RPHPLC法测定肉豆蔻煎剂中肉豆蔻醚的含量及变化

【摘要】 [目的]测定肉豆蔻中肉豆蔻醚在沸水后下煎药法中煎出量及变化。[方法]采用RPHPLC法，TigerkinC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，以甲醇∶0.025mol/L磷酸(70∶30)为流动相，流速1.0ml·min-1，波长282nm，柱温25℃。[结果]肉豆蔻醚在0.4μg～2.0μg范围内与峰面积线性关系良好r=0.9998。[结论]肉豆蔻在沸水后下煎药法中，其肉豆蔻醚在汤药中的含量在2.45min达到高峰，其后汤药中肉豆蔻醚的含量逐渐降低。

【关键词】 肉豆蔻;肉豆蔻醚;反相高效液相色谱法

　　Abstract: [Objective]To measure the contents of Nutmeg ether，and its regularity varying with decoction time .[Method]RPHPLC method was used.The chromatographic conditions were listed below TigerkinC18 column (150mm×4.6mm.5μm)，amobine phase composed of metranol-0.025mol/L phosphoric acid (70∶30)，a flow rate of 1mL ·min-1 and wave lengths was 282nm，column temperature was 25 ℃.[Results]In the range of 0.4μg ～2.0μg，the linear was very well between the content of Nutmeg ether and peak area.[Conclusion] The contents of Nutmeg ether in decoction reached the peak at 2.45min after Nutmeg ether was added in boiling water .

　　Key words: Nutmeg; Nutmeg ether; RPHPLC

　 肉豆蔻，为肉豆寇科植物肉豆寇myristica fragrans Houtt的成熟种仁[24]。肉豆蔻醚是肉豆蔻主要有效成分之一，有关它的检测方法国内已有许多报道[5]，本文用RPHPLC法测定在不同时间段肉豆蔻醚在汤药中的含量及变化规律，以确定相关中药汤剂中肉豆蔻后下的最佳煎煮时间，由拟和曲线法算得肉豆蔻醚在2.45min时含量最高，其后汤药中的肉豆蔻醚含量逐渐下降，其方法简便、准确、可靠。

　　1 仪器与试药

　　美国Waters高效液相色谱仪，484紫外检测，510泵，浙江大学N2000色谱工作台，甲醇为色谱醇，水为双蒸水。肉豆蔻醚化学对照品(中国药品生物制品检定所1363700 30808312)，肉豆蔻药材(浙江中医学院中药饮片厂批号080925)。

　　2 色谱条件

　　色谱柱：TigerkinC18柱(150mm×4.6mm，5um)，流动相：甲醇0.025mol/L磷酸(70∶30)，流速：1.0ml/min，检验波长：282nm，柱温25℃。

　　3 方法与结果

　　3.1 对照品溶液制备 精密称取肉豆蔻醚对照品4mg，置于10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得对照品储备液。将对照品储备液按不同比例稀释，分别得质量浓度为400μg/ml，320μg/ml，240μg/ml，160μg·ml，80μg/ml的溶液，待用。

　　3.2 样品溶液的制备 取烧杯1个，加水400ml，调节电压慢火至沸，放入肉豆蔻药材80g开始计时，后用文火煎煮，1～4min内每隔30秒取1次样(每次1ml)，后在第5、6、8、9、10、13、14、16、17min各取1次样，最终提取18种待测样品经离心，取上清液，再经微孔滤膜过滤后待测。

　　3.3 线性范围 精密吸取上述各种对照品溶液各5μl，进样，记录色谱图(见图1)，以对照品峰面积Y为纵坐标，进样量X(μg)为横坐标绘制标准曲线，肉豆蔻醚浓度在0.4～2.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。回归方程：

　　y=280910x-125990r=0.9998(n=5)

　　3.4 精密度，稳定性和重复性 精密吸取肉豆蔻醚对照品溶液20μl，连续进样6次，测定峰面积，计算得RSD为1.48%;分别精密吸取同一样品样品溶液5μl，于0，1，2，4，8h后进样，测定肉豆蔻醚峰面积积分分值，RSD为3.14%，稳定性良好;称取同一批号肉豆蔻药材80g6份，在同一温度、加水量及煎药法下，取样处理后，测定肉豆蔻醚峰面积积分值，RSD为3.74%，重复性良好。

　　A B

　　图1 A.肉豆蔻醚对照品 B.肉豆蔻样品溶液 1.肉豆蔻醚3.5 样品测定 取各时间所提取的样品溶液20μl进样，记录色谱图(见图1)。以煎煮时间为横坐标，样品溶液中肉豆蔻醚的溶出量为纵坐标绘制趋势图(见图2)，以1～4min内趋势图为基准，用二次曲线拟合法求得被测溶液中肉豆蔻醚随煎煮时间的变化方程为：

　　图2 样品溶液中溶出肉豆蔻醚的含量随煎煮时间的变化规律

　　y=-5924.6x2+29059.0x-6812.9

　　微分得：dy/dt=-5924.6×2t+29059.0

　　当dy/dt=0时，t=2.45

　　由此得知，煎煮至2.45min时，汤中肉豆蔻醚溶出量达到高峰。

　　4 讨论

　　本实验采用在沸水中加入药材的方法来模拟肉豆蔻后下的煎煮过程，由于水煮提取肉豆蔻醚的含量相对较低，实验中采用加大入药量的方法以提取样品中肉豆蔻醚的含量，以增加实验的可靠性。由图2及拟合方程分析得知，肉豆蔻后下入药后的最佳煎煮时间为2.45min左右，此时汤中肉豆蔻醚有效成份含量将达到高峰，此后呈现震荡下行趋势，煎煮17min以后将减至高峰时的20%以下。由以上分析得知肉豆蔻在沸水后下煎煮法中，其煎煮时间最好控制在1.5min～3min，该煎药时间段内汤药中的有效成份含量会相对较高。本实验结果为中药肉豆蔻的煎煮方法提供科学依据，对临床科学煎药有一定的指导意义。

参考文献