肺痨康对小鼠结核病模型的免疫指标观察

　　　　 作者：申金贵　叶品良　王帅　卢润生　魏座英

【摘要】 通过肺痨康(FLK)对实验性结核小鼠免疫指标的观察，研究肺痨康的免疫调节抗结核作用，为肺痨康治疗肺结核提供实验依据。［方法］动物造模后，随机分为FLK高剂量组、FLK中剂量组、利福平组，另设空白对照组，分别给予肺痨康、利福平、生理盐水灌胃28天，观察实验小鼠胸腺指数、T淋巴细胞亚群、IFNr、IgG改变情况。［结果］FLK高剂量组能明显增加小鼠胸腺指数（P<0.05）；FLK高剂量组CD4+T细胞数显著升高(P<0.01，P<0.05）；CD8+各组之间比较差异无显著性(P>0.05）；模型组CD4+/CD8+比值显著降低，其差异有显著性(P<0.01)，FLK高剂量组明显减轻CD4+/CD8+比值下降，其差异有显著性(P<0.01)；FLK高剂量组增加小鼠结核模型血浆IFNr和IgG水平(P<0.05)。［结论］肺痨康具有明显免疫调节抗结核的作用。

【关键词】 肺痨康；结核病；免疫功能

　　Abstract: ［Objective］ To study the function of Feilaokang(FLK) in immune regulation and antituberculosis by observing the experimental mice immune indexes， offer experimental base for its treating lung tuberculosis. ［Method］ Randomly pide mice into groups of FLK in high dosage， middle dosage and Lifuping group， set another blank control group， respectively give them FLK， Lifuping and normal saline for 28 days， observe their thymus index， Tsublymphocyte， IFNr and IgG. ［Result］ The highdosage group can markedly increase thymus index， as well as CD4+ and Tcell；there’s no marked difference among all groups on CD8+; the CD4+/ CD8+ ratio is much lower with marked difference， highdosage of FLK can markedly relieve the decrease with obvious difference; FLK in high dosage can increase the level of IFNr and IgG. ［Conclusion］ FLK has marked function of immune regulation and anti tuberculosis.

　　Key words: Feilaokang; tuberculosis; immune function

　　肺痨康由蒸百部、白及、天冬、川贝、紫河车等十一味中药组成，它对肺结核，尤其对耐药性肺结核有较好的疗效［1］。前期实验显示肺痨康对H37RV耐RFP、耐RFP＋INF有较好的抗结核作用［2］。现就肺痨康对实验性结核病小鼠免疫调节的作用观察如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验材料

　　（1）实验动物：昆明种小鼠，雌性，体重18～22g，一级。四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所，合格证号：SCXK（川）200815。（2）实验药物：肺痨康水煎液，药品用常规方法煎煮，制备成含生药1g/ml。所需药品均购自同仁堂药店成都分店。对照药物：利福平(成都锦华药业有限公司，批号：071101。配制方法：RFP先用二甲基甲酰胺一滴溶解后，再用蒸馏水稀释。)。（3）实验用菌：H37RV标准菌（ATCC：27294），由中国疾病预防控制中心临床分中心提供。（4）试剂：T细胞亚群试剂盒(CD3 bs0765R，CD4 bs0647R，CD8 bs0648R)均购自北京博奥森生物技术有限公司。IFNr试剂盒、IgG试剂盒均购自美国ADL公司。（5）实验仪器：生化仪 VARIOSKAN 52510010，离心机 LcgendRT＋230V，光学显微镜BX41。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 动物造模参照文献固定小鼠，尾部用75％酒精消毒，每只小鼠尾静脉注射1mg／ml的结核杆菌悬液0.2ml，注射后穿刺部位压迫止血1min。

　　1.2.2 动物分组动物造模后观察1d，选用符合要求的68只小鼠按随机化原则分为4组：肺痨康高剂量、肺痨康中剂量、模型组、空白组、利福平组共5组，模型组20只，其余每组12只。

　　1.2.3 给药方法

　　自由取水、饮食。造模后第二天给药，以临床用药剂量为标准，按小鼠与人的体表面积折算(0.0026)，空白对照组与模型组每日灌胃生理盐水0.2ml／10mg，连续灌胃28d；利福平组、肺痨康高剂量组、肺痨康中剂量组按小鼠与人的体表面积折算，等剂量灌饲相应药液0.2ml／10mg，每日1次，连续灌胃28d。

　　1.2.4 标本采集与检测

　　各组小鼠均于末次给药测量体重后，在清醒状态下，摘眼球取血，装人肝素抗凝的EP管中。并分离胸腺、脾、肝、肺。免疫组化方法测T细胞亚群，具体按照操作说明进行；胸腺重量指数检测

参考文献

［3］进行；ELISA法检测小鼠血浆IFNr及IgG水平严格按说明书操作进行。

　　1.2.5 统计方法

　　计量资料结果以x±s表示。统计学处理组间差异采用t检验。

　　2 结果

　　(1)实验小鼠T淋巴细胞亚群改变，见表1。表1 实验小鼠T淋巴细胞亚群改变(略)与模型组比较，★★P<0.01，★P<0.05;与正常组比较，▽P<0.01;与利福平组，▼P<0.05．(2)肺痨康对小鼠胸腺重量指数的影响 实验结果，见表2。（3）对小鼠血清IgG及lFNY的影响，见表2。表2 肺痨康对小鼠胸腺重量指数、血清IgG及（略）与正常组比较△△P<0.01，△P<0.05P<0.05；与模型组比较，★★P<0.01，★P<0.05．

　　3 讨论

　　机体的免疫系统是个复杂精细的平衡系统，结核菌感染后，机体的免疫状态是个动态过程。肺结核的发病和转归与机体的免疫功能有关已为公识。提高机体免疫功能主要体现在特异性CD4＋T细胞，CD4＋／CD8＋的比值反应机体免疫内环境是否稳定的一个重要指标，两者平衡决定了免疫反应的总效应，若比值偏离正常值，说明机体免疫功能失调。

　　实验表明肺痨康有明显增加胸腺重量指数，以促进细胞免疫应答加强对结核分枝杆菌的消除；改善实验小鼠CD4＋亚群比例及CD4＋/CD8＋比值的作用，明显提高实验小鼠CD4＋T细胞数量，说明肺痨康是通过CD4＋T细胞细胞毒性作用直接杀灭结核杆菌且通过其介导的免疫提高了巨噬细胞的杀菌效应，以达到治疗结核病的目的。由于CD8＋T细胞多在疾病晚期数量增加，所以本实验中CD8＋T细胞各组间变化无显著性差异。肺痨康所具有的增加IFNr水平、IgG水平的作用，进一步调整了结核小鼠的细胞免疫功能和体液免疫功能。通过本实验说明肺痨康治疗肺结核具有免疫调节的作用。

参考文献

1］叶品良，卢润生，黄秀深，等.肺痨康治疗肺结核69例［J］.江西中医药，2009，40（2）：33.

　　［2］刘婷婷，叶品良，王帅，等.“肺痨康”对耐多药结核分枝杆菌抑菌效力的体外研究［J］.光明中医，2008，（10）：1453.

　　［3］徐书显，赵进沛，刘卫，等.复方中药对小鼠免疫器官和体质量的影响［J］.现代中西医结台杂志，2001，（4）：710.