


[1] 付超美,邹 亮,钱 妍,等.HPLC测定健脾消食颗粒中橙皮苷的含量[J].华西药学杂志,2004,19(4):299.

  [2] 丁桂兰,薛亚光,邢春来,等.HPLC测定橘红丸中柚皮苷、橙皮苷的含量[J].中成药,2004,26(9):707.

  [3] 崔宇宏,常海萍,史宪海.对枳壳中柚皮苷含量测定方法的改进[J].中国药品标准,2005,6(1):46.

  [4] 杨武亮,杨世林,张 敏,等.RP-HPLC法测定枳壳中柚皮苷和新橙皮苷的含量[J].中药新药与临床药理,2005,16(4):261.

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